上海琛藝實(shí)業(yè)有限公司經(jīng)過(guò)數(shù)年的努力發(fā)展已迅速成為集產(chǎn)品研發(fā)、生產(chǎn)、經(jīng)營(yíng)為一體的專(zhuān)業(yè)化生物工程公司。公司新引進(jìn)細(xì)胞上千株,其中人的已通過(guò)STR鑒定的有幾百株,歡迎各位選購(gòu)。。。。。。
產(chǎn)品名稱(chēng):HEC-1-B人子宮膜腺癌細(xì)胞 含STR鑒定
特點(diǎn):細(xì)胞代數(shù)為4代以?xún)?nèi),細(xì)胞耐藥倍數(shù)8倍以上;
包裝:內(nèi)層無(wú)菌自封袋;防壓泡沫盒;外層防壓保溫氣泡袋;說(shuō)明書(shū)
細(xì)胞來(lái)源:ATCC、sciencell、ICLC
貨期:1-2周
運(yùn)輸方式:快遞運(yùn)輸
售后:收到細(xì)胞后12天,如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有質(zhì)量問(wèn)題(如污染,死亡,快遞運(yùn)輸?shù)仍颍r(shí),應(yīng)出具書(shū)面質(zhì)量問(wèn)題報(bào)告并及時(shí)通知銷(xiāo)售人員,我們將盡快為您解決!
注:耐藥細(xì)胞培養(yǎng)操作流程和普通細(xì)胞培養(yǎng)方法基本一致,只是在培養(yǎng)中會(huì)加藥維持篩選壓力
- HEC-1-B人子宮膜腺癌細(xì)胞 含STR鑒定
- 三、細(xì)胞生長(zhǎng)條件:
- 組成:
組份 | 數(shù)目 |
細(xì)胞 | 1 T-25瓶 |
細(xì)胞說(shuō)明書(shū) | 一份 |
- 細(xì)胞簡(jiǎn)介:
生長(zhǎng)特性: | 貼壁生長(zhǎng)
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細(xì)胞來(lái)源: | 從ATCC/中科院/協(xié)和醫(yī)院等地引進(jìn) |
培養(yǎng)條件: | 培養(yǎng)基:F12K+0.1mg/ml肝素+1%ECGS +10%FBS(推薦德國(guó)SERANA S-FBS-SA-015優(yōu)等胎牛血清) 氣相:空氣95%,二氧化碳5% 溫度:37℃ |
培養(yǎng): |
1.用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒,將其平躺置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行2-3小時(shí)的緩沖,.然后置于無(wú)菌操作臺(tái),打開(kāi)瓶口,將其中的培養(yǎng)液去掉,再往其中加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基并置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀況及培養(yǎng)基顏色變化對(duì)其進(jìn)行換液以及傳代; 2.待細(xì)胞長(zhǎng)滿(mǎn)瓶底面積80%-90%,需要對(duì)其進(jìn)行傳代,次傳代比例為1:2。 3傳代步驟:將0.25%含EDTA胰酶置于37°預(yù)熱,倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,往培養(yǎng)瓶中加入1mlPBS,輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1ml預(yù)熱好的胰酶,置于37°孵育消化(次消化需時(shí)常取出置于顯微鏡下觀(guān)察,以顯微鏡下細(xì)胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見(jiàn)細(xì)胞脫落為zui佳消化時(shí)間,記錄zui佳消化時(shí)間,以便于下次消化),消化好后加入1ml*培養(yǎng)基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞,使之*脫落,然后收集細(xì)胞懸液,1200rpm離心3min,棄上清,加入*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,進(jìn)行傳代。
二、懸浮細(xì)胞 1.用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒,然后置于無(wú)菌操作臺(tái),打開(kāi)瓶口,輕輕吹打后,將其中的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管中,然后1200rpm離心3min,去上清; 2.將離心好的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T-25瓶中,并加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基,然后將其置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀況及培養(yǎng)基顏色變化對(duì)其進(jìn)行換液(離心后去舊液,加入新鮮培養(yǎng)基); 3.顯微鏡觀(guān)察細(xì)胞數(shù)目比較多時(shí),對(duì)其進(jìn)行傳代,次傳代比例為1:2(離心后平均分成兩瓶培養(yǎng))。
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細(xì)胞總數(shù): | 1~3*106 |
傳代周期: | 2-3天 |
傳代比例: | 1:2~1:4 |
換液頻率: | 2-3天 |
凍存液: | 90%FBS+10%DMSO |
四、注意事項(xiàng):
1 收到細(xì)胞后首先觀(guān)察T-25瓶是否有損壞、漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。
2 瓶中運(yùn)輸?shù)呐囵B(yǎng)液不能重復(fù)使用,請(qǐng)換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)
3 對(duì)于貼壁細(xì)胞,若大部分細(xì)胞漂浮,置于培養(yǎng)箱隔夜觀(guān)察,大部分漂浮細(xì)胞重新貼壁,表明細(xì)胞活力正常,繼續(xù)培養(yǎng),剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉;若大部分細(xì)胞仍然不貼壁,將漂浮的細(xì)胞離心收集,用臺(tái)盼藍(lán)染色鑒定細(xì)胞活力,并與本公司銷(xiāo)售人員及時(shí)聯(lián)系。
4 建議客戶(hù)收到細(xì)胞后不同倍鏡各拍幾張細(xì)胞的照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),如細(xì)胞狀態(tài)出現(xiàn)問(wèn)題請(qǐng)于72h內(nèi)與本公司銷(xiāo)售聯(lián)系,以便于更好的幫您解決問(wèn)題,超過(guò)時(shí)間我段,本公司則默認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)良好,不免費(fèi)對(duì)后續(xù)細(xì)胞狀態(tài)問(wèn)題進(jìn)行售后。
做細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的同學(xué)看過(guò)來(lái)。
選擇上海琛藝生物細(xì)胞有3個(gè)理由:
1、細(xì)胞狀態(tài)好,形態(tài)佳,易成活,是市面上比較好養(yǎng)的細(xì)胞之一;
2、物流迅速,復(fù)蘇好后發(fā)貨,次日就能到;
3、使用我司推薦的進(jìn)口品牌血清進(jìn)行培養(yǎng)實(shí)驗(yàn),效果更佳。
專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員萬(wàn)工收藏的細(xì)胞培養(yǎng)小技巧:
1. 買(mǎi)細(xì)胞要去靠譜的地方買(mǎi),比如 ATCC 或者素冉生物。一般上面會(huì)有針對(duì)細(xì)胞的介紹,這樣培養(yǎng)之前可以了解細(xì)胞正常生長(zhǎng)的狀態(tài)圖、傳代、培養(yǎng)基的類(lèi)型等。
2. 不管是買(mǎi)的細(xì)胞,還是別人惠贈(zèng)的細(xì)胞,剛拿到手趕緊的做兩件事:檢測(cè)是否有支原體污染;迅速擴(kuò)增凍存,凍存細(xì)胞復(fù)蘇后第二天*更換一次培養(yǎng)基。
3. 發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有污染迅速處理掉,特別是當(dāng)你養(yǎng)了很多種細(xì)胞時(shí)。細(xì)菌污染、真菌污染很容易發(fā)現(xiàn),支原體污染的話(huà),細(xì)胞會(huì)長(zhǎng)的慢,可以買(mǎi)個(gè)支原體檢測(cè)的試劑盒定期檢測(cè)一下。
4. 不同細(xì)胞生長(zhǎng)周期不同。有的生長(zhǎng)很快,比如說(shuō) MDA-MB-231,傳代的時(shí)候取離心懸液的十分之一就已經(jīng)足夠了。有的又是特別慢,比如 BT474,傳代是一分二,復(fù)蘇起始的時(shí)候兩周多才能長(zhǎng)滿(mǎn)。這就需要要在培養(yǎng)細(xì)胞的過(guò)程中多多摸索。
5. 對(duì)于嬌弱的細(xì)胞,就得細(xì)心呵護(hù)。胰酶消化不能過(guò)久,吹得時(shí)候要輕柔,離心時(shí)候也要注意轉(zhuǎn)速和時(shí)間。每天都要去看一下細(xì)胞,肉眼觀(guān)察培養(yǎng)基狀況、顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞生長(zhǎng)狀況。記住,是每天。
細(xì)胞培養(yǎng)常見(jiàn)問(wèn)題及解決方法
問(wèn)題 | 原因 | 解決方案 |
細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢 | 生長(zhǎng)培養(yǎng)基使用不當(dāng) | 按照生產(chǎn)商的建議,使用相應(yīng)的預(yù)熱生長(zhǎng)培養(yǎng)基。 |
生長(zhǎng)培養(yǎng)基中血清質(zhì)量差 | 使用其他批次血清。 | |
傳代操作不當(dāng) | 按照生產(chǎn)商的建議消化時(shí)間及傳代比例進(jìn)行操作。 | |
換液過(guò)于頻繁 | 降低換液頻率,參考生產(chǎn)商推薦的換液頻率。 | |
細(xì)胞傳代次數(shù)過(guò)多 | 使用傳代次數(shù)較少的健康細(xì)胞。 | |
細(xì)胞生長(zhǎng)超過(guò)匯合狀態(tài) | 哺乳動(dòng)物細(xì)胞傳代應(yīng)在細(xì)胞處于對(duì)數(shù)期、未達(dá)到匯合狀態(tài)時(shí)進(jìn)行,建議細(xì)胞密度達(dá) 80-90%傳代。 | |
細(xì)胞被支原體污染 | 將細(xì)胞、培養(yǎng)基和試劑丟棄;新取一只凍存細(xì)胞,并且使用新的培養(yǎng)基和試劑。 | |
細(xì)胞復(fù)蘇存活率低 | 細(xì)胞凍存不當(dāng) | 新取一只凍存細(xì)胞,并儲(chǔ)存在液氮中。將細(xì)胞儲(chǔ)存在液氮中,直至復(fù)蘇。 |
自行制備的凍存細(xì)胞無(wú)活性 | 將細(xì)胞按照生產(chǎn)商推薦的密度凍存。 | |
制備凍存細(xì)胞時(shí)使用傳代次數(shù)少的細(xì)胞。 | ||
嚴(yán)格按照生產(chǎn)商推薦的操作程序凍存細(xì)胞。請(qǐng)注意本手冊(cè)推薦的冷凍程序是凍存細(xì)胞的一般流程,只能作為指導(dǎo)原則使用。 | ||
新取一只凍存細(xì)胞。 | ||
細(xì)胞復(fù)蘇方法不當(dāng) | 嚴(yán)格按照生產(chǎn)商推薦的操作程序復(fù)蘇細(xì)胞。請(qǐng)注意本手冊(cè)推薦的解凍程序是復(fù)蘇細(xì)胞的一般流程,只能作為指導(dǎo)原則使用。 | |
確保冷凍細(xì)胞解凍迅速,接種前用預(yù)熱的生長(zhǎng)培養(yǎng)基緩慢稀釋細(xì)胞。 | ||
復(fù)蘇培養(yǎng)基使用不當(dāng) | 使用生產(chǎn)商推薦的培養(yǎng)基。確保培養(yǎng)基使用前已經(jīng)預(yù)熱。 | |
細(xì)胞稀釋過(guò)度 | 按照生產(chǎn)商的建議,將解凍后的細(xì)胞高密度接種,以改善復(fù)蘇效果。 | |
處理細(xì)胞時(shí)動(dòng)作不夠輕柔 | 凍存和復(fù)蘇過(guò)程對(duì)大多數(shù)細(xì)胞都會(huì)造成不利影 響。不要通過(guò)渦旋振蕩或者用力敲打培養(yǎng)瓶的方法使細(xì)胞脫落(培養(yǎng)昆蟲(chóng)細(xì)胞時(shí)除外),也不要高速離心細(xì)胞。 | |
凍存液中所用保護(hù)劑在儲(chǔ)存過(guò)程中未避光 | 如果未避光儲(chǔ)存,凍存保護(hù)劑會(huì)轉(zhuǎn)變?yōu)閷?duì)細(xì)胞有毒性的物質(zhì);新取一只凍存保護(hù)劑,重新凍存細(xì)胞。 |
★由于細(xì)胞庫(kù)現(xiàn)有細(xì)胞類(lèi)目多,為了不出現(xiàn)混亂錯(cuò)誤,需要了解相關(guān)細(xì)胞價(jià)格及詳細(xì)資料直接call,對(duì)您造成的不便還請(qǐng)見(jiàn)諒!
★注:如運(yùn)輸過(guò)程中導(dǎo)致細(xì)胞污染或者死亡,我們將無(wú)條件補(bǔ)發(fā)
收貨后十個(gè)工作日內(nèi)有其他問(wèn)題提供照片可半價(jià)重發(fā)
后,通過(guò)低溫保藏儲(chǔ)備一些細(xì)胞,以防支原體大面積來(lái)襲。如果支原體有抬頭的跡象,或常規(guī)檢測(cè)呈陽(yáng)性結(jié)果,那么可靠的補(bǔ)救措施是扔掉所有培養(yǎng)物,清潔培養(yǎng)箱和超凈臺(tái),一切從頭開(kāi)始。當(dāng)然,你得確保儲(chǔ)備的細(xì)胞是不含支原體的。
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上海琛藝實(shí)業(yè)耐藥細(xì)胞株提供STR鑒定,上百株細(xì)胞等待您的選購(gòu),歡迎咨詢(xún)銷(xiāo)售陳靜。
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