小鼠凋亡相關(guān)因子配體(FASL)ELISA試劑盒使用說明書

elisa試劑盒組成

注：標準品（S0-S5）濃度依次為：0、30、60、120、240、480 U/ml

試劑的準備

 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法

1.   手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。
2.   自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

操作步驟

1.   從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.   設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3.   樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。
4.   除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.   棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6.   每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.   每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

結(jié)果判斷

 繪制標準曲線：在Excel工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應(yīng)OD值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。

試劑盒性能

1.  準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900。

2.  靈敏度：低檢測濃度小于1.0 U/ml。

3.  特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

4.  重復性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

5.  貯藏：2-8℃，避光防潮保存。

6.  有效期：6個月

免責聲明

1.   試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實驗者承擔，本公司概不負責。

2.   嚴格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔。

上海琛藝實業(yè)集技術(shù)，銷售為一體，需要ELISA試劑盒的，或者代做檢測的都可以聯(lián)系陳靜。。。。

?小鼠凋亡相關(guān)因子配體(FASL)ELISA試劑盒使用說明書

 能夠應(yīng)用ELISA 實驗的樣本種類很多，有血清，血漿，細胞上清，細胞裂解液，尿液，關(guān)節(jié)滑液，腦脊液，肺泡灌洗液，各種組織的組織勻漿；采集和處理的方式都不相同。下面就列出了 收集的給類樣本的采集、處理和保存方式。方法大多出自文獻和試劑盒說明書，部分方法驗證過，但有的方法并沒有實際操作過，所以，以下方法僅供參考。

 一、ELISA實驗中血清的采集、處理和保存；

1、 真空采血針采集2ml新鮮血液，加入無菌試管中；

2、 采血后室溫靜置1小時；

3、 將采集血液用離心機4℃，2500rpm離心10min，，將離心好的勻漿留上清，棄下面沉淀。

4、 取上清。 分裝凍存?zhèn)溆茫?/span>

2-8℃下，可放置保存24-48小時；

-20℃下，可放置保存1個月；

-70℃下，可放置保存6個月；

5、 根據(jù)你的實驗需要，取適量上清夜進行各種ELISA測定。 

大部分ELISA檢測均以血清為標本。血清標本可按常規(guī)方法采集，應(yīng)注意避免溶血，紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP為標記的 ELISA測定中，溶血標本可能會增加非特異性顯色。此外還應(yīng)避免細菌污染，因為菌體中可能含有含有內(nèi)源性HRP，也會產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。血清標本宜在新鮮 時檢測。如在冰箱中保存過久，其中的可發(fā)生聚合，在間接法ELISA中可使本底加深。

 二、ELISA實驗中血漿的采集、處理和保存；

1、 真空采血針采集2ml新鮮血液，加入無菌試管中；

2、 按1:9加入抗凝劑（EDTA、草酸鈉、肝素、枸櫞酸鈉），30分鐘內(nèi)于冰上分離血漿以減少血小板的污染；（也可以直接用抗凝管采集）；

3、 將采集血液用離心機4℃，2500rpm離心5min，，將離心好的勻漿留上清，棄下面沉淀。

4、 取上清。 分裝凍存?zhèn)溆茫?/span>

2-8℃下，可放置保存24-48小時；

-20℃下，可放置保存1個月；

-70℃下，可放置保存6個月；

5、 根據(jù)你的實驗需要，取適量上清夜進行各種ELISA測定。 請注意指標說明書上對于抗凝血劑是否有特殊要求，建議使用EDTA。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成份均同等于血清。

注意事項：制備血漿標本需借助于抗凝劑EDTA,抗凝不*的標本因纖維蛋白原干擾而造成假陽性。

 三、ELISA 實驗中尿液的采集、處理和保存；

1、 采集尿液樣本500ul，加入無菌試管中；

2、 將采集血液用離心機4℃，2500rpm離心10min，，將離心好的樣本留上清，棄下面沉淀。

3、 取上清。 分裝凍存?zhèn)溆茫?/span>

2-8℃下，可放置保存24-48小時；

-20℃下，可放置保存1個月；

-70℃下，可放置保存6個月；

4、 根據(jù)你的實驗需要，取適量上清夜進行各種ELISA測定。

 四、ELISA 實驗中腦脊液的采集、處理和保存；

1、采集腦脊液樣本，加入無菌試管中；

2、將采集血液用離心機4℃，2500rpm離心10min，，將離心好的樣本留上清，棄下面沉淀。

3、取上清。 分裝凍存?zhèn)溆茫?/span>

2-8℃下，可放置保存24-48小時；

-20℃下，可放置保存1個月；

-70℃下，可放置保存6個月；

4、根據(jù)你的實驗需要，取適量上清夜進行各種ELISA測定。

 五、ELISA 實驗中細胞上清液的采集、處理和保存；

1、采集細胞培養(yǎng)上清液500ul，加入無菌試管中；

2、將采集血液用離心機4℃，2500rpm離心10min，，將離心好的勻漿留上清，棄下面沉淀。

3、取上清。 分裝凍存?zhèn)溆茫?/span>

2-8℃下，可放置保存24-48小時；

-20℃下，可放置保存1個月；

-70℃下，可放置保存6個月；

4、根據(jù)你的實驗需要，取適量上清夜進行各種ELISA測定。

 六、ELISA 實驗中細胞裂解液的采集、處理和保存；（需要測蛋白濃度）

1、 取細胞培養(yǎng)板或細胞懸液，用PBS（PH7.2-7.4）洗滌細胞培養(yǎng)板1-2次。

2、 通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑（裂解液），使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。

3、 將采集血液用離心機4℃，2500rpm離心20min，，將離心好的勻漿留上清，棄下面沉淀。

4、 取上清。 分裝凍存?zhèn)溆茫?/span>

2-8℃下，可放置保存24-48小時；

-20℃下，可放置保存1個月；

-70℃下，可放置保存6個月；

5、 根據(jù)你的實驗需要，取適量上清夜進行各種ELISA測定。