U-2OS-GFP人骨肉瘤綠色標記細胞  培養(yǎng)步驟 含STR鑒定

產(chǎn)品名稱：U-2OS細胞

中文名稱：人骨肉瘤細胞；U-2OS

規(guī)格：T25

形態(tài)特征：上皮樣

生長狀態(tài)：貼壁生長

特征特性：該細胞系(原名2T)是由PontenJ和SakselaE在1964年從一名15歲女孩的脛骨中等分化的肉瘤中分離建立的。與WI-38共培養(yǎng)或用抗猴空泡病毒SV40、呼吸道合胞病毒RSV或腺病毒的補體結(jié)合試驗（CF法）未檢測到病毒。該細胞表達胰島素樣生長因子Ⅰ、Ⅱ（IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ）受體和骨肉瘤衍生生長因子（ODGF）。

培養(yǎng)條件：DMEM(高糖）+10%FBS（推薦BI04-001-1A）

傳代方法：1:3~1:6傳代；每周2~3次。

支原體檢測：陰性

使用權(quán)限：A類

參考文獻：Amelogenin：X；CSF1PO：13；D13S317：13；D16S539：11，12；D18S51：10.2，12，14；D19S433：15；D21S11：31；D2S1338：20，24；D3S1358：16，18.3；D5S818：11；D7S820：11，12；D8S1179：12，14；FGA：20；TH01：6，9.3；TPOX：11，12；vWA：14，18；

U-2OS-GFP人骨肉瘤綠色標記細胞  培養(yǎng)步驟 含STR鑒定

形態(tài)特性 上皮細胞樣　 
生長特性 貼壁生長 

凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS　 
細胞周期分為細胞間期和細胞分裂期，細胞間期較長，而細胞分裂期較短。
細胞間期是為細胞分裂的準備時期，表現(xiàn)為細胞增大，營養(yǎng)物質(zhì)增多。細胞分裂期則是一個細胞由兩個細胞分解為一個細胞的過程。
細胞是生命的基本單位，細胞的特殊性決定了個體的特殊性，因此，對細胞的深入研究是揭開生命奧秘、改造生命和征服疾病的關(guān)鍵。細胞生物學(xué)已經(jīng)成為當代生物科學(xué)中發(fā)展zui快的一門學(xué)科，是生物、農(nóng)學(xué)、醫(yī)學(xué)、畜牧、水產(chǎn)和許多生物相關(guān)專業(yè)的一門必修課程。
依據(jù)細胞種類和濃度，于無菌操作臺內(nèi)取 10 ml培養(yǎng)基加至 T25或 T75 flask中。取出已解凍之細胞懸浮液，緩緩加入T25 或T75 flask 內(nèi)之培養(yǎng)基， 混 合均勻，放入37 °C，5 % CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
 
培養(yǎng)步驟：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL*培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
 
1、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的*培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細胞，*脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內(nèi)，嚴格無菌操作；將小管細胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右*培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）。
2、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
 
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，進行離心收集，1000RPM條件下離心8-10分鐘，去除上清，按凍存數(shù)量加入血清及DMSO，凍存比例為90%FBS+10%DMSO。
 
PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內(nèi)，嚴格無菌操作；將小管細胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右*培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）。
 
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