肝酯酶（Hepatic lipase，HL）試劑盒說明書

微量法 100T/48S

肝酯酶試劑盒 脂肪酸系列

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義：

肝酯酶是脂肪分解酶，在肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞中合成，存在于肝臟竇周間隙內(nèi)皮細(xì)胞表面和竇周間隙腔面的肝細(xì)胞微絨毛表面，可促進(jìn)脂蛋白中的膽gu醇向類固醇激素轉(zhuǎn)化，血漿中的 HL 活性增高時(shí)，血漿中小顆粒可導(dǎo)致LDL 水平升高，加速動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生。

測(cè)定原理：

肝酯酶水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生α-萘酚，可與固藍(lán) B 鹽形成紫紅色偶氮化合物，在 595nm 有特征吸收峰，顏色深淺在一定范圍內(nèi)與肝酯酶活性成正相關(guān)。

組成：

自備儀器和用品：

天平、冷凍離心機(jī)、研缽、水浴鍋、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板。

樣品處理：

組織：按照質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g，加入 1ml 試劑一）加入試劑一，冰浴勻漿后于 4℃，10000g 離心 10min，取上清待測(cè)。

細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：試劑一體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)胞加入 1ml試劑一）加入試劑一，冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3min）；然后于 4℃，10000g 離心 10min，取上清待測(cè)。

血清：直接測(cè)定。

測(cè)定操作：

計(jì)算公式：

用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下標(biāo)準(zhǔn)曲線：y= 0.1519 x -0.1241，R2=0.9994

按照蛋白濃度計(jì)算

酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生 1μmol α-萘酚為一個(gè)酶活力單位。 HL 活性（μmol /min/mg prot）= （△A+0.1241）÷0.1519×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T

= 6.58×（△A+0.1241）÷Cpr

按照樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活性定義：每克組織每分鐘水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生 1μmol α-萘酚為一個(gè)酶活力單位。 HL 活性（μmol /min/g 鮮重）= （△A+0.1241）÷0.1519×V 反總÷（W×V 樣÷V 樣總）÷T

= 6.58×（△A+0.1241）÷W

按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

酶活性定義：每 104 個(gè)細(xì)胞每分鐘水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生 1μmol α-萘酚為一個(gè)酶活力單位。

HL 活性（μmol /min/104 cell）= （△A+0.1241）÷0.1519×V 反總÷（V 樣×細(xì)胞數(shù)量÷V 樣總）÷T

= 6.58×（△A+0.1241）÷細(xì)胞數(shù)量

按照液體體積計(jì)算

酶活性定義：每毫升血清每分鐘水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生 1μmol α-萘酚為一個(gè)酶活力單位。HL 活性（μmol

/min/ml）=（△A+0.1241）÷0.1519×V 反總÷V 樣÷T

= 6.58×（△A+0.1241）

V 反總：反應(yīng)總體積，0.2ml；V 樣：反應(yīng)體系中加入樣本體積，0.02ml；W：樣本質(zhì)量，g；V 樣總：加入提取液體積，1ml；T：反應(yīng)時(shí)間，10min

用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y= 0.076 x -0.1241，R2=0.9994

按照蛋白濃度計(jì)算

酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生 1μmol α-萘酚為一個(gè)酶活力單位。

HL 活性（μmol /min/mg prot）= （△A+0.1241）÷0.076×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T

= 13.16×（△A+0.1241）÷Cpr

按照樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活性定義：每克組織每分鐘水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生 1μmol α-萘酚為一個(gè)酶活力單位。 HL 活性（μmol /min/g 鮮重）= （△A+0.1241）÷0.076×V 反總÷（W×V 樣÷V 樣總）÷T

= 13.16×（△A+0.1241）÷W

按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

酶活性定義：每 104 個(gè)細(xì)胞每分鐘水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生 1μmol α-萘酚為一個(gè)酶活力單位。

HL 活性（μmol /min/104 cell）= （△A+0.1241）÷0.076×V 反總÷（V 樣×細(xì)胞數(shù)量÷V 樣總）÷T

= 13.16×（△A+0.1241）÷細(xì)胞數(shù)量

按照液體體積計(jì)算

酶活性定義：每毫升血清每分鐘水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生 1μmol α-萘酚為一個(gè)酶活力單位。HL 活性（μmol

/min/ml）=（△A+0.1241）÷0.076×V 反總÷V 樣÷T

= 13.16×（△A+0.1241）

V 反總：反應(yīng)總體積，0.2ml；V 樣：反應(yīng)體系中加入樣本體積，0.02ml；W：樣本質(zhì)量，g；V 樣總：加入提取液體積，1ml；T：反應(yīng)時(shí)間，10min

肝酯酶試劑盒 脂肪酸系列