細(xì)胞用途 僅供科研使用：Huh-7/Sorafenib人肝癌索拉非尼耐藥株|Huh-7細(xì)胞

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞背景 生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

微生物及支原體檢測(cè)：陰性

培養(yǎng) *培養(yǎng)基：90%RPMI-1640+10%胎牛血清+1ug/ml DDP

血清我們推薦用:

GIBCOFBS-10099-141或HYCLONEFBS-SH30084.03。

培養(yǎng)條件：37.0C  carbon dioxide(CO2),5%

細(xì)胞特性

1）來源：人

2）形態(tài)：貼壁生長(zhǎng)

3）含量：>1x106 個(gè)/mL

4）污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

5）規(guī)格：T25瓶

Huh-7/Sorafenib人肝癌索拉非尼耐藥株|Huh-7細(xì)胞

細(xì)胞培養(yǎng)步驟 收到細(xì)胞后，在倒置鏡下(好是在4X物鏡)觀察整個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況。

（一）如果細(xì)胞未長(zhǎng)滿，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液，換 10ml新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng)。

(二)如果細(xì)胞已長(zhǎng)滿，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：

1. 棄去培養(yǎng)液，用PBS（不含鈣,鎂離子）洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，倒放于37℃培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱，之后翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶10-30秒，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量*培養(yǎng)基終止消化。 

3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加*培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)瓶中。如果沒有特別說明，收到細(xì)胞后的一次傳代一般是一傳二。

注：1、觀察細(xì)胞好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進(jìn)行，否則不能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度?？醇?xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?0X或20X物鏡下。

2、瓶中運(yùn)輸培養(yǎng)基不能重復(fù)再用,請(qǐng)換用加雙抗的新培養(yǎng)基，細(xì)胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素。

3、有些細(xì)胞貼壁不牢，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落，可離心吹打后接種到新瓶?jī)?nèi)。

4、收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)及時(shí)與我們聯(lián)系。..

保存 凍存條件：90%*培養(yǎng)液+10%DMSO 

保存條件：液氮存儲(chǔ)

常見問題及解決方案 1.培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細(xì)胞極大可能會(huì)污染，所以我們會(huì)及時(shí)安排幫老師解決。

2.收到細(xì)胞后盡快更換為含 10%血清的新鮮培養(yǎng)基，如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基，請(qǐng)?jiān)谠颗囵B(yǎng)基中額外添加 10%的血清（原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時(shí)間長(zhǎng)不宜超過 72 小時(shí)）

3.細(xì)胞漂浮：培養(yǎng)瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。1-2小時(shí)后觀察，如細(xì)胞大部分又貼回瓶底，表明細(xì)胞活力正常，剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉，留8-10ml培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細(xì)胞生長(zhǎng)至匯合度80%，進(jìn)行消化傳代；如細(xì)胞還是不貼壁，將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會(huì)一直跟蹤指導(dǎo)，直到問題解決。