名稱:SK-OV-3（人卵巢癌細(xì)胞）(通過STR鑒定)

別稱:SKOV-3 Skov3

種屬:人

年齡（性別）:女；64歲

組織來源:卵巢腺癌，腹水轉(zhuǎn)移

生長特性:貼壁細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣

背景描述:SK-OV-3細(xì)胞是由G·Trempe和L·J·Old于1973年從卵巢腫瘤病人的腹水分離得到。SK-OV-3細(xì)胞對腫瘤壞死因子和幾種細(xì)胞毒性藥物包括白喉毒素、順鉑和阿霉素均耐受。SK-OV-3細(xì)胞在裸鼠中致瘤，且形成與卵巢原位癌一致的中度分化的腺癌。

生長培養(yǎng)基 McCoy's 5A＋10% FBS(SERANA S-FBS-EU-015)＋1% P/S

推薦傳代比例:1:2-1:4

推薦換液頻率:2-3次/周

倍增時間:~20-48 hours

SK-OV-3（人卵巢癌細(xì)胞）(通過STR鑒定)凍存條件

凍存液：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%胎牛血清+10%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

致瘤性:;Yes, in nude mice; forms moderately well differentiated adenocarcinoma consistent with ovarian primary.

抗原表達(dá)情況:Blood Type B; Rh+

基因表達(dá)情況:Blood Type B; Rh+

保藏機構(gòu):ATCC; HTB-77 ECACC; 91091004

SK-OV-3（人卵巢癌細(xì)胞）(通過STR鑒定)相關(guān)產(chǎn)品延伸.......

※正常情況下，融化后血清的外觀顏色應(yīng)該是？

    血清為動物來源，成分復(fù)雜，不同批次間會存在一些外觀上的差別。一般情況下，它們的顏色可能是金黃色、紅色、琥珀棕色或者是介于三者之間。

※血清應(yīng)如何保存？

    未拆封的血清應(yīng)存放于-15至-20℃，避免反復(fù)凍融。拆封后的血清應(yīng)無菌分裝成一次的用量并存放于-15至-20℃，在產(chǎn)品質(zhì)量證書標(biāo)識的效期內(nèi)均可使用。2-8℃溶解后建議盡快使用。

※血清的有效期是多久？

    大部分胎牛血清效期是5年，針對每個批次，請通過質(zhì)檢文件確定具體效期日期。

※血清應(yīng)如何融解？

    從冰箱中取出血清，放于2-8℃融化，融化過程中不時旋轉(zhuǎn)（swirling mix）混勻。充分融解后分裝或平衡到室溫后使用

※為什么有時血清中出現(xiàn)絮狀沉淀？是否需要去除？如何去除？

    多種原因可能導(dǎo)致絮狀沉淀的形成，好常見的原因之一是融化過程中，脂蛋白聚集所致。該現(xiàn)象一般不會影響產(chǎn)品質(zhì)量。可以400g離心5分鐘，取上清，然后過濾。根據(jù)需要選擇合適的濾膜孔徑，一般好常用的是0.22um PES材質(zhì)的濾膜。為避免濾膜阻塞，建議離心后取上清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾而不是直接過濾血清。

※為什么存放于冰箱中的血清會出現(xiàn)沉淀？如何避免該現(xiàn)象？

    在2-8°C條件下存放，血清中的多種蛋白或脂蛋白會形成肉眼可見的沉淀，如血纖蛋白（fibrin），單體時處于溶解狀態(tài)，在凍融過程中會發(fā)生聚集，形成肉眼可見的沉淀。但該現(xiàn)象一般不會影響血清的性能?？梢?00g離心5分鐘，取上清，然后過濾。根據(jù)需要選擇合適的濾膜孔徑，一般好常用的是0.22um PES材質(zhì)的濾膜。為避免濾膜阻塞，建議離心后取上清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾而不是直接過濾血清。為盡量避免出現(xiàn)上述現(xiàn)象，建議血清分裝成一次性用量存于-15°至-20℃冰箱，避免反復(fù)凍融和融化后的血清在2-8°C條件下長時間放置。

※血清是否需要做滅活處理？

    這取決于您的應(yīng)用。

    滅活過程中，會導(dǎo)致血清中某些成分被破壞，如氨基酸，維生素，生長因子等。所以只有在您的實驗對血清有特殊要求時，才會考慮對血清進(jìn)行滅活處理。如您的實驗對血清中的某種組分敏感，需要去除該組分。好常見的情況是需要去除血清中的補體蛋白，因為補體在機體中參與細(xì)胞殺傷，巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞活化，肥大細(xì)胞和血小板組胺釋放，平滑肌收縮等過程，所以一般在免疫學(xué)相關(guān)研究中及肌細(xì)胞和干細(xì)胞的培養(yǎng)過程中需要對血清進(jìn)行滅活處理。

※如何進(jìn)行血清滅活處理？

    血清請先按上述“血清應(yīng)如何融解”中的操作步驟融化和混勻，熱滅活時請將血清置于56℃水浴30分鐘。為盡量減少熱滅活對血清品質(zhì)的影響，一次滅活的血清體積不宜過大。好好準(zhǔn)備同樣的容器裝相等體積的水（與血清相同溫度），滅活時將裝有血清和水的容器同時放入56℃水浴, 在裝水的容器中放置溫度計，加熱過程中不時輕輕旋轉(zhuǎn)混勻血清，當(dāng)溫度計顯示達(dá)到56℃左右，開始計時。56 ℃水浴后，建議馬上轉(zhuǎn)移到冰上降溫。

※為什么需要對血清進(jìn)行gamma射線輻照？

    gamma 射線輻照的目的是滅活血清中的病毒，一般情況下，25-40kGy和30-45kGy是常用的輻射劑量。

※如何應(yīng)對血清的批間差？

    琛藝銷售的胎牛血清產(chǎn)品通過嚴(yán)格的質(zhì)控盡可能縮小批間差，但由于血清本身的特點和來源，無法*避免批間差?？蛻艨梢酝ㄟ^做預(yù)測試等方式，選擇可滿足要求的血清批次。

SK-OV-3（人卵巢癌細(xì)胞）(通過STR鑒定)

其實，剛剛復(fù)蘇的細(xì)胞就像是剛剛出生的baby，非常脆弱，需要各位小伙伴的細(xì)心呵護，不然，細(xì)胞就會被我們花樣玩死。為了避免細(xì)胞不明不白的掛掉，我們就要對細(xì)胞的各種習(xí)性了如指掌。

1. 俗語道，到什么山上唱什么歌，不同細(xì)胞用不同的培養(yǎng)液。此時，就不得不提起培養(yǎng)基里的“四大金剛”—MEM、DMEM、1640、F-12，它們基本參與了90%以上種類細(xì)胞的培養(yǎng)過程。

MEM作為帶頭大哥，能力非常全面，號稱是應(yīng)用好廣泛的細(xì)胞培養(yǎng)液。

DMEM作為隨時緊跟老大MEM的二弟，青出于藍(lán)而勝于藍(lán)，濃度要高出2~4倍，可分為高糖型（含葡萄糖4500mg/L）和低糖型（含葡萄糖1000mg/L）。

老三1640中規(guī)中矩，營養(yǎng)成分比較簡單，比DMEM少一點糖和谷光甘肽，常用于淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)。

小兄弟F12常用來支持CHO、Hela和L－細(xì)胞生長以及原代大鼠肝細(xì)胞和前列腺上皮細(xì)胞的培養(yǎng)。MEM和F12 這兩種培養(yǎng)基各取1/2，即可形成神經(jīng)生物學(xué)好通用的培養(yǎng)基。

2. 細(xì)胞生長的空間密度是細(xì)胞培養(yǎng)的關(guān)鍵。具體養(yǎng)細(xì)胞時應(yīng)該摸索細(xì)胞喜歡的生長空間密度，既不能讓細(xì)胞瓶里的細(xì)胞因擁擠不堪而萎靡不振；也不能讓細(xì)胞濃度低于1~5×10^5個/mL而導(dǎo)致“孤獨死”（因為細(xì)胞的健康生長需要細(xì)胞間的連接）。因而細(xì)胞接種前，要先通過細(xì)胞計數(shù)來調(diào)整細(xì)胞濃度。

3. 當(dāng)培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞形態(tài)不好時，可在傳代時，先倒掉舊的培養(yǎng)基，加入3ml新的培養(yǎng)基（有無血清都可以）洗滌一次，用滴管吸走，再加入3ml培養(yǎng)基，沿著瓶底輕輕吹打一遍，然后吸走。這時再正式進(jìn)行消化、吹打。

其次，把吹打下的細(xì)胞懸液加入到含有新培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶內(nèi)，置于培養(yǎng)箱里培養(yǎng)，按時間點觀察細(xì)胞貼壁情況（10min，20min，30min）。而后迅速倒出其中的培養(yǎng)基，加入3ml新培養(yǎng)基再輕輕洗一次，然后加入*培養(yǎng)基培養(yǎng)并觀察細(xì)胞生長情況以及形態(tài)。直至找到細(xì)胞較好的形態(tài)為止。

4. 至于在培養(yǎng)瓶中加入多少培養(yǎng)基量，則是需要實驗汪們自己去摸索的。對于生長快的細(xì)胞，易生長的細(xì)胞加少一點培養(yǎng)基，細(xì)胞形態(tài)會更好，但是要注意對換液時間的把握。

5. 如何選擇培養(yǎng)瓶。一般，生長速度慢的細(xì)胞如果想要更漂亮的細(xì)胞狀態(tài)，那么采用塑料瓶會比玻璃瓶的效果好；生長速度快的細(xì)胞，用玻璃瓶培養(yǎng)的效果會更好。因此，對于同一種細(xì)胞，在其生長速度慢的時候（比如細(xì)胞剛復(fù)蘇時或者原代培養(yǎng)），塑料瓶會好一點；而在其生長旺盛的時候，玻璃瓶則相對會好一點。

6. 細(xì)胞凍存時，蓋子要擰緊，不然復(fù)蘇水浴時會滲水，造成細(xì)胞污染。因而凍存管要選擇原配的管子和蓋子（不同牌子、型號的管子會有差別），蓋子擰緊后好好用封口膜封住。且每支凍存管都要標(biāo)上細(xì)胞的名稱、凍存時間，并記錄在冊，以免后續(xù)復(fù)蘇細(xì)胞時，取錯細(xì)胞。

7. 細(xì)胞凍存時要嚴(yán)格進(jìn)行梯度降溫（-4℃→-20℃~-40℃→-80℃→液氮）。要知道冰火兩重天的生活環(huán)境只會讓嬌弱的細(xì)胞自爆身亡，謹(jǐn)記：緩降溫！但如果真心趕時間時，可以使用細(xì)胞凍存盒進(jìn)行細(xì)胞凍存，而后盡快將其轉(zhuǎn)入液氮中。此外，要定期測量液氮罐里的液氮儲備，以保證細(xì)胞全部浸在液面下。

8. 細(xì)胞解凍時，由于凍存管管壁較厚、隔熱，而導(dǎo)致水浴時間太長（2min還沒融化）時，可以將水浴鍋的溫度調(diào)至40℃左右，可以縮短解凍時間。

9. 提前預(yù)定超凈臺，減少復(fù)蘇后插在冰盒里等待的時間，可避免細(xì)胞房人滿為患，超凈臺使用緊張，復(fù)蘇1h后，還沒有加入新的培養(yǎng)液。（高濃度DMSO防止胞內(nèi)形成冰晶，凍存時保護細(xì)胞，但復(fù)蘇融解后，浸泡時間太久會對細(xì)胞有毒性）

10. 復(fù)蘇細(xì)胞時一定要有耐心，因為有些細(xì)胞在復(fù)蘇一星期后才會真正有起色。因而，盡管細(xì)胞在復(fù)蘇三四天后沒有任何動靜，也不要輕易倒掉所有細(xì)胞，要耐心等待，兩周后再做決定。

11. 有關(guān)DMSO的一些注意事項：

(1) DMSO能夠快速穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞中，降低冰點、延緩凍存過程，同時提高細(xì)胞內(nèi)的離子濃度、減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少細(xì)胞損傷程度。

(2) DMSO在溶解過程中會放熱，應(yīng)先與培養(yǎng)基混勻后再加血清，同時凍存液好好提前配置，DMSO現(xiàn)配對細(xì)胞的毒性可能更大；

(3) 復(fù)蘇時，要離心去除DMSO，并用新鮮的培養(yǎng)基洗滌1-2次，注意離心的時候速度不要太快。

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