酪an酸解氨酶（Tyrosine ammonilyase，TAL）試劑盒說(shuō)明書(shū)

微量法 100T/48S

酪an酸解氨酶試劑盒 抗氧

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義

TAL 廣泛存在于植物和微生物中，是苯丙an酸代謝途徑的關(guān)鍵酶之一。TAL 能夠躍過(guò)肉桂酸-4-羥基化酶（C4H）直接將酪an酸轉(zhuǎn)化為香dou酸，香dou酸可進(jìn)一步生成白藜蘆醇、柚皮素等具有抗氧化、抗衰老作用的苯bing素類(lèi)天然產(chǎn)物。

測(cè)定原理：

TAL 能夠分解酪an酸產(chǎn)生香豆酸，使反應(yīng)溶液 333nm 下的吸光度隨反應(yīng)時(shí)間而上升，根據(jù)吸光度的變化率可計(jì)算出 TAL 活性。

組成：

自備儀器和用品：

酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、96 孔板（UV 板）、研缽、冰和蒸餾水

粗酶液提?。?/span>

1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1ml 提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱(chēng)取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2、血清（漿）果汁等液體樣品：直接檢測(cè)。

測(cè)定操作表：

1、酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 333nm。

2、準(zhǔn)備 96 孔 UV 板一塊（非普通酶標(biāo)板，普通酶標(biāo)板只能透過(guò)可見(jiàn)光，不能透過(guò)紫外光，檢測(cè)波長(zhǎng)小于 340nm 務(wù)必使用 UV 板）。

3、試劑二的配置：臨用前在試劑二瓶中加入 10ml 試劑一充分溶解待用（用不完的試劑 4℃保存一周，注意現(xiàn)配現(xiàn)用），在 37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃（其它物種）水浴 10min 以上。

4、在 EP 管中依次加入如下試劑

混勻，10000g 4℃離心 5min，取 200μl 上清至 96 孔 UV 板，333nm 下測(cè)定吸光值 A 測(cè)定與 A 對(duì)照，

ΔA=A 測(cè)定-A 對(duì)照

TAL 活性計(jì)算：

1、血清（漿）或果汁 TAL 活性

單位的定義：每分鐘每 ml 血清（漿）或果汁在每 ml 反應(yīng)體系中使 333nm 處吸光值變化

0.005 為一個(gè)酶活力單位。

TAL（U/ml）=ΔA×V 反總÷( V 樣÷V 樣總)÷0.005÷T =35×ΔA

2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞 TAL 活性

按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位定義：每分鐘每 mg 組織蛋白在每 ml 反應(yīng)體系中使 333nm 處吸光值變化 0.005 為一個(gè)酶活力單位。

TAL（U/mg prot）=ΔA×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷0.005÷T =35×ΔA÷Cpr

此法需要自行測(cè)定樣本蛋白質(zhì)濃度。

按樣本鮮重計(jì)算：

單位定義：每分鐘每 g 組織在每 ml 反應(yīng)體系中使 333nm 處吸光值變化 0.005 為一個(gè)酶活力單位。

TAL（U/g 鮮重）=ΔA×V 反總÷(W× V 樣÷V 樣總)÷0.005÷T =35×ΔA÷W

按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：

單位定義：每分鐘每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在每 ml 反應(yīng)體系中使 333nm 處吸光值變化 0.005 為一個(gè)酶活力單位。

TAL（U/104 cell）=ΔA×V 反總÷(500×V 樣÷V 樣總)÷0.005÷T =0.07×ΔA

V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.42ml；V 樣：加入樣本體積，0.04ml；V 樣總：加入提取液體積，1 ml； T：反應(yīng)時(shí)間，60 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500萬(wàn)。

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