小鼠α干擾素(IFN-α)科研ELISA試劑盒*

ELISA快速檢測(cè)技術(shù)越來越多的用于疾病診斷、食品安全檢測(cè)中，那么ELISA試劑盒的主要組成成份是什么呢？根據(jù)ELISA試劑盒的應(yīng)用范圍，可將ELISA試劑盒分為拿幾種呢？
ELISA試劑盒主要的組成成份如下：

(1)已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑)；
(2)C的抗原或抗體(結(jié)合物)；
(3)酶的底物；
(4)陰性對(duì)照品和陽性對(duì)照品(定性測(cè)定中)，參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清(定量測(cè)定中)；
(5)結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液；
(6)洗滌液，在板式ELISA中，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水；
(7)酶反應(yīng)終止液，常用的HRP反應(yīng)終止液為硫酸，其濃度按加量及比色液的終體積而異，在板式ELISA中一般采用2mol/L。

常見的ELISA試劑盒
一、食品安全檢驗(yàn)ELISA試劑盒
是指食品中的激素、藥物、霉菌毒素、過敏原殘留、轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的檢測(cè)試劑盒，以及微生物、維生素等的檢測(cè)產(chǎn)品。
包括植物病毒、細(xì)菌、真菌、植物激素和轉(zhuǎn)基因作物的農(nóng)業(yè)診斷試劑盒，以及動(dòng)植物疾病診斷類如豬、牛、羊、馬等家畜和禽類以及寵物類檢測(cè)試劑盒。
二、生物原裝ELISA試劑盒以及各類國產(chǎn)ELISA試劑盒
1、細(xì)胞因子檢測(cè)試劑盒：
如白介素、選擇素、集落刺激因子，腫瘤壞死因子，干擾素，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子，趨化因子，細(xì)胞因子受體，粘附分子，生長(zhǎng)因子，凋亡因子等等
2、心肌梗塞檢測(cè)ELISA試劑盒
如肌鈣蛋白，肌紅蛋白，C-反應(yīng)蛋白等等
3、內(nèi)分泌檢測(cè)ELISA試劑盒
如甲狀腺，胰腺，性激素，孕酮，睪酮，生長(zhǎng)激素，生長(zhǎng)抑素，內(nèi)皮素，皮質(zhì)醇，骨鈣素，催乳素，促腎上腺皮質(zhì)激素，促卵泡素，雌二醇，雌三醇，5-羥色胺，17-羥孕酮等等
4、肝纖維化檢測(cè)ELISA試劑盒
如纖維連接蛋白，透明質(zhì)酸，膠原，基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子，基質(zhì)金屬蛋白酶，層粘蛋白等等
5、自身免疫檢測(cè)ELISA試劑盒
如甲狀腺，鹽水可提取核抗原抗體(ENA)，抗核抗體，DNA，抗心磷脂抗體，類風(fēng)濕因子，循環(huán)免疫復(fù)合物，抗胰島細(xì)胞抗體，胰蛋白酶原，Sm，大皰性類皰瘡，蛋白酶，短膜蟲法，肝-腎，肝-腎-胃，肌內(nèi)膜抗體，角蛋白抗體，抗核抗體，抗核糖體蛋白抗體，抗聚角蛋白微絲蛋白抗體，抗鏈O，抗卵巢抗體，抗平滑肌抗體，抗線粒體抗體，等等
7、優(yōu)生優(yōu)育檢測(cè)ELISA試劑盒
如早早孕，新生兒TSH，胎膜早破檢測(cè)，抗子宮內(nèi)膜抗體，抗心磷脂抗體，抗透明帶抗體，抗卵細(xì)胞透明帶抗體，抗卵巢抗體，抗精子抗體，巨細(xì)胞病毒，弓形體，風(fēng)疹病毒，分娩預(yù)測(cè)，單核白細(xì)胞增多癥，單純皰疹病毒，促卵泡素，促黃體生成素，便隱血試紙，HCG等等
8、傳染病檢測(cè)ELISA試劑盒
如幽門螺桿菌，乙腦，乙肝，丙肝，丁肝，戊肝，庚肝，衣原體，性病，腺病毒，微小病毒B19，天皰瘡，水痘-帶狀皰疹病毒，生殖支原體，傷寒，沙眼，腮腺炎，人型支原體，麻疹，輪狀病毒，流行性出血熱，淋球菌，萊姆病，柯薩奇，抗解尿支原體，軍團(tuán)菌，結(jié)核，膠原，尖銳濕疣，甲肝，脊髓灰質(zhì)炎，急性胰腺炎尿胰蛋白酶，霍亂，呼吸道合胞病毒，肝吸蟲，副流感，肺炎，帶狀皰疹，傳染性單核細(xì)胞增多癥，層粘蛋白，布魯氏桿菌，百日咳，白喉，艾柯病毒，EB 病毒，A族鏈球菌等等
9、特種蛋白檢測(cè)ELISA試劑盒
如免疫球蛋白，抗鏈O-aso，類風(fēng)濕因子RF，C反應(yīng)蛋白，微量白蛋白，β-2微球蛋白human，鐵蛋白，轉(zhuǎn)鐵蛋白transferrin等等
10、腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)ELISA試劑盒
如腫瘤標(biāo)志物，組織多肽抗原，腫瘤相關(guān)因子，胰腺癌，直腸癌，細(xì)胞角蛋白片段，胃腸癌，鐵蛋白，糖鏈抗原，神經(jīng)特異性稀醇化酶，上皮膜抗原，乳腺癌，人抗小鼠抗體，前列腺，甲胎蛋白，肝癌，大腸癌，肺癌，大小便隱血檢測(cè)，癌胚抗原，β-2微球蛋白等等

樣本

0分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。

仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。

2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。

3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。

6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.

7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

小鼠α干擾素(IFN-α)科研ELISA試劑盒*-elisa操作步驟：

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后從一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。

2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。 6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

elisa注意事項(xiàng)：

1． 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2． 濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

3． 各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4． 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔一孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6． 底物請(qǐng)避光保存。

7． 嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8． 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9． 本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。

計(jì)算：

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)， 在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋 倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo) 準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值 代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋 倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。

保存條件及有效期：

1.試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個(gè)月

上海琛藝實(shí)業(yè)經(jīng)過10年ELISA試劑盒技術(shù)的積累與沉淀，不斷創(chuàng)新突破，始終以"提供zuei好的質(zhì)量給客戶，為客戶的利益服務(wù)"為理念。主要包括：小鼠ELISA試劑盒、人ELISA試劑盒、大鼠ELISA試劑盒、豬ELISA試劑盒、牛ELISA試劑盒等。