名稱(chēng): SPC-A-1細(xì)胞|SPC-A-1人肺腺癌細(xì)胞 含STR鑒定

別稱(chēng): SPC-A-1種屬:人

生長(zhǎng)特性:貼壁細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣

生長(zhǎng)培養(yǎng)基 McCoy's ＋10% FBS(SERANA S-FBS-EU-015)＋1% P/S

推薦傳代比例:1:2-1:4

推薦換液頻率:2-3次/周

倍增時(shí)間:~20-48 hours

SPC-A-1細(xì)胞|SPC-A-1人肺腺癌細(xì)胞 含STR鑒定

凍存條件

凍存液：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%胎牛血清+10%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

致瘤性:;Yes, in nude mice; forms moderately well differentiated adenocarcinoma consistent with ovarian primary.

抗原表達(dá)情況:Blood Type B; Rh+

基因表達(dá)情況:Blood Type B; Rh+

保藏機(jī)構(gòu):ATCC; HTB-77 ECACC; 91091004

※正常情況下，融化后血清的外觀顏色應(yīng)該是？

    血清為動(dòng)物來(lái)源，成分復(fù)雜，不同批次間會(huì)存在一些外觀上的差別。一般情況下，它們的顏色可能是金黃色、紅色、琥珀棕色或者是介于三者之間。

※血清應(yīng)如何保存？

    未拆封的血清應(yīng)存放于-15至-20℃，避免反復(fù)凍融。拆封后的血清應(yīng)無(wú)菌分裝成一次的用量并存放于-15至-20℃，在產(chǎn)品質(zhì)量證書(shū)標(biāo)識(shí)的效期內(nèi)均可使用。2-8℃溶解后建議盡快使用。

※血清的有效期是多久？

    大部分胎牛血清效期是5年，針對(duì)每個(gè)批次，請(qǐng)通過(guò)質(zhì)檢文件確定具體效期日期。

※血清應(yīng)如何融解？

    從冰箱中取出血清，放于2-8℃融化，融化過(guò)程中不時(shí)旋轉(zhuǎn)（swirling mix）混勻。充分融解后分裝或平衡到室溫后使用

※為什么有時(shí)血清中出現(xiàn)絮狀沉淀？是否需要去除？如何去除？

    多種原因可能導(dǎo)致絮狀沉淀的形成，好常見(jiàn)的原因之一是融化過(guò)程中，脂蛋白聚集所致。該現(xiàn)象一般不會(huì)影響產(chǎn)品質(zhì)量?？梢?/span>400g離心5分鐘，取上清，然后過(guò)濾。根據(jù)需要選擇合適的濾膜孔徑，一般好常用的是0.22um PES材質(zhì)的濾膜。為避免濾膜阻塞，建議離心后取上清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過(guò)濾而不是直接過(guò)濾血清。

※為什么存放于冰箱中的血清會(huì)出現(xiàn)沉淀？如何避免該現(xiàn)象？

    在2-8°C條件下存放，血清中的多種蛋白或脂蛋白會(huì)形成肉眼可見(jiàn)的沉淀，如血纖蛋白（fibrin），單體時(shí)處于溶解狀態(tài)，在凍融過(guò)程中會(huì)發(fā)生聚集，形成肉眼可見(jiàn)的沉淀。但該現(xiàn)象一般不會(huì)影響血清的性能。可以400g離心5分鐘，取上清，然后過(guò)濾。根據(jù)需要選擇合適的濾膜孔徑，一般好常用的是0.22um PES材質(zhì)的濾膜。為避免濾膜阻塞，建議離心后取上清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過(guò)濾而不是直接過(guò)濾血清。為盡量避免出現(xiàn)上述現(xiàn)象，建議血清分裝成一次性用量存于-15°至-20℃冰箱，避免反復(fù)凍融和融化后的血清在2-8°C條件下長(zhǎng)時(shí)間放置。

※血清是否需要做滅活處理？

    這取決于您的應(yīng)用。

    滅活過(guò)程中，會(huì)導(dǎo)致血清中某些成分被破壞，如氨基酸，維生素，生長(zhǎng)因子等。所以只有在您的實(shí)驗(yàn)對(duì)血清有特殊要求時(shí)，才會(huì)考慮對(duì)血清進(jìn)行滅活處理。如您的實(shí)驗(yàn)對(duì)血清中的某種組分敏感，需要去除該組分。好常見(jiàn)的情況是需要去除血清中的補(bǔ)體蛋白，因?yàn)檠a(bǔ)體在機(jī)體中參與細(xì)胞殺傷，巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞活化，肥大細(xì)胞和血小板組胺釋放，平滑肌收縮等過(guò)程，所以一般在免疫學(xué)相關(guān)研究中及肌細(xì)胞和干細(xì)胞的培養(yǎng)過(guò)程中需要對(duì)血清進(jìn)行滅活處理。

※如何進(jìn)行血清滅活處理？

    血清請(qǐng)先按上述“血清應(yīng)如何融解”中的操作步驟融化和混勻，熱滅活時(shí)請(qǐng)將血清置于56℃水浴30分鐘。為盡量減少熱滅活對(duì)血清品質(zhì)的影響，一次滅活的血清體積不宜過(guò)大。好好準(zhǔn)備同樣的容器裝相等體積的水（與血清相同溫度），滅活時(shí)將裝有血清和水的容器同時(shí)放入56℃水浴, 在裝水的容器中放置溫度計(jì)，加熱過(guò)程中不時(shí)輕輕旋轉(zhuǎn)混勻血清，當(dāng)溫度計(jì)顯示達(dá)到56℃左右，開(kāi)始計(jì)時(shí)。56 ℃水浴后，建議馬上轉(zhuǎn)移到冰上降溫。

※為什么需要對(duì)血清進(jìn)行gamma射線輻照？

    gamma 射線輻照的目的是滅活血清中的病毒，一般情況下，25-40kGy和30-45kGy是常用的輻射劑量。

※如何應(yīng)對(duì)血清的批間差？

    琛藝銷(xiāo)售的胎牛血清產(chǎn)品通過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)控盡可能縮小批間差，但由于血清本身的特點(diǎn)和來(lái)源，無(wú)法*避免批間差?？蛻?hù)可以通過(guò)做預(yù)測(cè)試等方式，選擇可滿(mǎn)足要求的血清批次。

SPC-A-1細(xì)胞|SPC-A-1人肺腺癌細(xì)胞

其實(shí)，剛剛復(fù)蘇的細(xì)胞就像是剛剛出生的baby，非常脆弱，需要各位小伙伴的細(xì)心呵護(hù)，不然，細(xì)胞就會(huì)被我們花樣玩死。為了避免細(xì)胞不明不白的掛掉，我們就要對(duì)細(xì)胞的各種習(xí)性了如指掌。

1. 俗語(yǔ)道，到什么山上唱什么歌，不同細(xì)胞用不同的培養(yǎng)液。此時(shí)，就不得不提起培養(yǎng)基里的“四大金剛”—MEM、DMEM、1640、F-12，它們基本參與了90%以上種類(lèi)細(xì)胞的培養(yǎng)過(guò)程。

MEM作為帶頭大哥，能力非常全面，號(hào)稱(chēng)是應(yīng)用好廣泛的細(xì)胞培養(yǎng)液。

DMEM作為隨時(shí)緊跟老大MEM的二弟，青出于藍(lán)而勝于藍(lán)，濃度要高出2~4倍，可分為高糖型（含葡萄糖4500mg/L）和低糖型（含葡萄糖1000mg/L）。

老三1640中規(guī)中矩，營(yíng)養(yǎng)成分比較簡(jiǎn)單，比DMEM少一點(diǎn)糖和谷光甘肽，常用于淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)。

小兄弟F12常用來(lái)支持CHO、Hela和L－細(xì)胞生長(zhǎng)以及原代大鼠肝細(xì)胞和前列腺上皮細(xì)胞的培養(yǎng)。MEM和F12 這兩種培養(yǎng)基各取1/2，即可形成神經(jīng)生物學(xué)好通用的培養(yǎng)基。

2. 細(xì)胞生長(zhǎng)的空間密度是細(xì)胞培養(yǎng)的關(guān)鍵。具體養(yǎng)細(xì)胞時(shí)應(yīng)該摸索細(xì)胞喜歡的生長(zhǎng)空間密度，既不能讓細(xì)胞瓶里的細(xì)胞因擁擠不堪而萎靡不振；也不能讓細(xì)胞濃度低于1~5×10^5個(gè)/mL而導(dǎo)致“孤獨(dú)死”（因?yàn)榧?xì)胞的健康生長(zhǎng)需要細(xì)胞間的連接）。因而細(xì)胞接種前，要先通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)調(diào)整細(xì)胞濃度。

3. 當(dāng)培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞形態(tài)不好時(shí)，可在傳代時(shí)，先倒掉舊的培養(yǎng)基，加入3ml新的培養(yǎng)基（有無(wú)血清都可以）洗滌一次，用滴管吸走，再加入3ml培養(yǎng)基，沿著瓶底輕輕吹打一遍，然后吸走。這時(shí)再正式進(jìn)行消化、吹打。

其次，把吹打下的細(xì)胞懸液加入到含有新培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，置于培養(yǎng)箱里培養(yǎng)，按時(shí)間點(diǎn)觀察細(xì)胞貼壁情況（10min，20min，30min）。而后迅速倒出其中的培養(yǎng)基，加入3ml新培養(yǎng)基再輕輕洗一次，然后加入*培養(yǎng)基培養(yǎng)并觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況以及形態(tài)。直至找到細(xì)胞的形態(tài)為止。

4. 至于在培養(yǎng)瓶中加入多少培養(yǎng)基量，則是需要實(shí)驗(yàn)汪們自己去摸索的。對(duì)于生長(zhǎng)快的細(xì)胞，易生長(zhǎng)的細(xì)胞加少一點(diǎn)培養(yǎng)基，細(xì)胞形態(tài)會(huì)更好，但是要注意對(duì)換液時(shí)間的把握。

5. 如何選擇培養(yǎng)瓶。一般，生長(zhǎng)速度慢的細(xì)胞如果想要更漂亮的細(xì)胞狀態(tài)，那么采用塑料瓶會(huì)比玻璃瓶的效果好；生長(zhǎng)速度快的細(xì)胞，用玻璃瓶培養(yǎng)的效果會(huì)更好。因此，對(duì)于同一種細(xì)胞，在其生長(zhǎng)速度慢的時(shí)候（比如細(xì)胞剛復(fù)蘇時(shí)或者原代培養(yǎng)），塑料瓶會(huì)好一點(diǎn)；而在其生長(zhǎng)旺盛的時(shí)候，玻璃瓶則相對(duì)會(huì)好一點(diǎn)。

6. 細(xì)胞凍存時(shí)，蓋子要擰緊，不然復(fù)蘇水浴時(shí)會(huì)滲水，造成細(xì)胞污染。因而凍存管要選擇原配的管子和蓋子（不同牌子、型號(hào)的管子會(huì)有差別），蓋子擰緊后好好用封口膜封住。且每支凍存管都要標(biāo)上細(xì)胞的名稱(chēng)、凍存時(shí)間，并記錄在冊(cè)，以免后續(xù)復(fù)蘇細(xì)胞時(shí)，取錯(cuò)細(xì)胞。

7. 細(xì)胞凍存時(shí)要嚴(yán)格進(jìn)行梯度降溫（-4℃→-20℃~-40℃→-80℃→液氮）。要知道冰火兩重天的生活環(huán)境只會(huì)讓嬌弱的細(xì)胞自爆身亡，謹(jǐn)記：緩降溫！但如果真心趕時(shí)間時(shí)，可以使用細(xì)胞凍存盒進(jìn)行細(xì)胞凍存，而后盡快將其轉(zhuǎn)入液氮中。此外，要定期測(cè)量液氮罐里的液氮儲(chǔ)備，以保證細(xì)胞全部浸在液面下。

8. 細(xì)胞解凍時(shí)，由于凍存管管壁較厚、隔熱，而導(dǎo)致水浴時(shí)間太長(zhǎng)（2min還沒(méi)融化）時(shí)，可以將水浴鍋的溫度調(diào)至40℃左右，可以縮短解凍時(shí)間。

9. 提前預(yù)定超凈臺(tái)，減少?gòu)?fù)蘇后插在冰盒里等待的時(shí)間，可避免細(xì)胞房人滿(mǎn)為患，超凈臺(tái)使用緊張，復(fù)蘇1h后，還沒(méi)有加入新的培養(yǎng)液。（高濃度DMSO防止胞內(nèi)形成冰晶，凍存時(shí)保護(hù)細(xì)胞，但復(fù)蘇融解后，浸泡時(shí)間太久會(huì)對(duì)細(xì)胞有毒性）

10. 復(fù)蘇細(xì)胞時(shí)一定要有耐心，因?yàn)橛行┘?xì)胞在復(fù)蘇一星期后才會(huì)真正有起色。因而，盡管細(xì)胞在復(fù)蘇三四天后沒(méi)有任何動(dòng)靜，也不要輕易倒掉所有細(xì)胞，要耐心等待，兩周后再做決定。

11. 有關(guān)DMSO的一些注意事項(xiàng)：

(1) DMSO能夠快速穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞中，降低冰點(diǎn)、延緩凍存過(guò)程，同時(shí)提高細(xì)胞內(nèi)的離子濃度、減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少細(xì)胞損傷程度。

(2) DMSO在溶解過(guò)程中會(huì)放熱，應(yīng)先與培養(yǎng)基混勻后再加血清，同時(shí)凍存液好好提前配置，DMSO現(xiàn)配對(duì)細(xì)胞的毒性可能更大；

(3) 復(fù)蘇時(shí)，要離心去除DMSO，并用新鮮的培養(yǎng)基洗滌1-2次，注意離心的時(shí)候速度不要太快。

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