脂肪酶（LPS）活性試劑盒說明書

微量法 100/96S

脂肪酶LPS活性試劑盒

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

LPS 又稱甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和單酯）。LPS 廣泛的存在于各種生物中。血清中 LPS 的異常增高常見于胰腺炎和胰腺癌。

測定原理：

LPS 催化油酯水解成脂肪酸，利用銅皂法測定脂肪酸生成速率，即可計算 LPS 活性。

組成：

試劑二：液體 10ml×1 瓶，4℃保存。每次使用前用震蕩混勻器劇烈震蕩 20min。

標準品：液體 10 μl×1 瓶，10 µmol/ml 的標準溶液，4℃保存。臨用前加入 3.168 ml 甲苯，充分溶解。

自備儀器和用品：

研缽、臺式離心機、震蕩混勻器、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板、可調式移液槍、甲苯 80ml、冰和蒸餾水。

粗酶液提取：

組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 試劑一）進行冰浴勻漿。12000g，4℃離心 10min，取上清置冰上待測。

細菌、真菌：按照細胞數量（104 個）：試劑一體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入 1ml 試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；然后 12000g， 4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測。

血清等液體: 直接檢測。

LPS 測定操作：

分光光度計/酶標儀預熱 30 min，調節(jié)波長到 710 nm，蒸餾水調零。

試劑一和試劑二置于 37℃水浴預熱 30min。

在 1.5ml EP 管中依次加入下列試劑

37℃振蕩反應 10 min

37℃振蕩反應 10 min 后，8000g，25℃，離心 10min，取上清液

37℃振蕩反應 5 min 后，靜置 5min，取 200μl 上層液加入微量石英比色皿/96 孔板，于 710nm 處測定吸光值。

注意：空白管和標準管只需測定一次。

LPS 活性計算公式：

組織、細菌或細胞LPS 活性

按照蛋白濃度計算

活性單位定義：37℃中每毫克蛋白每分鐘水解橄欖油生成 1μmol 脂肪酸為一個酶活單位。

LPS (μmol/min/mg prot) = [C 標準品×(A 測定管-A 空白管)÷（A 標準- A 空白管）]×V 反總÷（Cpr×V 樣）

÷T

=16×[(A 測定管－A 空白管)÷（A 標準管- A 空白管）]÷Cpr

按照樣本質量計算

活性單位定義：37℃中每克組織每分鐘水解橄欖油生成 1μmol 脂肪酸為一個酶活單位。

LPS (μmol/min/g 鮮重) = [C 標準品×(A 測定管-A 空白管)÷（A 標準管- A 空白管）]×V 反總÷（W×V 樣÷V樣總）÷T

=16×[(A 測定管－A 空白管)÷（A 標準管- A 空白管）]÷W

按照細菌或者細胞數量計算

活性單位定義：37℃中每 104 個細胞每分鐘水解橄欖油生成 1μmol 脂肪酸為一個酶活單位。

LPS (μmol /min/104cell) = [C 標準品×(A 測定管-A 空白管)÷（A 標準管- A 空白管）]×V 反總÷（細胞數量×V樣÷V 樣總）÷T

=16×[(A 測定管－A 空白管)÷（A 標準管- A 空白管）]÷細胞數量

血清等液體LPS 活性

活性單位定義：37℃中每毫升血清每分鐘水解橄欖油生成 1μmol 脂肪酸為一個酶活單位。

LPS (μmol /min/ml) = [C 標準品×(A 測定管－A 空白管)÷（A 標準管- A 空白管）]×V 反總÷V 樣÷T

=16×[(A 測定管－A 空白管)÷（A 標準管- A 空白管）]

C 標準品：10 µmol/ml；V 反總：反應總體積，0.8ml；V 樣：反應中加入樣本體積，0.05ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：上清液蛋白質濃度，mg/ml，需要另外測定，建議使用本公司BCA 蛋白質含量測定試劑盒；W：樣本質量，g；T：催化反應時間，10 min。

脂肪酶LPS活性試劑盒