血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集，應(yīng)留意避免溶血，紅細(xì)胞溶解時會開釋出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP為標(biāo)記的ELISA測定中，溶血標(biāo)本可能會增加非特異性顯色。如在冰箱中保留過久，其中的可發(fā)生聚合，在間接法ELISA中可使本底加深。本文將敘述板式ELISA試劑盒各個操縱步驟的留意要點(diǎn)，珠式、管式及磁性球ELSIA，國外試劑均與特殊儀器配合應(yīng)用，嚴(yán)格遵照劃定操縱，必能得出正確的結(jié)果。加樣時應(yīng)將所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并留意不可濺出，不可產(chǎn)氣憤泡。有此測定（如間接法ELISA）需用稀的血清，可在試管中按劃定的稀釋度稀釋后再加樣。

    在ELISA試劑盒中一般有3次加樣步聚，即加標(biāo)本，加酶結(jié)合物，加底物。凍結(jié)血清融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混勻宜輕緩，避免氣泡，可上下倒置混和，不要在混勻器上強(qiáng)烈振蕩。制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑，而血清標(biāo)本只要待血清天然凝固、血*收縮后即可取得。也可在板孔中加入稀釋液，再在其加入血清標(biāo)本，然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和。一般說來，在5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4℃，超過一周測定的需低溫冰存。可用作ELISA測定的標(biāo)本十分廣泛，體液（如血清 ）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、糞便）等均可作標(biāo)本以測定其中某種抗體 或抗原成份，ELISA試劑盒中本次試驗(yàn)不需用的部分應(yīng)及時放回冰箱保留。  
    ELISA試劑盒的操縱因固相載體的形成不同而有所差異，海內(nèi)醫(yī)學(xué)檢修一般均用板式點(diǎn)。除特殊情況外，在醫(yī)學(xué)檢修中均以血清作為檢測標(biāo)本。加酶結(jié)合物應(yīng)用液和底物用液時可用定量多道加液器，使加液過程迅速完成。如有細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。每次加標(biāo)本應(yīng)更換吸嘴，以發(fā)生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加樣。的試劑，良好的儀器和準(zhǔn)確的操縱是保證ELISA試劑盒檢測結(jié)果正確可靠的必要條件。ELISA頂用的蒸餾 水或去離子水，包括用于洗滌的，應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的。有些標(biāo)本可直接進(jìn)行測定（如血清 、尿液），有些則需經(jīng)預(yù)處理（如糞便和某些分泌物）。

Elisa試劑盒的5個步驟

ELISA試劑盒測定步驟：固相包被→加待測樣品→溫育→洗刷+加酶標(biāo)物→溫育→洗刷→加底物→溫育一加停止液→比色→判定成果。

ELISA試劑盒操作較繁雜,在操作中應(yīng)留意以下5個方面。

1. 跟著病情的進(jìn)展或由其他因素影響，某些抗體在機(jī)體內(nèi)的含量發(fā)作大幅動搖，因此有必要對標(biāo)本進(jìn)行預(yù)處理。間接法測定中，標(biāo)本恰當(dāng)稀釋還可下降非特異性反響。

2. 加樣一般運(yùn)用加液器，在ELISA試劑盒中一般有4次加樣：加標(biāo)本、加酶結(jié)合物、加底物和加停止液。加標(biāo)本時有必要每份標(biāo)本運(yùn)用一支移液器吸嘴，以免交叉污染。加酶結(jié)合物、底物和停止液時則不需更換吸嘴。

3. 在成批手藝檢測中，還應(yīng)留意操作時差的影響。加樣及混勻時刻的差異，使抗原抗體反響和酶促反響時刻不一致，對競爭法及定量檢測影響很大，不留意可能會導(dǎo)致錯誤成果或定量不準(zhǔn)。

4. 洗刷是ELISA試劑盒操作過程中決定試驗(yàn)勝敗的一個關(guān)鍵步驟。意圖是除去未結(jié)合的免疫反響物，停止抗原抗體反響，除去標(biāo)本中與反響無關(guān)的成分、游離的酶標(biāo)物以及反響過程中吸附于固相載體上的非特異性物質(zhì)?？捎孟窗鍣C(jī)洗板或手藝洗板，前者洗刷質(zhì)量較好，各反響孔洗刷作用均一，批內(nèi)、批間差異小，手藝洗板應(yīng)留意操控各孔洗刷作用，差異不宜太大。

5. 判定成果須運(yùn)用ELISA試劑盒測讀儀，比色法判讀可選擇單波長或雙波長，依據(jù)反響液色彩的不同選用不同波長的濾光片，以空白孔校零測定反響孔的吸光度值。酶標(biāo)儀具有杰出的重復(fù)性。