NobleRyder G9368 β-半乳糖苷酶染色試劑盒，Senescence-Associated β-Galactosidase（SA-β-Gal） Stain Kit

產(chǎn)品貨號：G9368

產(chǎn)品名稱：β-半乳糖苷酶染色試劑盒，Senescence-Associated β-Galactosidase（SA-β-Gal） Stain Kit

產(chǎn)品規(guī)格：100T

β-半乳糖苷酶染色試劑盒 酶類染色

產(chǎn)品簡介：

中文名稱：β-半乳糖苷酶染色試劑盒

英文名稱：Senescence-Associated β-Galactosidase（SA-β-Gal） Stain Kit

規(guī)格：100T

儲存條件：-20℃，避光保存，有效期1年。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder G9368 β-半乳糖苷酶染色試劑盒，Senescence-Associated β-Galactosidase（SA-β-Gal）Stain Kit產(chǎn)品介紹

β-半乳糖苷酶染色試劑盒(β-Galactosidase Staining Kit)是一種基于衰老時SA-β-Gal (senescence-associated β-galactosidase)活性水平上調(diào)而對衰老細(xì)胞或組織進(jìn)行染色檢測的試劑盒。在普通的光學(xué)顯微鏡下就可以觀測到細(xì)胞或組織的衰老情況。本試劑盒可以用于培養(yǎng)細(xì)胞的衰老檢測，也可以用于組織切片的衰老檢測。β-半乳糖苷酶染色試劑盒以X-Gal為底物，在衰老特異性的β-半乳糖苷酶催化下會生成深藍(lán)色產(chǎn)物，光學(xué)顯微鏡下很容易觀察到變成藍(lán)色的表達(dá)β-半乳糖苷酶的細(xì)胞或組織。本試劑盒僅染色衰老細(xì)胞，對衰老前的細(xì)胞(presenescent cells)、靜止期細(xì)胞(quiescent cells)、永生細(xì)胞(immortal cells)或腫瘤細(xì)胞等不會染色。對于組織切片或組織塊，可以檢測的樣品數(shù)量視樣品的大小而定，對于普通的切片也至少足夠檢測100個樣品，使用6孔板測定，足夠測定100個樣品。 

操作步驟：(僅供參考)

注意：配置染色工作液推薦使用聚丙烯(PP)容器，不能使用聚苯乙烯(PS)容器配制染色工作液。

染色過程中的37℃孵育不能在二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行，易造成假陽性染色。

(一)貼壁細(xì)胞染色：

1. 對于6孔板中培養(yǎng)的細(xì)胞，吸除細(xì)胞培養(yǎng)液，用PBS洗滌1次，加入1mlβ-Gal 固定液，室溫固定15min。

對于其它類型的培養(yǎng)板，固定液及后續(xù)溶液的用量參照此比例進(jìn)行操作。

2. 吸除細(xì)胞固定液，用1×PBS洗滌細(xì)胞3次，每次3min。（優(yōu)選步驟見注意事項(xiàng)3）

3. 按照比例配置染色工作液。吸除β-Gal清洗液，每孔加入1ml染色工作液。

4. 37℃孵育過夜12-24h，可以用封板膜或保鮮膜封住6孔板防止蒸發(fā)。

5. 普通光學(xué)顯微鏡下觀察。如不能及時觀察計數(shù)，可以去除染色工作液，加入2mlPBS，2-8℃可以保存數(shù)天；或者加上水性明膠封片劑封片后，可以保存較長時間。

(二)懸浮細(xì)胞染色：

1. 離心收集細(xì)胞至1.5ml離心管內(nèi)，用PBS洗滌1次，加入1mlβ-Gal 固定液，室溫固定15min。固定時可以在搖床上緩慢搖動，以避免細(xì)胞結(jié)成團(tuán)塊。

2. 離心，吸除細(xì)胞固定液，用1×PBS洗滌細(xì)胞3次，每次3min。（優(yōu)選步驟見注意事項(xiàng)3）

3. 按照比例配置染色工作液。離心，吸除β-Gal清洗液，每管加入0.5-1ml染色工作液。37℃孵育過夜12-24h。

4. 取部分染色后的細(xì)胞，滴加到載玻片上或6孔板內(nèi)，普通光學(xué)顯微鏡下觀察。如不能及時觀察計數(shù)，可以離心，去除染色工作液，然后加入1mlPBS，2-8℃可以保存數(shù)天。如果離心，取細(xì)胞用于涂片，加上封片液封片后，2-8℃可以保存較長時間。

(三)組織切片染色：

1. 對于酶保護(hù)處理過的冷凍切片，直接按照以下步驟進(jìn)行。（見注意事項(xiàng)4）

2. 滴加適當(dāng)體積的β-Gal 固定液，以充分蓋住組織為宜，室溫固定不少于15min。

3. 用PBS浸泡洗滌組織3 次，每次不少于5min。（優(yōu)選步驟見注意事項(xiàng)3）

4. 按照比例配置染色工作液。滴加適當(dāng)量的染色工作液。

5. 37℃孵育過夜12-24h。建議使用濕盒防止揮發(fā)或把整個切片浸泡在染色工作液中。

6. 普通光學(xué)顯微鏡下觀察。如不能及時觀察，可使用水性明膠封片劑封片保存 。

注意事項(xiàng)：

1.    β-Gal 固定液有一定的腐蝕性和毒性，操作時請注意防護(hù)。

2.    β-半乳糖苷酶染色反應(yīng)依賴于特定的pH條件，不能在二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行染色反應(yīng)。用于細(xì)胞培 養(yǎng)的二氧化碳培養(yǎng)箱中較高濃度的二氧化碳會影響染色工作液的pH值，而導(dǎo)致染色失敗。

3.    優(yōu)選步驟，在滴加染色工作液之前使用試劑(E):β-Gal染色液C替代1×PBS進(jìn)行清洗和孵育。

4.    半乳糖苷酶穩(wěn)定性較差，在使用多聚甲醛固定或制備石蠟切片時極易滅活，建議制備速凍切片，或使 用酶保護(hù)型專用固定液：G2195-半乳糖苷酶定色劑進(jìn)行固定和冰凍切片制備。組織浸于半乳糖苷酶定 色劑中可穩(wěn)定酶活至少一周。

5.    配制染色工作液時需使用聚丙烯(PP)容器或玻璃容器，不宜使用聚苯乙烯(PS)容器。但染色時對容器 材質(zhì)無要求，例如普通的6孔板就可以用作染色的容器。

6.    爬片或涂片如需長期保存可染色后蒸餾水洗2次，傾去多余液體晾干后中性樹膠封片。

7.    為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

β-半乳糖苷酶染色試劑盒 酶類染色 

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