U937-GFP人白血病綠色標(biāo)記細(xì)胞 培養(yǎng)步驟 含STR鑒定

產(chǎn)品名：U937-Luciferase-GFP

物種：人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞

保存體系：-80°C短期保存，液氮長期保存

培養(yǎng)條件：1640+10%FBS

生長類型：懸浮生長

運(yùn)輸方式：新鮮細(xì)胞常溫運(yùn)輸，凍存細(xì)胞干冰運(yùn)輸

復(fù)蘇流程：細(xì)胞復(fù)蘇：

1.帶上防護(hù)面罩及防凍手套，從液氮罐中取出細(xì)胞，并迅速放入37°C水浴鍋中解凍。

2.細(xì)胞解凍后，通過傳遞倉將細(xì)胞傳遞至細(xì)胞房內(nèi)。

3.在生物安全柜內(nèi)，取出一只15mL無菌離心管，使用1mL移液器向15mL離心管內(nèi)加入4mL 培養(yǎng)基。

4.使用75%的醫(yī)用消毒酒精棉球仔細(xì)擦拭上述在37°C水浴鍋中解凍的細(xì)胞凍存管外表面，進(jìn)行表面消毒。在生物安全柜內(nèi)，擰開細(xì)胞凍存管，然后用1mL移液器將管內(nèi)的細(xì)胞懸液吸出，逐滴加入至上述準(zhǔn)備的含有4mL培養(yǎng)基的15mL離心管中，將15mL離心管蓋子旋緊，緩慢上下顛倒4次，使細(xì)胞懸液混勻。

5.將含有細(xì)胞懸液的離心管置于離心機(jī)中，設(shè)置離心參數(shù)如下：200xg、室溫（~25°C）離心5分鐘。

6.離心結(jié)束后，將離心管輕輕轉(zhuǎn)移至生物安全柜中，此時(shí)細(xì)胞離心管底部可見白色細(xì)胞團(tuán)。使用電動(dòng)吸引器將培養(yǎng)基上清吸掉（細(xì)胞團(tuán)比較松散，注意不要觸及底部的細(xì)胞團(tuán)）。

7.使用1mL移液器加入2mL*培養(yǎng)基，輕輕吹打5次重懸細(xì)胞團(tuán)，計(jì)數(shù)，接種。

8.將細(xì)胞放置培養(yǎng)箱中過夜培養(yǎng)。

圖示說明：左圖為NSG小鼠尾靜脈輸注靶細(xì)胞后第三天活體成像效果，右圖為第十一天活體成像效果。

圖示說明：流式檢測(cè)本品綠色熒光蛋白表達(dá)情況。

U937-GFP人白血病綠色標(biāo)記細(xì)胞 培養(yǎng)步驟 含STR鑒定

   您需要準(zhǔn)備好細(xì)胞所要用到的培養(yǎng)基和相關(guān)試劑，雖然所有的貼壁，半貼壁或者懸浮細(xì)胞處理方式差不多，但是不同的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)條件和處理力度還有試劑的批間差這些問題存在，也會(huì)導(dǎo)致對(duì)細(xì)胞處理不當(dāng)，或者環(huán)境的不適應(yīng)而造成細(xì)胞的死亡。

       1.收到細(xì)胞，di一時(shí)間要鏡檢：觀察細(xì)胞形態(tài)是否正常，對(duì)于貼壁細(xì)胞則要注意看貼壁情況是否很好，觀察細(xì)胞密度，有疑議及時(shí)咨提供細(xì)胞的技術(shù)人員。由于運(yùn)輸?shù)臅r(shí)間或者溫度的變化，很多貼壁細(xì)胞在盛滿培養(yǎng)基的瓶子里生長的狀態(tài)和平時(shí)會(huì)有點(diǎn)不一樣，主要是貼壁牢固問題。比如293T，平時(shí)貼壁就不是很牢，在裝滿的培養(yǎng)基瓶子里面，會(huì)發(fā)生大片的脫落，細(xì)胞聚集在一起，但是細(xì)胞生長還是正常的，通過離心收集，加以胰酶的消化，重新打散，又可以正常的貼壁生長。

       2.當(dāng)通過上一步的觀察，細(xì)胞初步?jīng)]有任何問題時(shí)，進(jìn)行下一步操作。當(dāng)收到的細(xì)胞密達(dá)到80%左右時(shí)，則處理如下：棄除瓶中大部分培養(yǎng)基，僅保留5到10mL培養(yǎng)所需的常規(guī)培養(yǎng)基；或更換新鮮的培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中，隨后每天觀察。細(xì)胞在低于正常生長溫度情況下，會(huì)調(diào)整為靜止期，或者慢速生長期，必須恢復(fù)37度的環(huán)境至少3個(gè)小時(shí)左右，才能重新調(diào)整到接近對(duì)數(shù)生長期的狀態(tài)，在對(duì)數(shù)生長期進(jìn)行細(xì)胞的傳代會(huì)大大增加傳代的成功率，和細(xì)胞的存活率。

       3.如果經(jīng)di一步觀察發(fā)現(xiàn)細(xì)胞密度超過90%，并且細(xì)胞狀態(tài)很好時(shí)，則復(fù)溫后2個(gè)小時(shí)需要立即傳代。傳代的比例應(yīng)依據(jù)不同的細(xì)胞而定。對(duì)于生長比較快，狀態(tài)穩(wěn)定，不易受外界影響的細(xì)胞可以一次多傳幾瓶；對(duì)于生長較慢，細(xì)胞比較薄，狀態(tài)容易波動(dòng)的細(xì)胞類型，一次少傳些，保證每瓶細(xì)胞密度大些，便于穩(wěn)定生長。至于一些比較陌生的細(xì)胞，di一次處理也可以依照第二種情況。
HBS和 EBS 的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在Eagles (2.2 g/L)中比在Hanks (0.35 g/L) 中高。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡，以維持溶液的PH值。Eagles液在空氣水平的CO2 中，溶液會(huì)變堿，Hanks液在CO2培養(yǎng)箱中會(huì)變酸。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存組織，需要用Eagles液，。如果僅僅是清洗將要在細(xì)胞培養(yǎng)基中儲(chǔ)存的組織，用Hanks液就可以了。