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            人α2巨球蛋白(α2-MG)ELISA試劑盒使用說明書

            來源:上海琛藝實業(yè)有限公司   2019年09月11日 09:46  

             上海琛藝實業(yè)有限公司經(jīng)過數(shù)年的努力發(fā)展已迅速成為集產(chǎn)品研發(fā)、生產(chǎn)、經(jīng)營為一體的專業(yè)化生物工程公司。公司酶科品牌ELISA試劑盒研發(fā)的種屬涵蓋:人,大鼠,小鼠,豬,牛,羊,兔,植物,農(nóng)殘類,魚類等。具有完善的實驗技術(shù)開發(fā)平臺,成熟的抗原、抗體研發(fā)系統(tǒng),熟練掌握各種酶聯(lián)技術(shù),結(jié)合公司的研發(fā)團隊,可以有效的保證公司產(chǎn)品強的穩(wěn)定性和高的準確性,同時又具有競爭力的價格。公司目前主要提供生化試劑、分子生物學試劑及試劑盒,各種抗體及免疫學試劑盒、實驗耗材等多門類上萬種產(chǎn)品,產(chǎn)品涉及分子生物學、細胞生物學、免疫學等生命科學的各個領(lǐng)域。

            服務中文名稱:人α2巨球蛋白(α2-MG)ELISA試劑盒使用說明書

            規(guī)格:96T/48T

            品牌:琛藝酶科

            英文縮寫:CAMP

            種屬:人ELISA試劑盒

            檢測波長:450nm

            所需樣本體積:50-100ul

            適用范圍:僅供科研

            庫存:現(xiàn)貨

            保存及有效期:2-8℃,六個月

            檢測目的:用于測定血清,血漿及相關(guān)液體等樣本。

            例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦斧液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標本。

            琛藝供應的種屬有:人、大鼠、小鼠、豚鼠、兔子、豬犬、牛羊、雞鴨、植物ELSA試劑盒等

            上海琛藝實業(yè)長期代做人、大鼠、小鼠、兔子、豚鼠、豬、雞、犬、猴子、羊、牛等種屬elisa實驗。

                  我們可以根據(jù)您的應用需要,比如在檢測范圍、種屬以及靈敏度等方面有特殊要求,而量身定制檢測試劑盒,有效控制檢測試劑成本。并可提供免費代測。

            二、ELISA檢測概述

                  ELISA(酶聯(lián)接免疫吸附反應分析)是以免疫學反應為基礎(chǔ),將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的實驗技術(shù)。 由于抗原、抗體的反應在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行,每加入一種試劑孵育后,可通過洗滌除去多余的游離反應物,從而保證試驗結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。

                  實際應用中,通過不同的設計,具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測抗體的間接法、用于檢測抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。目前我們對客戶提供比較常用的ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法服務。

            人α2巨球蛋白(α2-MG)ELISA試劑盒使用說明書

            三、技術(shù)流程                  

            雙抗體夾心法(檢測未知抗原)

            間接法(檢測未知抗體)

            1、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應孔中加0.1ml,4℃ 過夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次。
            2、加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應孔中,置37℃ 孵育1小時。然后洗滌(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。
            3、加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.05ml。37℃ 孵育0.5~1小時,洗滌。
            4、加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。
            5、終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml
            6、結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。

            1、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1-10ug/ml, 每孔加0.1ml,4℃過夜。次日洗滌3次。
            2、加樣:加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.05ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)
            3、加酶標抗體:于反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.05ml,37℃孵育30-60分鐘,洗滌,后一遍用DDW洗滌。
            4、加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。
            5、終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml
            6、結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。

            操作步驟補充:

            1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在一、第二孔中分別加標準品100μl,然后在一、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。

            2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

            3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

            4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。

            5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。 6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

            7. 溫育:操作同3。

            8. 洗滌:操作同5。

            9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

            10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

            11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

            進口ELISA試劑盒具有靈敏性高、特異性強等特色,那怎樣避免ELISA實驗過程中的過錯呢? 
               
            :檢驗技師應具備從事實驗室操作的基本素質(zhì)和實踐經(jīng)驗。能嫻熟操作實驗儀器、器械,具有必定總結(jié)和分析問題的才能,對實驗中呈現(xiàn)的意外情況能及時妥善解決。
               
            第二:操作前仔細閱讀說明書,嚴格按照說明書要求進行規(guī)范化操作。不同批號的試劑不行混用。值得改善的當?shù)?,反復實驗確認建立后才能改善,比如洗板次數(shù)的把握等。
               
            第三:評估試劑的實用性,試劑的穩(wěn)定與否,對率的凹凸到頭重要。在試劑啟用前,應進行陰、陽對照及樣品反復比照實驗,斷定試劑符合要求后方可使用。
               
            第四:加樣要、快速。加樣不,酶生成物的量不能確認,直接影響顯色結(jié)果。別的,顯色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和停止液的量有關(guān),所以加樣應穩(wěn)重。要求在必定時刻內(nèi)加樣完畢的實驗,假如加樣遲緩,便呈現(xiàn)差錯,并且試劑長期露出在外,特別室溫過高時,保存期會縮短乃至失效。
               
            第五:使用校對過的微量移液器,排除自然差錯。移液器與否對定量檢測尤為重要
              
            第六:嚴格把握顯色時刻,顯色時刻過短,加入停止液反響停止后,底物結(jié)合物的量過少,易呈現(xiàn)假陰性。超過顯色要求時刻后顯色,應判為假陽性,這可能與試劑本身有關(guān)。加顯色劑后當即顯色,不行報陽性,這可能是本底顯色的結(jié)果。
               
            第七:洗刷*,洗板不*,酶結(jié)合物本底顯色會呈現(xiàn)假陽性。別的,洗刷液要新鮮,現(xiàn)用現(xiàn)配,陳舊的洗刷液會呈現(xiàn)本底增高現(xiàn)象,也可能呈現(xiàn)假陽性。
               
            第八:進口ELISA試劑盒嚴控反響時刻,反響時刻過長,酶失活;反響時刻過短,酶結(jié)合物不能與血清中的微生物抗原抗體充沛結(jié)合,生成物結(jié)構(gòu)松懈不牢固,容易洗掉,都可能形成假陰性。

             

             

             

             

             

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