上海琛藝實業(yè)有限公司經過數年的努力發(fā)展已迅速成為集產品研發(fā)、生產、經營為一體的專業(yè)化生物工程公司。公司新引進細胞上千株，其中人的已通過STR鑒定的有幾百株，歡迎各位選購。。。。。。

產品名稱：MCF/Adr-LUC人乳腺癌阿霉素耐藥熒光素酶標記細胞 培養(yǎng)步驟

包裝：內層無菌自封袋；防壓泡沫盒；外層防壓保溫氣泡袋；說明書

細胞來源：ATCC、sciencell、ICLC

貨期：1-2周

運輸方式：快遞運輸

售后：收到細胞后12天，如發(fā)現細胞有質量問題（如污染，死亡，快遞運輸等原因）時，應出具書面質量問題報告并及時通知銷售人員，我們將盡快為您解決！

三、細胞生長條件：

上海琛藝實業(yè)有限公司新增細胞庫，具有自己的研發(fā)細胞培養(yǎng)庫，上千株細胞具有STR鑒定，開學大放送，*，同時還有好禮相送，具體歡迎咨詢我們銷售人員。。。。

產品名稱：NCI-H1299-LUC人肺腺癌細胞-熒光素酶標記 細胞培養(yǎng)步驟

?細胞數量： 1*10^6

?細胞種屬： 人源

?生長特性： 貼壁

?培養(yǎng)基： DMEM-H

?形態(tài)特征： 成纖維細胞樣

?傳代方法： 1:3傳代,2-3天傳一代

?培養(yǎng)條件： 胎牛血清至終濃度為10％。環(huán)境：空氣，95％;二氧化碳（CO2），5％；溫度，37℃

?細胞描述： 親本L的亞克隆，是早建立的連續(xù)傳代細胞之一，L細胞源自100天的雄性C3H/An小鼠的皮下網眼狀空隙和脂肪組織。APRT+，HPRT+。

?細胞凍存： 液氮凍存（凍存液基礎培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO）

?細胞運輸： 干冰運輸（2ml凍存管）或活細胞運輸（T25瓶）

NCI-H1299-LUC人肺腺癌細胞-熒光素酶標記 細胞培養(yǎng)步驟

形態(tài)特性 上皮細胞樣　 

生長特性 貼壁生長 

凍存條件 基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS　 

細胞周期分為細胞間期和細胞分裂期，細胞間期較長，而細胞分裂期較短。

細胞間期是為細胞分裂的準備時期，表現為細胞增大，營養(yǎng)物質增多。細胞分裂期則是一個細胞由兩個細胞分解為一個細胞的過程。

細胞是生命的基本單位，細胞的特殊性決定了個體的特殊性，因此，對細胞的深入研究是揭開生命奧秘、改造生命和征服疾病的關鍵。細胞生物學已經成為當代生物科學中發(fā)展zui快的一門學科，是生物、農學、醫(yī)學、畜牧、水產和許多生物相關專業(yè)的一門必修課程。

依據細胞種類和濃度，于無菌操作臺內取 10 ml培養(yǎng)基加至 T25或 T75 flask中。取出已解凍之細胞懸浮液，緩緩加入T25 或T75 flask 內之培養(yǎng)基， 混 合均勻，放入37 °C，5 % CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

培養(yǎng)步驟：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL*培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

1、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的*培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細胞，*脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。

PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內，嚴格無菌操作；將小管細胞轉移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右*培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）。

二、懸浮細胞

1.用75%酒精噴灑整個瓶消毒，然后置于無菌操作臺，打開瓶口，輕輕吹打后，將其中的細胞懸液轉移到離心管中，然后1200rpm離心3min，去上清；

2.將離心好的細胞轉移至T-25瓶中，并加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基，然后將其置于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據細胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對其進行換液（離心后去舊液，加入新鮮培養(yǎng)基）；

3.顯微鏡觀察細胞數目比較多時，對其進行傳代，di一次傳代比例為1:2（離心后平均分成兩瓶培養(yǎng)）。

細胞總數：

1~3*106

傳代周期：

2-3天

傳代比例：

1:2~1:4

換液頻率：

2-3天

凍存液：

90%FBS+10%DMSO

四、注意事項：

1 收到細胞后首先觀察T-25瓶是否有損壞、漏液、渾濁等現象，若有上述現象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2 瓶中運輸的培養(yǎng)液不能重復使用，請換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)

3 對于貼壁細胞，若大部分細胞漂浮，置于培養(yǎng)箱隔夜觀察，大部分漂浮細胞重新貼壁，表明細胞活力正常，繼續(xù)培養(yǎng)，剩余漂浮的細胞可以去掉；若大部分細胞仍然不貼壁，將漂浮的細胞離心收集，用臺盼藍染色鑒定細胞活力，并與本公司銷售人員及時聯(lián)系。

4 建議客戶收到細胞后不同倍鏡各拍幾張細胞的照片，記錄細胞狀態(tài)，如細胞狀態(tài)出現問題請于72h內與本公司銷售聯(lián)系，以便于更好的幫您解決問題，超過時間我段，本公司則默認細胞狀態(tài)良好，不免費對后續(xù)細胞狀態(tài)問題進行售后。

做細胞實驗的同學看過來。

選擇上海琛藝生物細胞有3個理由：

1、細胞狀態(tài)好，形態(tài)佳，易成活，是市面上比較好養(yǎng)的細胞之一;

2、物流迅速，復蘇好后發(fā)貨，次日就能到;

3、使用我司推薦的進口品牌血清進行培養(yǎng)實驗，效果更佳。

細胞保種心得：

首先，細胞采購的運輸形式一般分為兩種，一種是直接寄送凍存細胞，一種是復蘇后寄送活細胞。前者是由液氮中取出細胞凍存管，采用干冰運輸；后者是將細胞復蘇至T-25培養(yǎng)瓶中，采用常溫運輸。兩者各有優(yōu)缺點，di一種方式的優(yōu)點是可以長途運輸，因為細胞在干冰中相對穩(wěn)定，一般可以保證數周之內不影響細胞活性，但缺點是運輸成本高，且細胞復蘇是很復雜的過程，如果細胞復蘇后狀態(tài)不佳，則很難界定是來源的問題還是復蘇操作的問題；而第二種方式的優(yōu)點是細胞收到后可以直接通過觀察來大體了解細胞狀態(tài)，并且對運輸的要求相對較低，缺點則是只適合短途運輸，因為即便運輸時培養(yǎng)基中不添加血清，細胞還是會不斷增殖，當細胞長滿后，細胞的狀態(tài)會隨時間的增加而不斷變差。綜上，如果是從國外大型細胞庫采購，一般采用di一種方法，既能適應長途運輸，且大型細胞庫的凍存細胞質量普遍較好，在良好的操作下復蘇成活率很高；如果是從國內細胞庫采購，則一般采用第二種方法，方便收到細胞時能較好掌握細胞狀態(tài)，并且降低運輸成本。

細胞分別針對兩種運輸方式來談下對新細胞的處理過程：

對于直接寄送凍存細胞的情況，首先要檢查的就是細胞收到后是否有足量剩余干冰，如果干冰不足，或是已經沒有干冰，則細胞狀態(tài)可能會收到影響，建議盡快復蘇；如果有足量干冰，建議先轉移至-80℃冰箱過夜，于第二天按正常流程復蘇，即37℃水浴鍋中快速融解，低速離心后去除含DMSO的凍存液，換入適合細胞的新鮮培養(yǎng)基，輕柔吹勻后轉移至培養(yǎng)皿中，補足培養(yǎng)基；一般貼壁細胞在24h內即可觀察到細胞貼壁，從而判斷細胞狀態(tài)，懸浮細胞則復蘇后即可觀察細胞狀態(tài)。對于凍存時間較長的細胞，可能需要傳代1到2次后，細胞才會調整到正常狀態(tài)，所以細胞復蘇后如果狀態(tài)不佳，不要灰心，仍要細心培養(yǎng)。

對于復蘇后寄送活細胞的情況，則細胞收到后要先檢查細胞瓶是否有破損，細胞瓶在運輸中很有可能受到碰撞和擠壓，導致瓶體受損。如果發(fā)現細胞瓶受損，則需要盡快處理，該棄就棄。如果細胞瓶完好，則用酒精消毒瓶身，去除封口膜，然后置于37℃培養(yǎng)箱中靜置1-2h。待細胞穩(wěn)定后，觀察細胞狀態(tài)，并及時記錄，因為很多國內細胞庫都是可以反饋細胞狀態(tài)的，如果收到時細胞狀態(tài)不佳甚至污染，是可以要求重新寄送的。細胞如沒有異常，則盡快傳代并更換適合細胞的新鮮培養(yǎng)基。由于新細胞一般都是di一次接觸，細胞傳代過程中尤為需要注意胰酶消化時間，消化時間過短或過長都會影響細胞狀態(tài)，甚至導致細胞死亡。我建議大家采用低濃度胰酶消化，消化時縮短放培養(yǎng)箱和觀察的間隔時間，以便盡可能找到合適的消化時間。

一、實驗前準備工作：

1、培養(yǎng)瓶的包被：包被液如多聚賴氨酸（PLL，ScienCell品牌）或纖維粘連蛋白（BPF，ScienCell品牌），以無菌水稀釋至2 ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶。37度孵箱1小時或4度過夜，從包被好的培養(yǎng)瓶中回收多聚賴氨酸，并用無菌水洗滌培養(yǎng)瓶2遍。包被好的培養(yǎng)瓶不要放置超過24小時，其中的包被液可吸出重復使用2-3次，注意不要污染。

2、*培養(yǎng)基的配置：以內皮細胞培養(yǎng)基（ECM，ScienCell品牌）為例，把配套的胎牛血清（FBS，ScienCell品牌）、生長因子（ECGS，ScienCell品牌）和雙抗（P/S，ScienCell品牌）加入基礎培養(yǎng)液（ECM，ScienCell品牌）中。重新貼好標簽，并混勻培養(yǎng)基。

二、原代細胞復蘇方法：

1、從液氮中取出原代細胞冷凍管，迅速投入37～38 ℃水浴中，其間可以輕輕轉動細胞，加快融化速度，大約需要1分鐘時間。

2、5分鐘內用培養(yǎng)基稀釋至原體積的10倍以上，加入培養(yǎng)瓶中，再用1ml培養(yǎng)基洗滌細胞凍存管，保證細胞都被加入培養(yǎng)瓶中，靜置于孵箱，12-16小時后更換培養(yǎng)基（除去DMSO）。以后每2天換一次液，保證細胞狀態(tài)良好。

三、原代細胞傳代方法：酶消化法

當細胞生長至70-80%左右可以傳代，傳代比例以1:2或1:3為佳。具體方法如下：

1、棄去培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基，用PBS洗滌培養(yǎng)瓶2遍，加入0.25%的胰酶消化液（Trypsin-EDTA，ScienCell品牌，貨號0103），以消化液能覆蓋整個瓶底為準。37度孵育4分鐘左右，輕拍培養(yǎng)瓶側面，顯微鏡下觀察細胞消化情況，直到80%細胞呈現圓形。

2、細胞消化好后，加入胰酶中和液（TNS，ScienCell品牌，貨號0113），并輕輕搖動培養(yǎng)瓶，形成細胞懸液，然后將細胞和培養(yǎng)基轉移至離心管中，1000rpm離心5分鐘。

3、棄去上清液，以1-2ml新鮮培養(yǎng)基重新懸浮細胞并吹打均勻，接種于包被好的新培養(yǎng)瓶中，瓶中已有10ml左右的培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每2天更換培養(yǎng)基。

K562/Adr-GFP 人白血病阿霉素耐藥株-綠色標記

K562-LUC 人白血病細胞-熒光素酶標記

K562-GFP 人白血病細胞-綠色標記

KB-LUC 人口腔上皮癌細胞-熒光素酶標記

KB-GFP 人口腔上皮癌細胞-綠色標記

KYSE150-LUC 人食管鱗癌-熒光素酶標記

KYSE150-GFP 人食管鱗癌-綠色標記

KYSE410-LUC 人食管癌-熒光素酶標記

KYSE410-GFP 人食管癌-綠色標記

KYSE450-LUC 人食管癌-熒光素酶標記

KYSE450-GFP 人食管癌-綠色標記

KYSE510-LUC 人食管癌細胞-熒光素酶標記

KYSE510-GFP 人食管癌細胞-綠色標記

L1210/DDP-LUC 小鼠白血病耐順鉑細胞株-熒光素酶標記

L1211/DDP-GFP 小鼠白血病耐順鉑細胞株-綠色標記

L1210-LUC 小鼠白血病細胞-熒光素酶標記

L1210-GFP 小鼠白血病細胞-綠色標記

Lewis-LUC 小鼠肺癌細胞-熒光素酶標記

Lewis-GFP 小鼠肺癌細胞-綠色標記

LLC-LUC 小鼠肺癌細胞-熒光素酶標記

LLC-GFP 小鼠肺癌細胞-綠色標記

LNCaP-LUC 人前列腺癌-熒光素酶標記

LNCaP-GFP 人前列腺癌-綠色標記

LNCaP clone FGC-LUC 人前列腺癌細胞-熒光素酶標記

LNCaP clone FGC-GFP 人前列腺癌細胞-綠色標記

lovo/Adr-LUC 人結腸癌耐阿霉素細胞株-熒光素酶標記

lovo/Adr-GFP 人結腸癌耐阿霉素細胞株-綠色標記

LOVO-LUC 人結腸癌細胞-熒光素酶標記

LOVO-GFP 人結腸癌細胞-綠色標記

MCF/Adr-LUC 人乳腺癌阿霉素耐藥細胞株-熒光素酶標記

MCF/Adr-GFP 人乳腺癌阿霉素耐藥細胞株-綠色標記

MCF-7-LUC 人乳腺癌細胞-熒光素酶標記

MCF-7-GFP 人乳腺癌細胞-綠色標記

MDA-MB-231-LUC 人乳腺癌細胞-熒光素酶標記

MDA-MB-231-GFP 人乳腺癌細胞-綠色標記

MDA-MB-435-LUC 人乳腺癌高轉移細胞-熒光素酶標記

MDA-MB-435-GFP 人乳腺癌高轉移細胞-綠色標記

MDA-MB-468-LUC 人乳腺癌細胞-熒光素酶標記

MDA-MB-468-GFP 人乳腺癌細胞-綠色標記

MFC-LUC 小鼠胃癌細胞-熒光素酶標記

MFC-GFP 小鼠胃癌細胞-綠色標記

MG-63-LUC 人成骨肉瘤細胞-熒光素酶標記

MG-63-GFP 人成骨肉瘤細胞-綠色標記

MGC-803-LUC 人胃腺癌-熒光素酶標記

MGC-803-GFP 人胃腺癌-綠色標記

MGC-823-LUC 人低分化前胃癌細胞-熒光素酶標記

MGC-823-GFP 人低分化前胃癌細胞-綠色標記

MKN-28-LUC 人胃癌高轉移細胞-熒光素酶標記

MKN-28-GFP 人胃癌高轉移細胞-綠色標記

MKN45-LUC 人胃癌細胞-熒光素酶標記

MKN45-GFP 人胃癌細胞-綠色標記

MRC-5-LUC 人胚肺成纖維細胞

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MV3-LUC 人黑色素瘤細胞-熒光素酶標記

MV3-GFP 人黑色素瘤細胞-綠色標記

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PC12-GFP 大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞-綠色標記

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PC-3-GFP 人前列腺癌-綠色標記

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Raji-GFP 人Burkitt`s淋巴瘤細胞-綠色標記

RKO-LUC 人結腸癌細胞-熒光素酶標記

RKO-GFP 人結腸癌細胞-綠色標記

RL95-2-LUC 人子宮內膜癌細胞-熒光素酶標記

RL95-2-GFP 人子宮內膜癌細胞-綠色標記

S-180-LUC 小鼠肛門肉瘤細胞-熒光素酶標記

S-180-GFP 小鼠肛門肉瘤細胞-綠色標記

Saos-2-LUC 人成骨肉瘤細胞-熒光素酶標記

Saos-2-GFP 人成骨肉瘤細胞-綠色標記

SGC-7901-LUC 人胃癌細胞-熒光素酶標記

SGC-7901-GFP 人胃癌細胞-綠色標記

SHG-44-LUC 人神經膠質瘤細胞-熒光素酶標記

SHG-44-GFP 人神經膠質瘤細胞-綠色標記

SK-BR-3-LUC 人乳腺癌細胞-熒光素酶標記

SK-BR-3-GFP 人乳腺癌細胞-綠色標記

SK-HEP-1-LUC 人肝癌細胞-熒光素酶標記

SK-HEP-1-GFP 人肝癌細胞-綠色標記

SK-OV-3-LUC 人卵巢癌細胞-熒光素酶標記

SK-OV-3-GFP 人卵巢癌細胞-綠色標記

SMMC-7721-LUC 人肝癌細胞-熒光素酶標記

SMMC-7721-GFP 人肝癌細胞-綠色標記

SRA01/04-LUC 人晶體上皮細胞-熒光素酶標記

SRA01/04-GFP 人晶體上皮細胞-綠色標記

SW116-LUC 人大腸癌細胞-熒光素酶標記

SW116-GFP 人大腸癌細胞-綠色標記

SW1990-LUC 人胰腺腺癌-熒光素酶標記

SW1990-GFP 人胰腺腺癌-綠色標記