多功能氧化酶（(mixed function oxidase，MFO）試劑盒說明書

微量法 100T/96S

多功能氧化酶試劑盒 抗氧

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

多功能氧化酶又稱混合功能氧化酶，可產(chǎn)生降解反應，可使原化學物質變?yōu)榈投镜幕驘o毒的物質從體內(nèi)排出；還可產(chǎn)生激活反應，可使原化學物質轉化為具有親電子性質，導致毒性增強，成為致突變物或終致癌物。近年來對混合功能氧化酶系與外源性化學物質相互作用的深入研究，對于從分子生物學水平上進一步了解外源性化學物質的毒作用具有重要意義。

測定原理：

MFO 催化對硝基苯甲醚產(chǎn)生對硝基ben酚，在 400nm 下有特征吸光值。

組成：

試劑二：粉劑×3 管，-20℃保存；臨用前取一管加入 1.5ml 水溶解，現(xiàn)配現(xiàn)用。

自備儀器和用品：

酶標儀、臺式離心機、可調(diào)式移液器、96 孔板、研缽、冰、蒸餾水、氯仿。

粗酶液提取：

按照組織質量（g）：提取液（ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液），進行冰浴勻漿。12000g 4℃離心 20min，取上清，置冰上待測。

測定步驟：

1、酶標儀預熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 400nm。

2、在EP 管中依次加入如下試劑

分別加入 1000μl 氯仿，充分混勻萃取，靜置 10min，取下層氯仿層 0.6ml 至新的EP 管中。再加入試劑四 0.6ml，充分混勻萃取，取上層水相 0.2ml 于 96 孔板中，400nm 下測定吸光值A 測定與A 空白，△A=A 測定-A 空白。空白管只需測一管。

MFO 活性計算:

標準曲線：y = 0.0119x + 0.0021，R2 = 0.9997；y，吸光度；x,標準品濃度，單位nmol/ml。

按樣本質量計算

單位定義：每g 樣本每分鐘產(chǎn)生 1nmol 對硝基ben酚定義為一個酶活力單位。

MFO（nmol/min/g 鮮重）=（△A-0.0021）÷0.0119×V 總÷(V 樣÷V 樣總×W)÷T

=8.4×（△A-0.0021）÷W

按樣本蛋白濃度計算

單位定義：每mg 組織蛋白每分鐘產(chǎn)生 1nmol 對硝基ben酚定義為一個酶活力單位。

MFO（nmol/min/mg prot）=（△A-0.0021）÷0.0119×V 總÷(V 樣×Cpr)÷T

=8.4×（△A-0.0021）÷Cpr

V 總：最終萃取液體積，0.6 ml；V 樣：反應中樣品體積，200μl；T：反應時間，30min；W：樣品質量，

g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml。

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