上海琛藝實業(yè)有限公司經(jīng)過數(shù)年的努力發(fā)展已迅速成為集產(chǎn)品研發(fā)、生產(chǎn)、經(jīng)營為一體的專業(yè)化生物工程公司。公司新引進(jìn)細(xì)胞上千株,其中人的已通過STR鑒定的有幾百株,歡迎各位選購。。。。。。
產(chǎn)品名稱:BRL 3A細(xì)胞|BRL 3A大鼠肝細(xì)胞
特點:細(xì)胞代數(shù)為4代以內(nèi),細(xì)胞耐藥倍數(shù)8倍以上;
包裝:內(nèi)層無菌自封袋;專用防壓泡沫盒;外層防壓保溫氣泡袋;說明書
細(xì)胞來源:ATCC、sciencell、ICLC
貨期:1-2周
運輸方式:快遞運輸
售后:收到細(xì)胞后12天,如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有質(zhì)量問題(如污染,死亡,快遞運輸?shù)仍颍r,應(yīng)出具書面質(zhì)量問題報告并及時通知銷售人員,我們將盡快為您解決!
注:耐藥細(xì)胞培養(yǎng)操作流程和普通細(xì)胞培養(yǎng)方法基本一致,只是在培養(yǎng)中會加藥維持篩選壓力
· BRL 3A細(xì)胞|BRL 3A大鼠肝細(xì)胞
· 三、細(xì)胞生長條件:
一、組成:
組份 | 數(shù)目 |
細(xì)胞 | 1 T-25瓶 |
細(xì)胞說明書 | 一份 |
二、細(xì)胞簡介:
生長特性: | 貼壁生長
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細(xì)胞來源: | 從ATCC/中科院/協(xié)和醫(yī)院等地引進(jìn) |
培養(yǎng)條件: | 培養(yǎng)基:90%1640培養(yǎng)基 +10%FBS(推薦BI -04-001-1ACS胎牛血清) 氣相:空氣95%,二氧化碳5% 溫度:37℃ |
培養(yǎng): | 一、貼壁細(xì)胞 1.用75%酒精噴灑整個瓶消毒,將其平躺置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行2-3小時的緩沖,.然后置于無菌操作臺,打開瓶口,將其中的培養(yǎng)液去掉,再往其中加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基并置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),根據(jù)細(xì)胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對其進(jìn)行換液以及傳代; 2.待細(xì)胞長滿瓶底面積80%-90%,需要對其進(jìn)行傳代,第yi次傳代比例為1:2。 3傳代步驟:將0.25%含EDTA胰酶置于37°預(yù)熱,倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,往培養(yǎng)瓶中加入1mlPBS,輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1ml預(yù)熱好的胰酶,置于37°孵育消化(第yi次消化需時常取出置于顯微鏡下觀察,以顯微鏡下細(xì)胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細(xì)胞脫落為zui佳消化時間,記錄消化時間,以便于下次消化),消化好后加入1ml*培養(yǎng)基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞,使之*脫落,然后收集細(xì)胞懸液,1200rpm離心3min,棄上清,加入*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,進(jìn)行傳代。
二、懸浮細(xì)胞 1.用75%酒精噴灑整個瓶消毒,然后置于無菌操作臺,打開瓶口,輕輕吹打后,將其中的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管中,然后1200rpm離心3min,去上清; 2.將離心好的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T-25瓶中,并加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基,然后將其置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),根據(jù)細(xì)胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對其進(jìn)行換液(離心后去舊液,加入新鮮培養(yǎng)基); 3.顯微鏡觀察細(xì)胞數(shù)目比較多時,對其進(jìn)行傳代,第yi次傳代比例為1:2(離心后平均分成兩瓶培養(yǎng))。
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細(xì)胞總數(shù): | 1~3*106 |
傳代周期: | 2-3天 |
傳代比例: | 1:2~1:4 |
換液頻率: | 2-3天 |
凍存液: | 90%FBS+10%DMSO |
四、注意事項:
1 收到細(xì)胞后首先觀察T-25瓶是否有損壞、漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。
2 瓶中運輸?shù)呐囵B(yǎng)液不能重復(fù)使用,請換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)
3 對于貼壁細(xì)胞,若大部分細(xì)胞漂浮,置于培養(yǎng)箱隔夜觀察,大部分漂浮細(xì)胞重新貼壁,表明細(xì)胞活力正常,繼續(xù)培養(yǎng),剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉;若大部分細(xì)胞仍然不貼壁,將漂浮的細(xì)胞離心收集,用臺盼藍(lán)染色鑒定細(xì)胞活力,并與本公司銷售人員及時聯(lián)系。
4 建議客戶收到細(xì)胞后不同倍鏡各拍幾張細(xì)胞的照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),如細(xì)胞狀態(tài)出現(xiàn)問題請于72h內(nèi)與本公司銷售聯(lián)系,以便于更好的幫您解決問題,超過時間我段,本公司則默認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)良好,不免費對后續(xù)細(xì)胞狀態(tài)問題進(jìn)行售后。
做細(xì)胞實驗的同學(xué)看過來。
選擇上海琛藝生物細(xì)胞有3個理由:
1、細(xì)胞狀態(tài)好,形態(tài)佳,易成活,是市面上比較好養(yǎng)的細(xì)胞之一;
2、物流迅速,復(fù)蘇好后發(fā)貨,次日就能到;
3、使用我司推薦的進(jìn)口品牌血清進(jìn)行培養(yǎng)實驗,效果更佳。
專業(yè)技術(shù)人員萬工收藏的細(xì)胞培養(yǎng)小技巧:
1. 買細(xì)胞要去靠譜的地方買,比如 ATCC 或者上海琛藝。一般上面會有針對細(xì)胞的介紹,這樣培養(yǎng)之前可以了解細(xì)胞正常生長的狀態(tài)圖、傳代、培養(yǎng)基的類型等。
2. 不管是買的細(xì)胞,還是別人惠贈的細(xì)胞,剛拿到手趕緊的做兩件事:檢測是否有支原體污染;迅速擴(kuò)增凍存,凍存細(xì)胞復(fù)蘇后第二天更換一次培養(yǎng)基。
3. 發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有污染迅速處理掉,特別是當(dāng)你養(yǎng)了很多種細(xì)胞時。細(xì)菌污染、真菌污染很容易發(fā)現(xiàn),支原體污染的話,細(xì)胞會長的慢,可以買個支原體檢測的試劑盒定期檢測一下。
4. 不同細(xì)胞生長周期不同。有的生長很快,比如說 MDA-MB-231,傳代的時候取離心懸液的十分之一就已經(jīng)足夠了。有的又是特別慢,比如 BT474,傳代是一分二,復(fù)蘇起始的時候兩周多才能長滿。這就需要要在培養(yǎng)細(xì)胞的過程中多多摸索。
5. 對于嬌弱的細(xì)胞,就得細(xì)心呵護(hù)。胰酶消化不能過久,吹得時候要輕柔,離心時候也要注意轉(zhuǎn)速和時間。每天都要去看一下細(xì)胞,肉眼觀察培養(yǎng)基狀況、顯微鏡下觀察細(xì)胞生長狀況。記住,是每天。
細(xì)胞培養(yǎng)常見問題及解決方法
問題 | 原因 | 解決方案 |
細(xì)胞生長緩慢 | 生長培養(yǎng)基使用不當(dāng) | 按照生產(chǎn)商的建議,使用相應(yīng)的預(yù)熱生長培養(yǎng)基。 |
生長培養(yǎng)基中血清質(zhì)量差 | 使用其他批次血清。 | |
傳代操作不當(dāng) | 按照生產(chǎn)商的建議消化時間及傳代比例進(jìn)行操作。 | |
換液過于頻繁 | 降低換液頻率,參考生產(chǎn)商推薦的換液頻率。 | |
細(xì)胞傳代次數(shù)過多 | 使用傳代次數(shù)較少的健康細(xì)胞。 | |
細(xì)胞生長超過匯合狀態(tài) | 哺乳動物細(xì)胞傳代應(yīng)在細(xì)胞處于對數(shù)期、未達(dá)到匯合狀態(tài)時進(jìn)行,建議細(xì)胞密度達(dá) 80-90%傳代。 | |
細(xì)胞被支原體污染 | 將細(xì)胞、培養(yǎng)基和試劑丟棄;新取一只凍存細(xì)胞,并且使用新的培養(yǎng)基和試劑。 | |
細(xì)胞復(fù)蘇存活率低 | 細(xì)胞凍存不當(dāng) | 新取一只凍存細(xì)胞,并儲存在液氮中。將細(xì)胞儲存在液氮中,直至復(fù)蘇。 |
自行制備的凍存細(xì)胞無活性 | 將細(xì)胞按照生產(chǎn)商推薦的密度凍存。 | |
制備凍存細(xì)胞時使用傳代次數(shù)少的細(xì)胞。 | ||
嚴(yán)格按照生產(chǎn)商推薦的操作程序凍存細(xì)胞。請注意本手冊推薦的冷凍程序是凍存細(xì)胞的一般流程,只能作為指導(dǎo)原則使用。 | ||
新取一只凍存細(xì)胞。 | ||
細(xì)胞復(fù)蘇方法不當(dāng) | 嚴(yán)格按照生產(chǎn)商推薦的操作程序復(fù)蘇細(xì)胞。請注意本手冊推薦的解凍程序是復(fù)蘇細(xì)胞的一般流程,只能作為指導(dǎo)原則使用。 | |
確保冷凍細(xì)胞解凍迅速,接種前用預(yù)熱的生長培養(yǎng)基緩慢稀釋細(xì)胞。 | ||
復(fù)蘇培養(yǎng)基使用不當(dāng) | 使用生產(chǎn)商推薦的培養(yǎng)基。確保培養(yǎng)基使用前已經(jīng)預(yù)熱。 | |
細(xì)胞稀釋過度 | 按照生產(chǎn)商的建議,將解凍后的細(xì)胞高密度接種,以改善復(fù)蘇效果。 | |
處理細(xì)胞時動作不夠輕柔 | 凍存和復(fù)蘇過程對大多數(shù)細(xì)胞都會造成不利影 響。不要通過渦旋振蕩或者用力敲打培養(yǎng)瓶的方法使細(xì)胞脫落(培養(yǎng)昆蟲細(xì)胞時除外),也不要高速離心細(xì)胞。 | |
凍存液中所用保護(hù)劑在儲存過程中未避光 | 如果未避光儲存,凍存保護(hù)劑會轉(zhuǎn)變?yōu)閷?xì)胞有毒性的物質(zhì);新取一只凍存保護(hù)劑,重新凍存細(xì)胞。 |
★由于細(xì)胞庫現(xiàn)有細(xì)胞類目多,為了不出現(xiàn)混亂錯誤,需要了解相關(guān)細(xì)胞價格及詳細(xì)資料直接call,對您造成的不便還請見諒!
★注:如運輸過程中導(dǎo)致細(xì)胞污染或者死亡,我們將無條件補(bǔ)發(fā)
收貨后十個工作日內(nèi)有其他問題提供照片可半價重發(fā)
最后,通過低溫保藏儲備一些細(xì)胞,以防支原體大面積來襲。如果支原體有抬頭的跡象,或常規(guī)檢測呈陽性結(jié)果,那么的補(bǔ)救措施是扔掉所有培養(yǎng)物,清潔培養(yǎng)箱和超凈臺,一切從頭開始。當(dāng)然,你得確保儲備的細(xì)胞是不含支原體的。
上海琛藝實業(yè)耐藥細(xì)胞株提供STR鑒定,上百株細(xì)胞等待您的選購,可以聯(lián)系銷售陳靜。
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