上海琛藝實業(yè)有限公司經(jīng)過數(shù)年的努力發(fā)展已迅速成為集產(chǎn)品研發(fā)、生產(chǎn)、經(jīng)營為一體的專業(yè)化生物工程公司。公司新引進細胞上千株,其中人的已通過STR鑒定的有幾百株,歡迎各位選購。。。。。。
產(chǎn)品名稱:L1210/Taxol小鼠白血病紫杉醇耐藥株 含STR鑒定
包裝:內層無菌自封袋;防壓泡沫盒;外層防壓保溫氣泡袋;說明書
細胞來源:ATCC、sciencell、ICLC
貨期:1-2周
運輸方式:快遞運輸
售后:收到細胞后12天,如發(fā)現(xiàn)細胞有質量問題(如污染,死亡,快遞運輸?shù)仍颍r,應出具書面質量問題報告并及時通知銷售人員,我們將盡快為您解決!
注:耐藥細胞培養(yǎng)操作流程和普通細胞培養(yǎng)方法基本一致,只是在培養(yǎng)中會加藥維持篩選壓力
- L1210/Taxol小鼠白血病紫杉醇耐藥株 含STR鑒定
- 三、細胞生長條件:
- 組成:
組份 | 數(shù)目 |
細胞 | 1 T-25瓶 |
細胞說明書 | 一份 |
- 細胞簡介:
生長特性: | 貼壁生長
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細胞來源: | 從ATCC/中科院/協(xié)和醫(yī)院等地引進 |
培養(yǎng)條件: | 培養(yǎng)基:F12K+0.1mg/ml肝素+1%ECGS +10%FBS(推薦德國SERANA S-FBS-SA-015優(yōu)等胎牛血清) 氣相:空氣95%,二氧化碳5% 溫度:37℃ |
培養(yǎng): |
1.用75%酒精噴灑整個瓶消毒,將其平躺置于培養(yǎng)箱中進行2-3小時的緩沖,.然后置于無菌操作臺,打開瓶口,將其中的培養(yǎng)液去掉,再往其中加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基并置于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),根據(jù)細胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對其進行換液以及傳代; 2.待細胞長滿瓶底面積80%-90%,需要對其進行傳代,次傳代比例為1:2。 3傳代步驟:將0.25%含EDTA胰酶置于37°預熱,倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,往培養(yǎng)瓶中加入1mlPBS,輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1ml預熱好的胰酶,置于37°孵育消化(次消化需時常取出置于顯微鏡下觀察,以顯微鏡下細胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細胞脫落為zui佳消化時間,記錄zui佳消化時間,以便于下次消化),消化好后加入1ml*培養(yǎng)基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細胞,使之*脫落,然后收集細胞懸液,1200rpm離心3min,棄上清,加入*培養(yǎng)基重懸細胞,進行傳代。
二、懸浮細胞 1.用75%酒精噴灑整個瓶消毒,然后置于無菌操作臺,打開瓶口,輕輕吹打后,將其中的細胞懸液轉移到離心管中,然后1200rpm離心3min,去上清; 2.將離心好的細胞轉移至T-25瓶中,并加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基,然后將其置于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),根據(jù)細胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對其進行換液(離心后去舊液,加入新鮮培養(yǎng)基); 3.顯微鏡觀察細胞數(shù)目比較多時,對其進行傳代,次傳代比例為1:2(離心后平均分成兩瓶培養(yǎng))。
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細胞總數(shù): | 1~3*106 |
傳代周期: | 2-3天 |
傳代比例: | 1:2~1:4 |
換液頻率: | 2-3天 |
凍存液: | 90%FBS+10%DMSO |
四、注意事項:
1 收到細胞后首先觀察T-25瓶是否有損壞、漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。
2 瓶中運輸?shù)呐囵B(yǎng)液不能重復使用,請換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)
3 對于貼壁細胞,若大部分細胞漂浮,置于培養(yǎng)箱隔夜觀察,大部分漂浮細胞重新貼壁,表明細胞活力正常,繼續(xù)培養(yǎng),剩余漂浮的細胞可以去掉;若大部分細胞仍然不貼壁,將漂浮的細胞離心收集,用臺盼藍染色鑒定細胞活力,并與本公司銷售人員及時聯(lián)系。
4 建議客戶收到細胞后不同倍鏡各拍幾張細胞的照片,記錄細胞狀態(tài),如細胞狀態(tài)出現(xiàn)問題請于72h內與本公司銷售聯(lián)系,以便于更好的幫您解決問題,超過時間我段,本公司則默認細胞狀態(tài)良好,不免費對后續(xù)細胞狀態(tài)問題進行售后。
做細胞實驗的同學看過來。
選擇上海琛藝生物細胞有3個理由:
1、細胞狀態(tài)好,形態(tài)佳,易成活,是市面上比較好養(yǎng)的細胞之一;
2、物流迅速,復蘇好后發(fā)貨,次日就能到;
3、使用我司推薦的進口品牌血清進行培養(yǎng)實驗,效果更佳。
專業(yè)技術人員萬工收藏的細胞培養(yǎng)小技巧:
1. 買細胞要去靠譜的地方買,比如 ATCC 或者素冉生物。一般上面會有針對細胞的介紹,這樣培養(yǎng)之前可以了解細胞正常生長的狀態(tài)圖、傳代、培養(yǎng)基的類型等。
2. 不管是買的細胞,還是別人惠贈的細胞,剛拿到手趕緊的做兩件事:檢測是否有支原體污染;迅速擴增凍存,凍存細胞復蘇后第二天*更換一次培養(yǎng)基。
3. 發(fā)現(xiàn)細胞有污染迅速處理掉,特別是當你養(yǎng)了很多種細胞時。細菌污染、真菌污染很容易發(fā)現(xiàn),支原體污染的話,細胞會長的慢,可以買個支原體檢測的試劑盒定期檢測一下。
4. 不同細胞生長周期不同。有的生長很快,比如說 MDA-MB-231,傳代的時候取離心懸液的十分之一就已經(jīng)足夠了。有的又是特別慢,比如 BT474,傳代是一分二,復蘇起始的時候兩周多才能長滿。這就需要要在培養(yǎng)細胞的過程中多多摸索。
5. 對于嬌弱的細胞,就得細心呵護。胰酶消化不能過久,吹得時候要輕柔,離心時候也要注意轉速和時間。每天都要去看一下細胞,肉眼觀察培養(yǎng)基狀況、顯微鏡下觀察細胞生長狀況。記住,是每天。
細胞培養(yǎng)常見問題及解決方法
問題 | 原因 | 解決方案 |
細胞生長緩慢 | 生長培養(yǎng)基使用不當 | 按照生產(chǎn)商的建議,使用相應的預熱生長培養(yǎng)基。 |
生長培養(yǎng)基中血清質量差 | 使用其他批次血清。 | |
傳代操作不當 | 按照生產(chǎn)商的建議消化時間及傳代比例進行操作。 | |
換液過于頻繁 | 降低換液頻率,參考生產(chǎn)商推薦的換液頻率。 | |
細胞傳代次數(shù)過多 | 使用傳代次數(shù)較少的健康細胞。 | |
細胞生長超過匯合狀態(tài) | 哺乳動物細胞傳代應在細胞處于對數(shù)期、未達到匯合狀態(tài)時進行,建議細胞密度達 80-90%傳代。 | |
細胞被支原體污染 | 將細胞、培養(yǎng)基和試劑丟棄;新取一只凍存細胞,并且使用新的培養(yǎng)基和試劑。 | |
細胞復蘇存活率低 | 細胞凍存不當 | 新取一只凍存細胞,并儲存在液氮中。將細胞儲存在液氮中,直至復蘇。 |
自行制備的凍存細胞無活性 | 將細胞按照生產(chǎn)商推薦的密度凍存。 | |
制備凍存細胞時使用傳代次數(shù)少的細胞。 | ||
嚴格按照生產(chǎn)商推薦的操作程序凍存細胞。請注意本手冊推薦的冷凍程序是凍存細胞的一般流程,只能作為指導原則使用。 | ||
新取一只凍存細胞。 | ||
細胞復蘇方法不當 | 嚴格按照生產(chǎn)商推薦的操作程序復蘇細胞。請注意本手冊推薦的解凍程序是復蘇細胞的一般流程,只能作為指導原則使用。 | |
確保冷凍細胞解凍迅速,接種前用預熱的生長培養(yǎng)基緩慢稀釋細胞。 | ||
復蘇培養(yǎng)基使用不當 | 使用生產(chǎn)商推薦的培養(yǎng)基。確保培養(yǎng)基使用前已經(jīng)預熱。 | |
細胞稀釋過度 | 按照生產(chǎn)商的建議,將解凍后的細胞高密度接種,以改善復蘇效果。 | |
處理細胞時動作不夠輕柔 | 凍存和復蘇過程對大多數(shù)細胞都會造成不利影 響。不要通過渦旋振蕩或者用力敲打培養(yǎng)瓶的方法使細胞脫落(培養(yǎng)昆蟲細胞時除外),也不要高速離心細胞。 | |
凍存液中所用保護劑在儲存過程中未避光 | 如果未避光儲存,凍存保護劑會轉變?yōu)閷毎卸拘缘奈镔|;新取一只凍存保護劑,重新凍存細胞。 |
★由于細胞庫現(xiàn)有細胞類目多,為了不出現(xiàn)混亂錯誤,需要了解相關細胞價格及詳細資料直接call,對您造成的不便還請見諒!
★注:如運輸過程中導致細胞污染或者死亡,我們將無條件補發(fā)
收貨后十個工作日內有其他問題提供照片可半價重發(fā)
后,通過低溫保藏儲備一些細胞,以防支原體大面積來襲。如果支原體有抬頭的跡象,或常規(guī)檢測呈陽性結果,那么可靠的補救措施是扔掉所有培養(yǎng)物,清潔培養(yǎng)箱和超凈臺,一切從頭開始。當然,你得確保儲備的細胞是不含支原體的。
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上海琛藝實業(yè)耐藥細胞株提供STR鑒定,上百株細胞等待您的選購,歡迎咨詢銷售陳靜。
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