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上海琛藝實(shí)業(yè)有限公司提供ATCC原代細(xì)胞，ATCC菌株代購(gòu)，同時(shí)上海琛藝新增細(xì)胞庫(kù)，具有自己的研發(fā)細(xì)胞培養(yǎng)庫(kù)，上千株細(xì)胞具有STR鑒定，開(kāi)春大放送，*，同時(shí)還有好禮相送，具體歡迎咨詢我們銷售人員。。。。

NCI-N87[N87]-LUC人胃癌熒光素酶標(biāo)記細(xì)胞 培養(yǎng)步驟 含STR鑒定

【細(xì)胞傳代】：1:3 傳代

【細(xì)胞活力】：90％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

【細(xì)胞檢測(cè)】：細(xì)胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌

【細(xì)胞凍存】：液氮凍存（基礎(chǔ)培養(yǎng)基+10%DMSO+20%FBS）

【細(xì)胞運(yùn)輸】：干冰運(yùn)輸（1 Vial）或活細(xì)胞運(yùn)輸（T-25 flasks）

詳細(xì)背景： 這株細(xì)胞的細(xì)胞骨架染色突出呈現(xiàn)肌動(dòng)蛋白，在細(xì)胞質(zhì)中有豐富的平行微絲。有報(bào)道稱在1uM血管緊張素II存在下，它們會(huì)收縮。細(xì)胞在軟瓊脂中形成克隆，SV40大T抗原陽(yáng)性。

細(xì)胞來(lái)源： 細(xì)胞主要來(lái)源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)內(nèi)外著名大學(xué)建系

"購(gòu)買細(xì)胞注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，OSKMZ-1小鼠誘導(dǎo)型多能干細(xì)胞| OSKMZ-1動(dòng)物

顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落，將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)過(guò)夜，隔天再取出觀察。此時(shí)多數(shù)細(xì)胞均會(huì)貼壁，若細(xì)胞仍不能貼壁請(qǐng)用臺(tái)盼藍(lán)染色測(cè)定細(xì)胞活力，如果證實(shí)細(xì)胞活力正常，請(qǐng)將細(xì)胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無(wú)活力，請(qǐng)拍下照片及時(shí)和我們聯(lián)系，信息確認(rèn)后我們?yōu)槟倜赓M(fèi)寄送一次。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和公司技術(shù)部溝通交流。

規(guī)格： 復(fù)蘇T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存1ml凍存管（兩支）

細(xì)胞規(guī)格： 1*10(5)/ml——1*10（6）/ml

?細(xì)胞名稱：  NCI-N87[N87]-LUC人胃癌熒光素酶標(biāo)記細(xì)胞 培養(yǎng)步驟 含STR鑒定

?組織  小鼠乳腺癌細(xì)胞系

?母細(xì)胞來(lái)源  客戶

?轉(zhuǎn)染方法與標(biāo)記過(guò)程的描述 慢病毒轉(zhuǎn)染Hygromycin篩選 

1.質(zhì)粒部分

1.酶切載體：pGL4.10（luc2）由酶切獲得1400bp的luc2基因片斷；EGFP和mCherry片段由PCR擴(kuò)增獲得700-800bp左右片段；pSin-hyg-T2A載體酶切線性化。

2.電泳和膠回收：上述酶切產(chǎn)物DNA電泳，TAKARA試劑盒膠回收，回收產(chǎn)物取少量電泳鑒定。

3.連接載體與目的片段:使用Invitrogen T4連接酶連接luc2、EGFP或mCherry片段和pSin-hyg-T2A線性化載體，連接使用20ul體系，25℃，10min。

4.轉(zhuǎn)化：感受態(tài)菌One Shot Stbl3在冰上融化后，加入連接產(chǎn)物，靜置25min后在水浴42℃，45sec熱休克，后加入250ul無(wú)抗培養(yǎng)基225轉(zhuǎn)搖菌1h，將轉(zhuǎn)化的菌鋪于有氨芐抗性平板37度過(guò)夜。

5.挑取單克?。河^察平板后挑取15個(gè)單克隆至含2ml氨芐抗性 LB培養(yǎng)基搖菌管中，255轉(zhuǎn)搖菌6.5h。

6.小抽質(zhì)粒與鑒定：使用堿裂解法小抽，質(zhì)粒用25ul含RNA酶ddH2O溶解；酶切鑒定: 重組質(zhì)粒用通過(guò)酶切鑒定。

7.熒光素表達(dá)鑒定: 重組質(zhì)粒pSin-hyg-GFP/luc2（以下簡(jiǎn)稱Gluc）或pSin-hyg-mCherry/luc2（以下簡(jiǎn)稱Mluc） 轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞：DNA定量后，使用PEI轉(zhuǎn)染Gluc或Mluc至24孔板已預(yù)鋪的293T細(xì)胞中。轉(zhuǎn)染采用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染，試劑采用JetPEI (Polyplus公司)。兩管EP管中分別加入50ul生理鹽水，其中一管加入1ug量的質(zhì)粒（DNA體積=1ug/DNA濃度），輕輕震蕩混勻，再輕微離心；在另一管中加入PEI 2ul輕輕震蕩混勻，輕微離心，然后把PEI管中的溶液加入含有的質(zhì)粒管中，室溫孵育20min。將脂質(zhì)體包繞DNA的混合液加入需要轉(zhuǎn)染的24孔內(nèi)，37 ℃、5 % CO2條件下培養(yǎng)，8小時(shí)后換培養(yǎng)液。

8.報(bào)告基因檢測(cè)：Passive Lysis Agent裂解細(xì)胞，加入熒光素酶作用底物，將轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的細(xì)胞與陰性，陽(yáng)性對(duì)照共同進(jìn)行單報(bào)告基因檢測(cè)。

9.質(zhì)粒中抽：取1ml轉(zhuǎn)染報(bào)告基因檢測(cè)正確的菌液加入100ml氨芐抗性的LB培養(yǎng)基中搖菌過(guò)夜，使用Invitrogen試劑盒中抽，產(chǎn)物電泳鑒定，－20℃保存。

1.慢病毒包裝部分

1. 質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前一天，293T在10cm培養(yǎng)盤(pán)中的細(xì)胞達(dá)到90％，胰酶消化后，1：3傳入新10cm培養(yǎng)盤(pán)中。轉(zhuǎn)染時(shí)，細(xì)胞在培養(yǎng)盤(pán)中密度達(dá)到80％。采用脂質(zhì)體PEI轉(zhuǎn)染法使編碼慢病毒包膜蛋白的質(zhì)粒VSV G, Packaging Mix以及構(gòu)建的Gluc或Mluc質(zhì)粒15µg共轉(zhuǎn)染。6h后換新鮮DMEM培養(yǎng)基。

2．提取病毒上清：轉(zhuǎn)染48-72hours后，將含有病毒液的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到15ml離心管中,在低溫4攝氏度條件下，3000rpm，離心10min去除片狀沉淀的細(xì)胞碎片。

3．濃縮病毒：將病毒上清用0.45um濾器過(guò)濾至濃縮離心管中，2000rpm，4℃，15min離心。濃縮液收集于500µl離心管中，-80℃保存。

1.慢病毒感染&篩選

1.感染前一天(Day1)，消化4T1細(xì)胞并計(jì)數(shù)，將細(xì)胞鋪于24孔板中（以便在感染前細(xì)胞達(dá)到30%-50%的匯合度，37°C過(guò)夜孵化細(xì)胞。

2.(Day2) 解凍低溫保存的慢病毒液，并且制備1：2病毒稀釋液200µl加入細(xì)胞中。

3.向每孔加入Polybrene達(dá)到終濃度6ug/ml，晃勻孔板，37度孵化過(guò)夜。

4.(Day3)移去含有慢病毒的培養(yǎng)基，加入500µl*培養(yǎng)基。

5.(Day4)換液，加入300µg/ml  Hygromycin（Sigma）來(lái)選擇穩(wěn)定感染的細(xì)胞克隆。

6.(Day4－7），每24h換液，300µg/ml Hygromycin（Sigma）來(lái)選擇穩(wěn)定感染的細(xì)胞克隆。

維持培養(yǎng)。

7.(Day8－12）細(xì)胞逐漸由24孔板傳入6孔板、6cm盤(pán)和10cm盤(pán)中100µg/ml Hygromycin維持培養(yǎng)。

8. 4T1-Gluc/Mluc細(xì)胞系鑒定: 取5×104細(xì)胞，用Passive Lysis裂解液裂解，加入熒光素酶作用底物，將轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的細(xì)胞與陰性，陽(yáng)性對(duì)照共同進(jìn)行單報(bào)告基因檢測(cè)。GFP和mCherry表達(dá)通過(guò)熒光顯微鏡觀察。

?培養(yǎng)條件 ：置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中，用含10％胎牛血清（FBS;    Hyclone, Tauranga, New Zealand）和1％雙抗（100 U/ ml青霉素和100 μg/ ml鏈霉素，Hyclone, Logan, UT, USA）的高糖DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)一天（密度大概80%）按照1：3的比例傳代。

?細(xì)胞傳代所需時(shí)間：1天/代 

?篩選標(biāo)記維持壓力和選擇壓力：Hygromycin 100ug/ml 和300ug/ml 。

"NCI-H460 [H460] Cell<人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞系>

細(xì)胞形態(tài)特性：詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)

778571-57-6

細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁

冷凍細(xì)胞解凍程序：依據(jù)細(xì)胞株數(shù)據(jù)單之基礎(chǔ)培養(yǎng)基種類、血清種類和其它之成份和比例，制備培養(yǎng)基。絕大多數(shù)之細(xì)胞均無(wú)法立即適應(yīng)不同之基礎(chǔ)培養(yǎng)基或不同之血清種類，若因?qū)嶒?yàn)需要，必須有所不同時(shí)，務(wù)必以緩慢比例漸次改變培養(yǎng)基組成，確定細(xì)胞適應(yīng)后，方進(jìn)行所需之實(shí)驗(yàn)。FBS(fetal bovine serum,胚牛血清), CS(calf serum,小牛血清)和HS(horse serum,馬血清)，對(duì)細(xì)胞而言差異極大，請(qǐng)務(wù)必依據(jù)細(xì)胞株資料單之血清種類培養(yǎng)之。將培養(yǎng)基置于３７°C水槽中回溫，回溫后噴以７０%酒精并擦拭之，移入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。取出冷凍管，立即放入３７°C水槽中快速解凍，水面高度不可接近或高過(guò)冷凍管之蓋沿，否則易發(fā)生污染。輕搖冷凍管使其在１分鐘內(nèi)全部融化后，以７０%ethanol擦拭冷凍管外部，移入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。依據(jù)細(xì)胞種類和濃度，于無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)?。保癿l培養(yǎng)基加至T２５或T７５flask中。取出已解凍之細(xì)胞懸浮液，緩緩加入T２５或T７５flask內(nèi)之培養(yǎng)基，混合均勻，放入３７°C，５%CO２培養(yǎng)箱培養(yǎng)。對(duì)絕大多數(shù)細(xì)胞而言，１%以下之冷凍保護(hù)劑DMSO，不會(huì)對(duì)細(xì)胞之貼附或活化有不良影響，不需立刻由解凍細(xì)胞中去除，待第二天確定細(xì)胞生長(zhǎng)或貼附良好后再去除即可。惟對(duì)極少數(shù)因?qū)MSO敏感或會(huì)造成細(xì)胞分化之細(xì)胞，需立即去除DMSO者，則可將解凍后之細(xì)胞懸浮液放入５-１０ml培養(yǎng)基中，離心３００xg(約１０００rpm)，５分鐘，小心移去上清液，加入適量新鮮培養(yǎng)基，將細(xì)胞均勻混合后，轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中，再放入３７°C，５%CO２培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

NCI-H460 [H460] Cell<人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞系>

細(xì)胞產(chǎn)品包裝：復(fù)蘇形式：T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：1ml凍存管(兩支)

MDA-MB-175細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2—1：6傳代，每周換液2—3次；細(xì)胞形態(tài)特性：上皮細(xì)胞樣；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：松散貼壁；細(xì)胞背景資料：該細(xì)胞源自一位54歲患有乳腺導(dǎo)管癌白人女性的胸腔積液。

HCT116[HCT116]細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁或懸浮，詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)部分；細(xì)胞背景資料：詳見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)介紹

COV434細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2傳代；細(xì)胞形態(tài)特性：上皮細(xì)胞；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)；細(xì)胞背景資料：詳見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)介紹

MDA-MB-435-LUC 人乳腺癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記

MDA-MB-435-GFP 人乳腺癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞-綠色標(biāo)記

MDA-MB-468-LUC 人乳腺癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記

MDA-MB-468-GFP 人乳腺癌細(xì)胞-綠色標(biāo)記

MFC-LUC 小鼠胃癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記

MFC-GFP 小鼠胃癌細(xì)胞-綠色標(biāo)記

MG-63-LUC 人成骨肉瘤細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記

MG-63-GFP 人成骨肉瘤細(xì)胞-綠色標(biāo)記

MGC-803-LUC 人胃腺癌-熒光素酶標(biāo)記

MGC-803-GFP 人胃腺癌-綠色標(biāo)記

MGC-823-LUC 人低分化前胃癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記

MGC-823-GFP 人低分化前胃癌細(xì)胞-綠色標(biāo)記

MKN-28-LUC 人胃癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記

MKN-28-GFP 人胃癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞-綠色標(biāo)記

MKN45-LUC 人胃癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記

MKN45-GFP 人胃癌細(xì)胞-綠色標(biāo)記

MRC-5-LUC 人胚肺成纖維細(xì)胞

MRC-5-GFP 人胚肺成纖維細(xì)胞

MV3-LUC 人黑色素瘤細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記

MV3-GFP 人黑色素瘤細(xì)胞-綠色標(biāo)記

NCI-H1650-LUC 人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記

NCI-H1650-GFP 人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞-綠色標(biāo)記

NCI-H1975-LUC 人肺腺癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記

NCI-H1975-GFP 人肺腺癌細(xì)胞-綠色標(biāo)記

NCI-H446-LUC 人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記

NCI-H446-GFP 人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞-綠色標(biāo)記

NCI-H460-LUC 人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記

NCI-H460-GFP 人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞-綠色標(biāo)記

NCI-N87[N87]-LUC 人胃癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記

NCI-N87[N87]-GFP 人胃癌細(xì)胞-綠色標(biāo)記

NUTU-19-LUC 大鼠卵巢癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記

NUTU-19-GFP 大鼠卵巢癌細(xì)胞-綠色標(biāo)記

OVCaR-3-LUC 人卵巢癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記

OVCaR-3-GFP 人卵巢癌細(xì)胞-綠色標(biāo)記

PANC-1-LUC 人胰腺癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記

PANC-1-GFP 人胰腺癌細(xì)胞-綠色標(biāo)記

PC12-LUC 大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記

PC12-GFP 大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞-綠色標(biāo)記

PC-3-LUC 人前列腺癌-熒光素酶標(biāo)記

PC-3-GFP 人前列腺癌-綠色標(biāo)記

Raji-LUC 人Burkitt`s淋巴瘤細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記

Raji-GFP 人Burkitt`s淋巴瘤細(xì)胞-綠色標(biāo)記

RKO-LUC 人結(jié)腸癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記

RKO-GFP 人結(jié)腸癌細(xì)胞-綠色標(biāo)記

RL95-2-LUC 人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記

RL95-2-GFP 人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞-綠色標(biāo)記

S-180-LUC 小鼠肛門肉瘤細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記

S-180-GFP 小鼠肛門肉瘤細(xì)胞-綠色標(biāo)記

Saos-2-LUC 人成骨肉瘤細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記

Saos-2-GFP 人成骨肉瘤細(xì)胞-綠色標(biāo)記

SGC-7901-LUC 人胃癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記

SGC-7901-GFP 人胃癌細(xì)胞-綠色標(biāo)記

SHG-44-LUC 人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記

SHG-44-GFP 人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞-綠色標(biāo)記

SK-BR-3-LUC 人乳腺癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記

SK-BR-3-GFP 人乳腺癌細(xì)胞-綠色標(biāo)記

SK-HEP-1-LUC 人肝癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記

SK-HEP-1-GFP 人肝癌細(xì)胞-綠色標(biāo)記

SK-OV-3-LUC 人卵巢癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記

SK-OV-3-GFP 人卵巢癌細(xì)胞-綠色標(biāo)記

SMMC-7721-LUC 人肝癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記

SMMC-7721-GFP 人肝癌細(xì)胞-綠色標(biāo)記

SRA01/04-LUC 人晶體上皮細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記

SRA01/04-GFP 人晶體上皮細(xì)胞-綠色標(biāo)記

SW116-LUC 人大腸癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記

SW116-GFP 人大腸癌細(xì)胞-綠色標(biāo)記

SW1990-LUC 人胰腺腺癌-熒光素酶標(biāo)記

SW1990-GFP 人胰腺腺癌-綠色標(biāo)記

SW480-LUC 人結(jié)腸癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記

SW480-GFP 人結(jié)腸癌細(xì)胞-綠色標(biāo)記

SW620-LUC 人結(jié)腸癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記

SW620-GFP 人結(jié)腸癌細(xì)胞-綠色標(biāo)記

T24-LUC 人膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記

T24-GFP 人膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞-綠色標(biāo)記

T47D-LUC 人乳腺癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記

T47D-GFP 人乳腺癌細(xì)胞-綠色標(biāo)記

Tca-8113-LUC 人舌癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記

Tca-8113-GFP 人舌癌細(xì)胞-綠色標(biāo)記

TE-10-LUC 人食管癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記

TE-10-GFP 人食管癌細(xì)胞-綠色標(biāo)記

TE-11-LUC 人食管癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記

TE-11-GFP 人食管癌細(xì)胞-綠色標(biāo)記

TE-13-LUC 人食管癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記

TE-13-GFP 人食管癌細(xì)胞-綠色標(biāo)記

U-2OS-LUC 人骨肉瘤細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記

U-2OS-GFP 人骨肉瘤細(xì)胞-綠色標(biāo)記

U251-LUC 人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記

U251-GFP 人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞-綠色標(biāo)記

U87MG-LUC 人惡性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞

U87MG-GFP 人惡性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞

U937-LUC 人白血病細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記

U937-GFP 人白血病細(xì)胞-綠色標(biāo)記

Vero-LUC 綠猴腎細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記

Vero-GFP 綠猴腎細(xì)胞-綠色標(biāo)記