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						上海研謹(jǐn)生物科技有限公司
            中級(jí)會(huì)員 | 第16年
            
					
            
				
            
			
            
		
            
	
            
	
	
            
		
            
			
		
            
	
            

            

	
            
		
            
			
			
            
							
            
					
            無(wú)血清傳代培養(yǎng)2018/08/12
            
					
            
				無(wú)血清傳代培養(yǎng)黏附因子:如果除掉血清,就必須直接在培養(yǎng)基中加入25-50ug/ml的粘連蛋白或1-5ug/ml的層粘連蛋白用以處理塑料培養(yǎng)器皿的生長(zhǎng)表面.用1mg/ml的多聚L-融賴氨酸預(yù)處理塑料培養(yǎng)器皿,可增強(qiáng)人類二倍體成纖維細(xì)胞的存活率.蛋白酶抑制劑:利用胰蛋白酶進(jìn)行傳代培養(yǎng)后,加入血清可抑制剩余的蛋白水解酶的活性,所以用無(wú)血清培養(yǎng)基進(jìn)行傳代培養(yǎng)時(shí)必須在無(wú)血清培養(yǎng)基中加入如大豆胰蛋白酶抑制劑或0.1mg/ml的牛胰蛋白酶抑制劑等蛋白酶抑制劑.由于粗制胰蛋白酶是由多種蛋白酶組成的復(fù)雜的混合物,
					
            
				
            
								
            
					
            Ig的輔助成分2018/08/12
            
					
            
				Ig的輔助成分除H鏈和L鏈外，某些Ig還含有其他輔助成分如連接鏈（J鏈）和分泌片（Secretorypiece,Sp）.J鏈?zhǔn)歉缓腚装彼岬亩嚯逆湥蓾{細(xì)胞合成與連接單體Ig成多聚體并與保持其穩(wěn)定性有關(guān)。Sp是上皮細(xì)胞上的多免疫球蛋白受體的一部分，由黏膜上皮細(xì)胞合成和分泌，以非共價(jià)形式結(jié)合于IgA二聚體上，使其成分泌型IgA（SIgA）.Sp的功能是保護(hù)SIgA分子不被分泌液內(nèi)的蛋白降解，從而使SIgA在黏膜表面保持穩(wěn)定和有利于其發(fā)揮生物活性。細(xì)胞外基質(zhì)細(xì)胞信號(hào)傳遞細(xì)胞增殖的控制無(wú)血清傳代培養(yǎng)
					
            
				
            
								
            
					
            細(xì)胞間連接2018/08/10
            
					
            
				細(xì)胞間連接一些細(xì)胞黏附分子分布在細(xì)胞質(zhì)膜上,還有一部分黏附分子作為胞間連接的組成成分.不同的胞間連接結(jié)構(gòu)的功能是不一樣的,如橋粒和黏附連接將上皮細(xì)胞結(jié)合在一起;緊密連接能封閉細(xì)胞間（如泡狀腺或管狀腺分泌細(xì)胞之間,血管內(nèi)皮細(xì)胞之間）的間隙;間隙連接允許離子.營(yíng)養(yǎng)物分子和cAMP等小分子信號(hào)物質(zhì)在相接觸的細(xì)胞間移動(dòng)[Albertsetal.,2002].橋粒在細(xì)胞相接觸的質(zhì)膜區(qū)也有廣泛分布,但它們往往與緊密連接和黏附連接結(jié)構(gòu)共分布在細(xì)胞側(cè)面近頂部.上皮細(xì)胞在鋪滿培養(yǎng)物中分化時(shí),橋粒的形成會(huì)增加,或者
					
            
				
            
								
            
					
            細(xì)胞黏附分子與細(xì)胞骨架2018/08/10
            
					
            
				細(xì)胞骨架細(xì)胞黏附分子與細(xì)胞骨架成分相連,整合蛋白通過(guò)連接蛋白與肌動(dòng)蛋白微絲相連,并與細(xì)胞表面和細(xì)胞核的通信有關(guān).在黏著斑中,鈣黏著蛋白也聯(lián)結(jié)到肌動(dòng)蛋白骨架上,介導(dǎo)細(xì)胞形狀的變化;含有鲺黏著蛋白的橋粒通過(guò)致密斑與中間纖維（由角質(zhì)蛋白形成）相連,但現(xiàn)在尚不清楚這種連接只是純粹的結(jié)構(gòu)特征,還是也有信號(hào)傳導(dǎo)功能.中間纖維介導(dǎo)的細(xì)胞連接有特異性,可用于細(xì)胞鑒定.微管是另一類細(xì)胞骨架成分,其功能主要與細(xì)胞運(yùn)動(dòng)和細(xì)胞器在細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸有關(guān),如細(xì)胞分裂時(shí)線粒體的移動(dòng)和染色單體的分開.細(xì)胞間連接細(xì)胞黏附DC2.4小鼠
					
            
				
            
								
            
					
            細(xì)胞分化的維持2018/08/10
            
					
            
				細(xì)胞分化的維持多年來(lái)人們就認(rèn)識(shí)到,如果像器官培養(yǎng)那樣使組織的三維結(jié)構(gòu)得到維持,那么,細(xì)胞的特化功能就可以較長(zhǎng)地保留,不幸的是,器官培養(yǎng)不能增殖,每次實(shí)驗(yàn)都得從頭開始,而且器官培養(yǎng)比細(xì)胞培養(yǎng)更難量化.鑒于這些原因,許多研究者都試圖通過(guò)灌注單層細(xì)胞培養(yǎng)物及營(yíng)造培養(yǎng)細(xì)胞的體內(nèi)環(huán)境條件和特定基質(zhì)條件,如勝券在握凝膠,纖維素或明膠海綿,或從天然組織基質(zhì)糖蛋白中得到相關(guān)物質(zhì),如纖粘連蛋白,軟骨粘連蛋白和層粘連蛋白等來(lái)重建三維結(jié)構(gòu).許多商業(yè)化產(chǎn)品,zui的產(chǎn)品有Matrigel（Becton-Dickinso
					
            
				
            
								
            
					
            細(xì)胞的衰老2018/08/10
            
					
            
				細(xì)胞的衰老正常細(xì)胞的分裂次數(shù)有限,因此,從正常組織獲得的細(xì)胞在經(jīng)過(guò)一定次數(shù)的分裂后,細(xì)胞就會(huì)死亡,這一現(xiàn)象稱為細(xì)胞衰老.現(xiàn)在認(rèn)為,衰老是由于端粒的DNA末端序列在每次細(xì)胞分裂中無(wú)法正常復(fù)制而逐漸變短而造成的.結(jié)果是,端粒隨著細(xì)胞分裂次數(shù)增加而不斷縮短,zui終細(xì)胞不能再分裂[Bodnetetal.,1998].但是,生殖細(xì)胞,干細(xì)胞和轉(zhuǎn)化細(xì)胞的情況并非如此,這些細(xì)胞常通過(guò)表達(dá)能復(fù)制端粒DNA的端粒酶來(lái)延長(zhǎng)細(xì)胞的壽命,甚至使生殖細(xì)胞和一些腫瘤細(xì)胞具有無(wú)限增殖能力.細(xì)胞分化的維持細(xì)胞骨架細(xì)胞間連接
					
            
				
            
								
            
					
            培養(yǎng)細(xì)胞的環(huán)境2018/08/10
            
					
            
				培養(yǎng)細(xì)胞的環(huán)境把體外培養(yǎng)的細(xì)胞當(dāng)作體內(nèi)生理功能模型的合理性常受到人們質(zhì)疑.由于環(huán)境的改變,培養(yǎng)細(xì)胞通常不表現(xiàn)體內(nèi)同類細(xì)胞的特征.另外,同一細(xì)胞系缺乏異質(zhì)性和體內(nèi)細(xì)胞的三維結(jié)構(gòu),并且激素和營(yíng)養(yǎng)環(huán)境也發(fā)生了改變,細(xì)胞與細(xì)胞,細(xì)胞與胞外基質(zhì)的相互作用減弱,有利于非特化細(xì)胞鋪展,遷移和增殖,但不利于表達(dá)分化特征.環(huán)境通過(guò)以下四條途徑對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞產(chǎn)生影響:1,細(xì)胞生長(zhǎng)的附著物或支持物性質(zhì),它們可以是固體（如單層細(xì)胞生長(zhǎng)的塑料板或其他鋼性基板）,也可以是半固體（如膠原凝膠或瓊脂凝膠）,還可以是液體（如懸浮細(xì)胞
					
            
				
            
								
            
					
            用超聲波破碎儀破碎大腸桿菌注意事項(xiàng)2018/08/10
            
					
            
				用超聲波破碎儀破碎大腸桿菌注意事項(xiàng)用大腸桿菌表達(dá)外源蛋白，在進(jìn)行超聲波破碎之前，用含有1%triton-X-100的PBS懸浮，效果較好，1%triton-X-100的作用還是很明顯的，對(duì)其他的一些細(xì)菌同樣起作用，比如鏈霉菌。細(xì)菌沉淀直接加樣品1buffer，再加5μl的巰基乙醇，混勻，離心，煮沸10min，直接上樣，染色脫色步驟如下:將膠放入適量的染色液微波爐里加熱1min(下次適當(dāng)補(bǔ)點(diǎn)醋酸即可),將染色液換成大量的水(自來(lái)水即可)在微波爐煮10min就可以。在表達(dá)重組蛋白后超聲波破碎細(xì)胞，采
					
            
				
            
								
            
					
            細(xì)胞破碎的方式2018/08/10
            
					
            
				細(xì)胞破碎的方式細(xì)胞破碎技術(shù)是指利用外力破壞細(xì)胞膜和細(xì)胞壁的樣品處理方式，使細(xì)胞內(nèi)容物包括目的產(chǎn)物成分釋放出來(lái)的技術(shù)，是分離純化細(xì)胞內(nèi)合成的非分泌型生化物質(zhì)（產(chǎn)品）的基礎(chǔ)。結(jié)合重組DNA技術(shù)和組織培養(yǎng)技術(shù)上的重大進(jìn)展，以前認(rèn)為很難獲得的蛋白質(zhì)現(xiàn)在可以大規(guī)模生產(chǎn)。細(xì)胞破碎阻力細(xì)菌幾乎所有細(xì)菌的細(xì)胞壁都是由肽聚糖（peptidoglycan）組成，它是難溶性的聚糖鏈（glycanchain），藉助短肽交聯(lián)而成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，包圍在細(xì)胞周圍，使細(xì)胞具有一定的形狀和強(qiáng)度。短肽一般由四或五個(gè)胺基酸組成，如L-丙
					
            
				
            
								
            
					
            細(xì)胞培養(yǎng)常見問(wèn)題解決！2018/08/10
            
					
            
				實(shí)驗(yàn)室經(jīng)驗(yàn)之總結(jié)（四十五）：細(xì)胞培養(yǎng)常見問(wèn)題解決！1、如何儲(chǔ)存和解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損?建議血清應(yīng)保存在-2O℃。若一次無(wú)法用完一瓶，無(wú)菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。將血清從冷凍箱取出后，置于2～8℃冰箱使之緩慢融解，一般是融解過(guò)夜。2、血清中包含絮狀沉淀，它們是什么，怎么處理?沉淀主要成分是纖維蛋白和脂蛋白，不會(huì)影響血清品質(zhì)。首先讓其沉淀在瓶子底部，中上層無(wú)沉淀血清直接轉(zhuǎn)出使用，下層血清裝到50ml無(wú)菌離心管，400g，離心3分鐘即可除去(一般不建議采用過(guò)濾的方法除去沉淀，因
					
            
				
            
								
            
					
            人胚腎細(xì)胞（293T）2018/07/23
            
					
            
				人胚腎細(xì)胞(293T)貨號(hào)：HEMCL-033細(xì)胞介紹293細(xì)胞株插入SV40T-抗原的溫度敏感基因后產(chǎn)生的高轉(zhuǎn)染效率的衍生株稱為293T。細(xì)胞特性1）來(lái)源：胚胎，腎臟2）形態(tài)：上皮細(xì)胞樣3）含量：1x106個(gè)/mL4）污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性5）規(guī)格：T75瓶或者1mL凍存管包裝運(yùn)輸和保存：使用含有胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細(xì)胞。收到細(xì)胞后，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min后，于潔凈操作臺(tái)棄去上清，加入推薦使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至10cm培養(yǎng)皿或者T75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)
					
            
				
            
								
            
					
            蛋白質(zhì)和多聚胺2018/07/23
            
					
            
				蛋白質(zhì)和多聚胺培養(yǎng)基中含有蛋白質(zhì),如牛血清白蛋白(BSA),組織抽提物等,這些物質(zhì)?？纱龠M(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)與存活,但加入的組分是不明確的,這就產(chǎn)生了外來(lái)物污染試劑的問(wèn)題.組織抽提物包括牛垂體抽提物可聯(lián)合用于角化細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基,但也可以用已知的重組生長(zhǎng)因子代替.無(wú)脂肪酸的牛血清白蛋白用量是1-10mg/ml;轉(zhuǎn)鐵蛋白約10ng/ml,它是轉(zhuǎn)運(yùn)鐵的載體,也有促有絲分裂的作用;丁二胺的用量約100nmol/L.http://apwanrong.com/st166210/
					
            
				
            
								
            
					
            大腸桿菌的分離鑒定與耐藥性分析2018/07/05
            
					
            
				大腸桿菌的分離鑒定與耐藥性分析細(xì)菌分離純化：無(wú)菌采集肝臟劃線接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基，伊美蘭瓊脂培養(yǎng)基中，37℃恒溫培養(yǎng)12-24h，用普通培養(yǎng)基進(jìn)行純化培養(yǎng)；細(xì)菌形態(tài)特征：無(wú)菌挑去上述純化培養(yǎng)菌，革蘭氏染色鏡檢電鏡觀察：FQ-180菌液培養(yǎng)7h后，3000r/min離心5min，棄上清，ddH2O洗滌2次重懸，取15ul滴在Formver膜覆蓋在銅網(wǎng)上，2min后滴加磷鎢酸負(fù)染2min，待銅網(wǎng)烘干后，在投射電子顯微鏡下觀察生化試驗(yàn)：將初步分離到的可疑菌落進(jìn)行吲哚試驗(yàn)，MR試驗(yàn)，VP試驗(yàn)，淀粉E試
					
            
				
            
								
            
					
            人脊髓灰質(zhì)炎病毒抗體IgM（PV-IgM）ELIS試劑盒定性說(shuō)明書2018/06/25
            
					
            
				人脊髓灰質(zhì)炎病毒抗體IgM(PV-IgM)酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒使用說(shuō)明書本試劑僅供研究使用目的：本試劑盒用于測(cè)定人血清，血漿及相關(guān)液體樣本中脊髓灰質(zhì)炎病毒抗體IgM(PV-IgM)水平。實(shí)驗(yàn)原理：本試劑盒采用雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法（ELISA）測(cè)定標(biāo)本中人脊髓灰質(zhì)炎病毒抗體IgM(PV-IgM)。用純化的人脊髓灰質(zhì)炎病毒抗體IgM(PV-IgM)抗原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中人脊髓灰質(zhì)炎病毒抗體IgM(PV-IgM)相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后再與HRP標(biāo)記的脊
					
            
				
            
								
            
					
            人脊髓灰質(zhì)炎病毒抗體IgG（PV-IgG）ELISA試劑盒說(shuō)明書2018/06/25
            
					
            
				人脊髓灰質(zhì)炎病毒抗體IgG(PV-IgG)酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒使用說(shuō)明書本試劑僅供研究使用目的：本試劑盒用于測(cè)定人血清，血漿及相關(guān)液體樣本中脊髓灰質(zhì)炎病毒抗體IgG(PV-IgG)水平。實(shí)驗(yàn)原理：本試劑盒采用雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法（ELISA）測(cè)定標(biāo)本中人脊髓灰質(zhì)炎病毒抗體IgG(PV-IgG)。用純化的人脊髓灰質(zhì)炎病毒抗體IgG(PV-IgG)抗原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中人脊髓灰質(zhì)炎病毒抗體IgG(PV-IgG)相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后再與HRP標(biāo)記的脊
					
            
				
            
								
            
					
            人沙眼衣原體IgM（CT IgM）ELISA試劑盒說(shuō)明書2018/06/25
            
					
            
				人沙眼衣原體IgM(CTIgM)酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒使用說(shuō)明書本試劑僅供研究使用目的：本試劑盒用于測(cè)定人血清，血漿及相關(guān)液體樣本中沙眼衣原體IgM(CTIgM)水平。實(shí)驗(yàn)原理：本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法（ELISA）測(cè)定標(biāo)本中人沙眼衣原體IgM(CTIgM)。用純化的人沙眼衣原體IgM(CTIgM)抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中沙眼衣原體IgM(CTIgM)相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后再與HRP標(biāo)記的沙眼衣原體IgM(CTIgM)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原
					
            
				
            
								
            
					
            小鼠抗心磷脂抗體IgA（ACA-IgA）ELISA試劑盒說(shuō)明書2018/06/09
            
					
            
				小鼠抗心磷脂抗體IgA(ACA-IgA)酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒使用說(shuō)明書本試劑僅供研究使用目的：本試劑盒用于測(cè)定小鼠血清，血漿及相關(guān)液體樣本中抗心磷脂抗體IgA(ACA-IgA)的含量。實(shí)驗(yàn)原理：本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中小鼠抗心磷脂抗體IgA(ACA-IgA)水平。用純化的小鼠抗心磷脂抗體IgA(ACA-IgA)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入抗心磷脂抗體IgA(ACA-IgA),再與HRP標(biāo)記的抗心磷脂抗體IgA(ACA-IgA)抗體結(jié)合，形成抗體-
					
            
				
            
								
            
					
            小鼠戊糖素（Pentosidine）試劑盒使用說(shuō)明書2018/06/09
            
					
            
				小鼠戊糖素（Pentosidine）酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說(shuō)明書本試劑僅供研究使用目的：本試劑盒用于測(cè)定小鼠血清，組織及相關(guān)液體樣本中戊糖素（Pentosidine）的含量。實(shí)驗(yàn)原理：本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中小鼠戊糖素（Pentosidine）水平。用純化的小鼠戊糖素（Pentosidine）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入戊糖素（Pentosidine），再與HRP標(biāo)記的戊糖素（Pentosidine）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底
					
            
				
            
								
            
					
            小鼠抗凝血酶Ⅲ抗體（AT-Ⅲ）ELISA試劑盒說(shuō)明書2018/06/09
            
					
            
				小鼠抗凝血酶Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒使用說(shuō)明書本試劑僅供研究使用目的：本試劑盒用于測(cè)定小鼠血清，血漿，組織液及相關(guān)液體樣本中抗凝血酶Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)的含量。實(shí)驗(yàn)原理：本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中小鼠抗凝血酶Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)水平。用純化的小鼠抗凝血酶Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入抗凝血酶Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)，再與HRP標(biāo)記的抗凝血酶Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。
					
            
				
            
								
            
					
            小鼠抗心磷脂抗體IgM（ACA-IgM）試劑盒說(shuō)明書2018/04/03
            
					
            
				小鼠抗心磷脂抗體IgM（ACA-IgM）酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說(shuō)明書本試劑僅供研究使用目的：本試劑盒用于測(cè)定小鼠血清，血漿及相關(guān)液體樣本中抗心磷脂抗體IgM（ACA-IgM）的含量。實(shí)驗(yàn)原理：本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中小鼠抗心磷脂抗體IgM（ACA-IgM）水平。用純化的抗心磷脂抗體IgM（ACA-IgM）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入ACA-IgM，再與HRP標(biāo)記的抗心磷脂抗體IgM（ACA-IgM）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物
					
            
				
            
							
				
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