細(xì)胞系特征

細(xì)胞株名稱：A2780/Taxol

種屬：智人

組織來源：人胃癌

生長特性：懸浮生長

微生物及支原體檢測：陰性

安全性：所有腫瘤和病毒轉(zhuǎn)染的細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需高壓滅菌后方能丟棄。

培養(yǎng)條件：

*培養(yǎng)基：90%RPMI-1640+10%胎牛血清+0.1ug/ml Taxol GIBCOFBS-10099-141或HYCLONEFBS-SH30084.03。

培養(yǎng)條件：37.0C  carbon dioxide(CO2),5%

傳代方法：

收到細(xì)胞后，在倒置鏡下(是在4X物鏡)觀察整個細(xì)胞生長情況。

（一）如果細(xì)胞未長滿，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，低速離心，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液（注意不要吸出細(xì)胞），換 10ml新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng)。

(二)如果細(xì)胞已長滿，即可進行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：

1. 低速離心，棄去培養(yǎng)液，用PBS（不含鈣,鎂離子）洗1-2次。

2. 按6-8ml/瓶補加*培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)瓶中（補加*培養(yǎng)基至8到10ml）。如果沒有特別說明，收到細(xì)胞后的次傳代一般是一傳二。

注：1、觀察細(xì)胞在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，否則不能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度。看細(xì)胞的形態(tài)請在10X或20X物鏡下。

2、瓶中運輸培養(yǎng)基不能重復(fù)再用,請換用加雙抗的新培養(yǎng)基，細(xì)胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素。

3、有些細(xì)胞貼壁不牢，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落，可離心吹打后接種到新瓶內(nèi)。

4、收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請及時與我們聯(lián)系。

凍存方法：

  凍存液：90%胎牛血清，10%DMSO

  儲存：液氮儲存

問題

原因

解決方案

細(xì)胞生長緩慢

生長培養(yǎng)基使用不當(dāng)

按照生產(chǎn)商的建議，使用相應(yīng)的預(yù)熱生長培養(yǎng)基。

生長培養(yǎng)基中血清質(zhì)量差

使用其他批次血清。

傳代操作不當(dāng)

按照生產(chǎn)商的建議消化時間及傳代比例進行操作。

換液過于頻繁

降低換液頻率，參考生產(chǎn)商推薦的換液頻率。

細(xì)胞傳代次數(shù)過多

使用傳代次數(shù)較少的健康細(xì)胞。

細(xì)胞生長超過匯合狀態(tài)

哺乳動物細(xì)胞傳代應(yīng)在細(xì)胞處于對數(shù)期、未達(dá)到匯合狀態(tài)時進行，建議細(xì)胞密度達(dá) 80-90%傳代。

細(xì)胞被支原體污染

將細(xì)胞、培養(yǎng)基和試劑丟棄；新取一只凍存細(xì)胞，并且使用新的培養(yǎng)基和試劑。

細(xì)胞復(fù)蘇存活率低

細(xì)胞凍存不當(dāng)

新取一只凍存細(xì)胞，并儲存在液氮中。將細(xì)胞儲存在液氮中，直至復(fù)蘇。

自行制備的凍存細(xì)胞無活性

將細(xì)胞按照生產(chǎn)商推薦的密度凍存。

制備凍存細(xì)胞時使用傳代次數(shù)少的細(xì)胞。

嚴(yán)格按照生產(chǎn)商推薦的操作程序凍存細(xì)胞。請注意本手冊推薦的冷凍程序是凍存細(xì)胞的一般流程，只能作為指導(dǎo)原則使用。

新取一只凍存細(xì)胞。

細(xì)胞復(fù)蘇方法不當(dāng)

嚴(yán)格按照生產(chǎn)商推薦的操作程序復(fù)蘇細(xì)胞。請注意本手冊推薦的解凍程序是復(fù)蘇細(xì)胞的一般流程，只能作為指導(dǎo)原則使用。

確保冷凍細(xì)胞解凍迅速，接種前用預(yù)熱的生長培養(yǎng)基緩慢稀釋細(xì)胞。

復(fù)蘇培養(yǎng)基使用不當(dāng)

使用生產(chǎn)商推薦的培養(yǎng)基。確保培養(yǎng)基使用前已經(jīng)預(yù)熱。

細(xì)胞稀釋過度

按照生產(chǎn)商的建議，將解凍后的細(xì)胞高密度接種，以改善復(fù)蘇效果。

處理細(xì)胞時動作不夠輕柔

凍存和復(fù)蘇過程對大多數(shù)細(xì)胞都會造成不利影 響。不要通過渦旋振蕩或者用力敲打培養(yǎng)瓶的方法使細(xì)胞脫落(培養(yǎng)昆蟲細(xì)胞時除外)，也不要高速離心細(xì)胞。

凍存液中所用保護劑在儲存過程中未避光

如果未避光儲存，凍存保護劑會轉(zhuǎn)變?yōu)閷?xì)胞有毒性的物質(zhì)；新取一只凍存保護劑，重新凍存細(xì)胞。