如何減少ELISA檢測試劑盒實驗中的誤差

做任何實驗，都不可能**，我們能做的就是盡zui大的努力減少實驗誤差。在ELISA試劑盒實驗操作中，誤差分有系統(tǒng)誤差、偶然誤差、過失誤差，而一個小小的誤差主意能夠影響到實驗，那么怎樣才能縮小實驗誤差呢？除了需要細心之外，還有一些需要重點注意的地方。 實驗室操作的基本素質和實踐經(jīng)驗。能熟練操作實驗儀器、器械，具有一定總結和分析問題的能力，對實驗中出現(xiàn)的意外情況能及時妥善解決。

    ②：使用校對過的微量移液器，排除自然誤差。移液器準確與否對定量檢測尤為重要。
    ③：仔細閱讀說明書，嚴格按照說明書要求進行規(guī)范化操作。不同批號的試劑不可混用。值得改進的地方，反復試驗確定成立后才能改進。
    ④：洗滌*，如若洗板不*，酶結合物本底顯色會呈現(xiàn)假陽性。洗滌液要新鮮，現(xiàn)用現(xiàn)配，陳舊的洗滌液會出現(xiàn)本底增高現(xiàn)象，也可能出現(xiàn)假陽性。
    ⑤：嚴控反應時間，反應時間過長，酶失活；反應時間過短，酶結合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結合，生成物結構松散不牢固，容易洗掉，都可能造成假陰性。
    ⑥：注意試劑盒保存期，過保存期的試劑不能使用。
    ⑦：評估試劑的實用性，試劑的穩(wěn)定與否，對準確率的高低到頭重要。在試劑啟用前，應進行陰、陽對照及樣品反復比照試驗，判定試劑符合要求后方可使用。
    ⑧：嚴格掌握顯色時間，顯色時間過短，加入終止液反應終止后，底物結合物的量過少，易出現(xiàn)假陰性。超過顯色要求時間后顯色，應判為假陽性，這可能與試劑本身有關。加顯色劑后立即顯色，不可報陽性，這可能是本底顯色的結果。
    ⑨：加樣要準確、快速。如果加樣不準確，酶生成物的量不能確定，直接影響顯色結果。顯色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關，所以加樣應慎重。要求在一定時間內加樣完畢的實驗，如果加樣遲緩，便出現(xiàn)誤差，而且試劑長時間暴露在外，尤其室溫過高時，保存期會縮短甚至失效。

而ELISA試劑盒試驗是一種敏感性高，特異性強，重復性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡便，結果判斷較客觀等因素，已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中。ELISA檢測試劑盒是用于體外定性檢測人血清或血漿中的抗體ELISA檢測。

但是您知道嗎？如果您在實驗過程中犯了以下幾個小錯誤的話也會出現(xiàn)實驗誤差的哦！
一、移液器的使用，加樣（抗體）等需要準確定量的試劑時不使用排槍，經(jīng)驗證明排槍很不準確，極易跳孔，不要圖便宜買低檔的tips 因為ELISA不但會放大被檢測的目的蛋白，也會放大非特異結合的雜質蛋白。
二、倍比稀釋樣品時，稀釋倍數(shù)要小于10。
三、所有的裝跟ELISA試劑盒相關試劑的容器，玻璃制品的要干烤過或者使用一次性的樹脂容器。
ELISA試劑盒除了以上幾點之外，以下的小細節(jié)也會幫您減少實驗誤差：
1.做實驗時少說話，防止唾液掉進酶標條中。
2.加入一抗二抗需要放入37°。
3.如果同時做多個板子，多個板子別羅一起；盡量少用排槍。
4.加樣時，由低濃度向高濃度加，這樣減少跳孔的幾率。
5.勤換槍頭。