人胃癌細(xì)胞（未分化）HGC-27|HGC-27細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

1. 器械和器皿

器械：外科剪、鑷子、虹膜剪等、小剪刀、細(xì)鑷子和虹膜小刀等

各種金屬器械如解剖器械，使用后及時(shí)刷洗干凈，用酒精棉球擦拭后晾干，或經(jīng)60°C烘干，以防生銹。由于濕熱消毒對手術(shù)器械容易可用70－80％酒精浸泡1小時(shí)以上消毒。

器皿：1) 玻璃瓶及相應(yīng)的膠塞或人胃癌細(xì)胞（未分化）HGC-27細(xì)胞膠木螺旋蓋

用于分裝血清、多聚賴氨酸、解剖液、各種鹽溶液和培養(yǎng)液等。

2)用培養(yǎng)瓶、蓋玻片

培養(yǎng)用的蓋玻片必須不含鉛、不發(fā)霉，可用0.2N鹽酸浸泡10分鐘，用蒸餾水洗2次，每次10分鐘，然后移入丙酮或乙醇浸泡10分鐘，再用雙蒸水洗2次，每次10分鐘，烘干待消毒。凡組織學(xué)用過的舊蓋玻片一般不用。人胃癌細(xì)胞（未分化）HGC-27細(xì)胞

3) 移液管、吸管、燒杯、離心管和培養(yǎng)皿。

4) 塑料培養(yǎng)皿（35mm）、塑料培養(yǎng)板（6、24、96孔）。

輔助工具：放置試管、吸管和玻璃瓶等的架子。

細(xì)胞識別，根據(jù)細(xì)胞外形及內(nèi)部結(jié)構(gòu)進(jìn)行細(xì)胞的識別。神經(jīng)細(xì)胞具有顯著的特征，培養(yǎng)中的貼壁的神經(jīng)元突起很明顯，特別是樹突由粗人胃癌細(xì)胞（未分化）HGC-27細(xì)胞而細(xì)，有分支，突起的末端有膨大的生長錐結(jié)構(gòu)，正在不斷變化；細(xì)胞體呈圓形、梭形、三角形或多角形不等，胞體較厚，具有空泡狀核，有明顯的核仁；立體感強(qiáng)，常見“暈”。培養(yǎng)細(xì)胞中可包括幾種神經(jīng)元的類型和非神經(jīng)元的“背景細(xì)胞”，即成纖維細(xì)胞、室管膜細(xì)胞和幾種膠質(zhì)細(xì)胞。成纖維細(xì)胞貼壁zui快，呈扁平狀，胞核卵園形，有并列的兩粒小核仁，從胞體兩端發(fā)出細(xì)長突起。膠質(zhì)細(xì)胞貼附在膠原上和成纖維細(xì)胞形成一層“地毯”。神經(jīng)細(xì)胞貼壁較慢，落在“地毯”上生長遷移和分化。

培養(yǎng)的神經(jīng)細(xì)胞可按一般Nissl法染色或免疫細(xì)胞化學(xué)特異性染色加以鑒別。

二．使用方法

1、您收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作：

取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時(shí)以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)，然后換用新鮮*培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進(jìn)行傳代。

2、細(xì)胞傳代：

1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2）用5-6ml*培養(yǎng)基輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀細(xì)胞用12ml*培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代，zui后放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）待細(xì)胞*貼壁后，觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代。

3、細(xì)胞凍存：

1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；

4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。 

4、細(xì)胞復(fù)蘇：
1）從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；
2）將凍存管中的細(xì)胞移至含5ml*培養(yǎng)基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀用5ml*培養(yǎng)基重懸，接種25cm2培養(yǎng)瓶，于37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）第二天，換用新鮮*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

T25瓶處理方法

收到后，檢查外包裝是否完整，細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好。如有破損漏液等問題，請即時(shí)。并進(jìn)行以下操作：

1. 75%酒精棉球擦拭T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶外部。

2. 將細(xì)胞放入37度培養(yǎng)箱中預(yù)溫3-4小時(shí)后再做處理，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

3. 預(yù)熱培養(yǎng)基（含10%胎牛血清，1%雙抗）。

4. 顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存（40×,100×,200×各一張）。

5. ①若細(xì)胞密度較小，無菌操作，去掉培養(yǎng)基。每瓶添加第四步中準(zhǔn)備的5-6ml培養(yǎng)基。放到37度培養(yǎng)箱培養(yǎng)。待細(xì)胞密度達(dá)到80%以上，進(jìn)行傳代。

②若細(xì)胞密度較大，達(dá)到80%以上，將細(xì)胞傳代培養(yǎng)。

注：

培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基血清濃度為5%，建議更換成自己配好的新鮮培養(yǎng)基。由于運(yùn)輸過程中的問題，細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細(xì)胞有可能從瓶壁中脫落下來，顯微鏡下觀察會出現(xiàn)細(xì)胞懸浮的情況，這時(shí)請?jiān)谂恼蘸髮腋〉募?xì)胞即時(shí)離心，加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)3天；同時(shí)原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細(xì)胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基。（這里是針對原來*培養(yǎng)基FBS濃度是10%的情況，如果原來FBS濃度是20%，可以增加到25%FBS濃度）   收到細(xì)胞后如細(xì)胞狀態(tài)不佳或培養(yǎng)中遇到問題，煩請當(dāng)天盡快并提供圖片，以便售后處理。7天內(nèi)反饋，本身問題免費(fèi)重發(fā)如人為原因?qū)е驴筛鶕?jù)實(shí)際情況酌情處理；7天內(nèi)未接到任何反饋視為合格，不予免費(fèi)售后