產(chǎn) 品 名：HPAF-II細胞|人胰腺癌細胞HPAF-II 處理方法
英文名： HPAF-II  人胰腺癌細胞
生長狀態(tài)： 貼壁；上皮細胞樣 
年   限： 1-52 
運輸方式： 干冰運輸or活細胞運輸 
器官來源：  胰腺
細胞形態(tài)：  貼壁；上皮細胞樣
物種來源： 人 
組織來源：  胰腺
品   系： 細胞系 
數(shù)   量： 大量
規(guī)   格： 1000000細胞/株 
細胞名稱：HPAF-II  人胰腺癌細胞
培養(yǎng)條件：DMEM+10% FBS
HPAF-II細胞培養(yǎng)的基本技術(shù)-（培養(yǎng)、傳代、凍存）：
培養(yǎng)基的配置：基礎(chǔ)培養(yǎng)基500ml+胎牛血清50ml+雙抗5ml
凍存液的配置：DMSO18ml+胎牛血清2ml。
依次比例酌量配置。
超凈工作臺常規(guī)配置：
移液器1套（2.5μl、20μl、200μl、1ml），酒精燈1盞，液器1臺，斜架1臺，酒精噴壺1個，酒精棉球缸1個，污缸1個，
常規(guī)耗材：培養(yǎng)瓶（50㎝2），定量移液管（5ml、10ml），槍頭（1ml、200μl、10μl），培養(yǎng)皿，6/24/48/96孔板，醫(yī)用脫脂棉球，保種管
所需試劑：gibco高糖培養(yǎng)基，胎牛血清，雙抗，DMSO，胰酶，苯扎溴氨，75%酒精……

HPAF-II細胞|人胰腺癌細胞HPAF-II 處理方法
實驗前準(zhǔn)備：
所需的各項高壓后的耗材放于超凈工作臺內(nèi)，用酒精噴壺噴灑實驗臺面，并關(guān)閉工作臺打開紫外燈照射30min后開始實驗操作。
*傳代前HPAF-II細胞的復(fù)蘇，首先用一大燒杯盛滿37℃的溫水放于液氮罐旁邊，待取出后留上端1/3于37℃水面上盡大速搖動管使其在2min內(nèi)迅速融化。若種管頂部含有凍存的細胞液在搖動期間用力甩動使其降于管底后再搖動。這一過程可在超凈工作臺外操作。
細胞傳代
1. 紫外消毒30min后關(guān)閉紫外燈，開啟超凈臺正常工作狀態(tài)，用酒精消毒操作者的雙手。
2. 將所需的培養(yǎng)基，胰酶確保瓶身干凈后放于工作臺面內(nèi)，點燃酒精燈，將培養(yǎng)基和胰酶瓶口用酒精棉球擦拭后，再將瓶口對準(zhǔn)在酒精燈上消毒2-3次，旋開瓶蓋后再次分別消毒瓶口和瓶蓋，分別放于酒精燈的兩側(cè)。特別是將培養(yǎng)基瓶放于斜架上，瓶口對準(zhǔn)酒精燈，且放在距離酒精燈近的位置，瓶蓋置于酒精燈的另一側(cè)。
3. 將培養(yǎng)瓶瓶口在酒精燈上消毒2-3次，旋開后分別再次消毒瓶口和瓶蓋2-3次，瓶蓋放于酒精燈右側(cè)后將培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)液懸空倒進污缸，在酒精燈消毒2-3次瓶口，豎直放好。取1ml移液器快速移動在酒精燈上消毒1-2次，然后再裝上槍頭吸取1.5ml胰酶液，懸空移入培養(yǎng)瓶內(nèi)。
4.  將培養(yǎng)瓶平放使胰酶浸沒整個瓶壁的細胞層，計時約40s，立馬豎起對著燈光可觀察到細胞與HPAF-II細胞之間有針孔樣縫隙，并有1-2個細胞脫落，這時為胰酶消化的適時機。若看到成片的細胞從瓶壁脫落為胰酶消化過度；若看不到針孔樣縫隙和細胞脫落，則需繼續(xù)消化，輕輕的迅速平放培養(yǎng)瓶使胰酶浸沒細胞層1s后迅速豎起對著燈光觀察細胞情況，可反復(fù)幾次，直至出現(xiàn)針孔樣縫隙和1-2個細胞脫落的*消化狀態(tài)。用移液器將胰酶吸凈。
5. 吸取1ml培養(yǎng)基于培養(yǎng)瓶內(nèi)，并用移液器吸取少量的培養(yǎng)基輕柔的反復(fù)沖洗培養(yǎng)瓶壁5-8次，使貼壁HPAF-II細胞*脫落于培養(yǎng)基內(nèi)再輕輕吹打2-3次，使細胞盡可能處于單個懸浮狀態(tài)。
6. 取2或3個高壓后的新培養(yǎng)瓶，瓶口在酒精燈上消毒2-3次，旋開后分別再次消毒瓶口和瓶蓋2-3次分別放于酒精燈兩側(cè)，然后將細胞培養(yǎng)基均勻的分到3或4個培養(yǎng)瓶內(nèi)（注意原來傳代時使用的培養(yǎng)瓶可繼續(xù)傳代使用），進行1傳3或1傳4的培養(yǎng)。
7. 拿出1支高壓后的5ml定量移液管，在酒精燈上灼燒尾部后裝于電動移液器上，再次放于酒精燈上灼燒整個定量移液管管身2-3次，懸空進入培養(yǎng)基瓶內(nèi)吸取4ml培養(yǎng)基懸空移入每個培養(yǎng)瓶內(nèi)，將培養(yǎng)瓶瓶口和瓶蓋在酒精燈上消毒2-3次后擰緊平放，在瓶身做好實驗標(biāo)記。
8. 將培養(yǎng)基瓶口和瓶蓋消毒2-3次后擰緊，熄滅酒精燈，整理實驗臺面，取出實驗試劑及污缸等，關(guān)閉超凈工作臺。
9. 將培養(yǎng)瓶放于28℃,5%CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，旋開瓶口少許。注意整個培養(yǎng)箱底托盤內(nèi)一定要放高壓后的水，且定期更換確保無菌。
每天定時觀察HPAF-II細胞生長情況，一般72-96h后，細胞生長密度大于90%，即可進行細胞的傳代或保株。