黃piao呤氧化酶（xanthione oxidase, XOD）試劑盒說(shuō)明書(shū)

分光光度法 50 管/48 樣

黃piao呤氧化酶試劑盒

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

XOD（EC 1.17.3.2）催化黃piao呤氧化生成尿酸和超氧陰離子，是活性氧主要來(lái)源之一；同時(shí)也是核苷酸代謝的關(guān)鍵酶之一。XOD 主要分布于哺乳動(dòng)物的心，肺，肝臟等組織中，當(dāng)肝功能受損時(shí)，XOD 大量釋放到血清中，對(duì)肝損害的診斷具有特異性的意義。

測(cè)定原理：

XOD 催化黃piao呤產(chǎn)生尿酸，尿酸在 290nm 下有特征吸收峰

試劑組成和配制：

自備儀器和用品：

紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1ml 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

粗酶液提?。?/span>

1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1ml 提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。 3、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。

測(cè)定步驟：

1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 290nm，蒸餾水調(diào)零。

2、XOD 檢測(cè)工作液的配制：用時(shí)在每瓶試劑二中加入 15ml 試劑一，充分混勻，現(xiàn)配現(xiàn)用；

3、測(cè)定前將XOD 檢測(cè)工作液 37℃(哺乳動(dòng)物)或 25℃（其它物種）水浴 10min。

4、取 1mlXOD 檢測(cè)工作液于 1ml 石英比色皿中，再加入 35μL 樣本，混勻，室溫下立即測(cè)定 290nm下的初始吸光值A(chǔ)1 和 1min 后的吸光值A(chǔ)2，計(jì)算ΔA＝A2-A1。

XOD 活性計(jì)算：

1、血清（漿）XOD 計(jì)算：

單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol 尿酸定義為一個(gè)酶活力單位。

XOD（nmol/min/ml）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷V 樣÷T=2424×ΔA 2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中XOD 計(jì)算：

按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：每mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol 尿酸定義為一個(gè)酶活力單位。

XOD（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr)÷T =2424×ΔA÷Cpr

按樣本鮮重計(jì)算：

單位的定義：每g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol 尿酸定義為一個(gè)酶活力單位。

XOD（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷（W ×V 樣÷V 樣總）÷T=2424×ΔA÷W

按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：

單位的定義：每一萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol 尿酸定義為一個(gè)酶活力單位。

XOD（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷（500×V 樣÷V 樣總）÷T=4.848×ΔA

V 反總：反應(yīng)體系總體積，1.035×10-3 L；ε：尿酸摩爾消光系數(shù)，1.22×104 L/ mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.05 ml；V 樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時(shí)間，1 min；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500 萬(wàn)。

黃piao呤氧化酶試劑盒