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2016
03-07

ELISA試劑盒如何在生物經(jīng)濟(jì)成就
在生物經(jīng)濟(jì)的成長(zhǎng)階段，恰如信息經(jīng)濟(jì)在其成長(zhǎng)階段出現(xiàn)了半導(dǎo)體和軟件技術(shù)一樣，一些熱門(mén)的生物產(chǎn)業(yè)也將應(yīng)運(yùn)而生，并將成為生物經(jīng)濟(jì)時(shí)代的開(kāi)路先鋒。ELISA試劑盒檢測(cè)常用結(jié)果判定的三個(gè)方法:1、定量測(cè)定即用己知量的標(biāo)準(zhǔn)品作一系列稀釋后進(jìn)行ELISA測(cè)定，與待測(cè)標(biāo)本同時(shí)進(jìn)行測(cè)定，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果以量或活性單位表示之。2、半定量測(cè)定結(jié)果一般以滴度表示。將標(biāo)本連續(xù)稀釋后，進(jìn)行ELISA檢測(cè)，在陽(yáng)性臨界值以上的zui高稀釋度即為該標(biāo)本的“滴度"。3、定性測(cè)定(1)陽(yáng)性判定值法(cut-offvalue，CO值
2016
03-04

elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)
比色前應(yīng)先用潔凈的吸水紙拭干板底附著的液體，然后將板正確放入酶標(biāo)比色儀的比色架中。以軟板為載體的試驗(yàn)，需先將板置于標(biāo)準(zhǔn)96孔的座架中，才可進(jìn)行比色。ELISA試劑盒比色時(shí)應(yīng)先以蒸餾水校零點(diǎn)，測(cè)讀底物孔（未經(jīng)任何反應(yīng)僅加底物液的孔）和空白孔（以生理鹽水或稀釋液代替標(biāo)本作全過(guò)程的孔）比色結(jié)果的表達(dá)以往通用光密度（oplicaldensity，OD），現(xiàn)按規(guī)定用吸光度（absorbence，A），兩者含義相同。通常的表示方法是，將吸收波長(zhǎng)寫(xiě)于A字母的右下角，如OPD的吸收波長(zhǎng)為492nm，表示方法為"
2016
03-02

NLR的激活與信號(hào)
天然狀態(tài)下的NLR分子，N端LRR結(jié)構(gòu)域往往彎起來(lái)形成與NACHT結(jié)構(gòu)域并列的U字形構(gòu)型，掩蓋了后者發(fā)揮作用的部位。LRR一旦與配體結(jié)合，處于自身抑制狀態(tài)的NLR分子立即伸展開(kāi)來(lái)，暴露出NACHT寡聚結(jié)構(gòu)域，并迅速形成6—8個(gè)同類(lèi)分子的聚合體。該NLR遂被激活，啟動(dòng)相應(yīng)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。ELISA試劑盒細(xì)菌被M平等吞噬后，首先形成吞噬體，然后與溶酶體融合成為吞噬溶酶體，在溶酶體酶的作用下，細(xì)菌胞壁成分分解為肽聚糖（PGN），后者再降解成一種具有免疫調(diào)變活性的胞壁肽（rnuropeptide）。胞壁肽中
2016
02-29

培養(yǎng)基的滅菌的方法
滅菌方法1、高壓蒸汽滅菌：高壓蒸汽滅菌適合于耐高溫培養(yǎng)基、接種器械和蒸餾水的滅菌。培養(yǎng)基在愛(ài)制備過(guò)程中混入各種雜菌，分裝后應(yīng)立即滅菌，至少應(yīng)在24h內(nèi)完成滅菌工作。滅菌時(shí)一般是在0.105MPa壓力下，溫度121℃時(shí)，滅菌15~30min即可。消毒時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，也不能超過(guò)規(guī)定的壓力范圍，否則有機(jī)物質(zhì)特別是維生素類(lèi)物質(zhì)就會(huì)在高溫下分解，失去營(yíng)養(yǎng)作用，也會(huì)使培養(yǎng)基變質(zhì)、變色，甚至難以凝固。將蒸餾水或自來(lái)水裝在三角瓶中，裝水量一般不超過(guò)瓶的2/3，用牛皮紙或硫酸紙包扎封口，然后放入高壓鍋中滅菌后即為無(wú)
2016
02-26

標(biāo)本因素對(duì)ELISA測(cè)定的影響
ELISA即酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，是一種常用的固相酶免疫測(cè)定方法。ELISA的基本原理是：①使抗原（或抗體）結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性；②使抗原（或抗體）與某種酶聯(lián)結(jié)成酶標(biāo)抗原（或抗體），而且此酶標(biāo)抗原（或抗體）既保留其免疫活性，又保留其酶活性；③測(cè)定時(shí)將受檢標(biāo)本（抗體或抗原）和酶標(biāo)抗原（或抗體）按不同步驟與固相載體表面的抗原或抗體進(jìn)行反應(yīng)，再用洗滌方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其它物質(zhì)分開(kāi)，zui后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢的抗體或抗原量成一定比例；再加入酶反應(yīng)底物后
2016
02-24

ELISA檢測(cè)的樣本
ELISA試劑盒通常我們可用于ELISA檢測(cè)的樣本是有多種類(lèi)型的，如血清、血漿、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清或組織勻漿液等，不同類(lèi)型的檢測(cè)樣本前期的處理方法是不一樣的。正確的處理樣本是保證ELISA檢測(cè)的正確性和準(zhǔn)確性的*步。1、血清血清是zui常用于ELISA檢測(cè)的一類(lèi)樣本，處理也比較簡(jiǎn)單。用無(wú)熱原、無(wú)內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液標(biāo)本，將試管或離心管室溫放置2小時(shí)或4℃一個(gè)晚上，使血清析出。（將試管或離心管傾斜放置，使液面橫截面增大，能使血清更大程度的析出。）4℃1000×g離心20分鐘，仔細(xì)收集上清。
2016
02-22

基因組DNA轉(zhuǎn)染
本實(shí)驗(yàn)要加入PSV2-neo、DNA與外源DNA共轉(zhuǎn)染受體細(xì)胞，這樣可使受體細(xì)胞獲得新霉素(neo)基因的抗藥性，這樣即使癌基因沒(méi)有出現(xiàn)明顯的“轉(zhuǎn)化灶”，也可測(cè)出轉(zhuǎn)入的外源性基因的抗neo的標(biāo)記。而且還可利用被neo基因?qū)氲氖荏w細(xì)胞通過(guò)G418選擇培養(yǎng)篩選轉(zhuǎn)化的細(xì)胞建立細(xì)胞株。若以獲取“轉(zhuǎn)化灶”為目的，可不加入PSV2-neoDNA只需將從癌細(xì)胞中提取的基因組DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞即可，其方法如下：1.基因組DNA轉(zhuǎn)染：(1)配制磷酸轉(zhuǎn)染液NaCl8.0gHepes5.0g用時(shí)現(xiàn)配，pH很重要一定
2016
02-19

制備單抗的方法
獲得穩(wěn)定的雜交瘤細(xì)胞系后，即可根據(jù)需要大量單抗，以用于不同目的。一、單抗的大規(guī)模制備目前大量制備單抗的方法主要有兩大系統(tǒng)，一是動(dòng)物體內(nèi)法，這是國(guó)內(nèi)外實(shí)驗(yàn)室所廣泛采用；另一是體外培養(yǎng)法。1、動(dòng)物體內(nèi)單抗的方法迄今為止，通常情況下均采用動(dòng)物體內(nèi)單抗的方法，鑒于絕大多數(shù)動(dòng)物用雜交瘤均由BALB/c小鼠的骨髓瘤細(xì)胞與同品系的脾細(xì)胞融合而得，因此使用的動(dòng)物當(dāng)然BALB/c小鼠。本方法即將雜交瘤細(xì)胞接種于小鼠腹腔內(nèi)，在小鼠腹腔內(nèi)生長(zhǎng)雜交瘤，并產(chǎn)生腹水，因而可得到大量的腹水單抗且抗體濃度很高。可見(jiàn)該法操作簡(jiǎn)便
2016
02-17

蛋白質(zhì)沉淀法
其他沉淀法一．等電點(diǎn)沉淀法兩性電解質(zhì)分子上的凈電荷為零時(shí)溶解度zui低，不同的兩性電解質(zhì)具有不同的等電點(diǎn)，以此為基礎(chǔ)可進(jìn)行分離。如工業(yè)上胰島素時(shí)，在粗提液中先調(diào)PH8.0去除堿性蛋白質(zhì)，再調(diào)PH3.0去除酸性蛋白質(zhì)。ELISA試劑盒利用等電點(diǎn)除雜蛋白時(shí)必須了解制備物對(duì)酸堿的穩(wěn)定性，不然盲目使用十分危險(xiǎn)。不少蛋白質(zhì)與金屬離子結(jié)合后，等電點(diǎn)會(huì)發(fā)生偏移，故溶液中含有金屬離子時(shí)，必須注意調(diào)整PH值。等電點(diǎn)法常與鹽析法、有機(jī)溶劑沉淀法或其他沉淀方法聯(lián)合使用，以提高其沉淀能力。二．生成鹽復(fù)合物沉淀法1．金屬
2016
02-15

腫瘤免疫作用
機(jī)體對(duì)腫瘤的免疫分為先天性免疫及適應(yīng)性（后天性）免疫。先天性免疫是機(jī)體固有的、經(jīng)遺傳獲得的免疫力，適應(yīng)性免疫是機(jī)體受到抗原刺激后產(chǎn)生的免疫力。先天性免疫由多種細(xì)胞及體液因子組成，其中自然殺傷細(xì)胞（naturekilercel，NKcel）在腫瘤免疫中發(fā)揮著重要作用。后天性免疫有T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞組成，T淋巴細(xì)胞中的細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞（cytotoxicTlymphocyte，CTL）在腫瘤免疫中發(fā)揮著核心作用。樹(shù)突狀細(xì)胞（dendriticcel，DC）是專(zhuān)職的抗原遞呈細(xì)胞，既參與先天性免疫，
2016
02-03

肝癌干細(xì)胞的特性
從肝癌干細(xì)胞的zui初報(bào)道以來(lái)，針對(duì)其的研究已經(jīng)成為研究者熱點(diǎn)關(guān)注的領(lǐng)域，相關(guān)的報(bào)道也逐漸增多。1.高致瘤性事實(shí)上，致瘤性是zui令人關(guān)心的問(wèn)題，通常實(shí)驗(yàn)采取將腫瘤細(xì)胞移植到免疫缺陷小鼠體內(nèi)來(lái)驗(yàn)證不同細(xì)胞群的致瘤性。一般情況下成瘤實(shí)驗(yàn)需要大于10的腫瘤細(xì)胞才能致瘤，而極少量富集的腫瘤干細(xì)胞就能在小鼠體內(nèi)成瘤。因此，腫瘤干細(xì)胞有時(shí)亦可稱(chēng)為“腫瘤起始細(xì)胞（tumorinitiatingcels）”。值得注意的是，目前各個(gè)研究小組的對(duì)成瘤所需細(xì)胞數(shù)的報(bào)道并非*一致，Huh7和PLC/PRF/5的SP細(xì)
2016
02-01

病毒的致病作用
病毒侵入機(jī)體后，必須進(jìn)入易感細(xì)胞內(nèi)復(fù)制增殖。病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖，可使細(xì)胞出現(xiàn)損傷、死亡、轉(zhuǎn)化等反應(yīng)，同時(shí)細(xì)胞也產(chǎn)生干擾素等抑制病毒復(fù)制。病毒在與機(jī)體發(fā)生相互作用的過(guò)程中，能改變或損傷宿主細(xì)胞并由此引起疾病，稱(chēng)為病毒感染。病毒的致病作用（一）病毒對(duì)細(xì)胞的作用1.病毒對(duì)宿主細(xì)胞代謝的抑制作用某些病毒主要指DNA病毒感染宿主細(xì)胞后，通過(guò)與宿主細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)RNA聚合酶和細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子，抑制編碼宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)的基因轉(zhuǎn)錄，但目前對(duì)抑制宿主基因細(xì)胞轉(zhuǎn)錄的機(jī)制尚不十分清楚。許多病毒包括DNA病毒和RNA病毒均可抑制宿主
2016
01-29

MRD的檢測(cè)方法
微小殘留病(minimalresidualdisease，MRD)一般是指白血病患者在經(jīng)過(guò)治療后體內(nèi)殘存白血病細(xì)胞的狀態(tài)，被認(rèn)為是白血病復(fù)發(fā)及影響預(yù)后的主要原因。廣義而言，此含義還可包括其他惡性腫瘤。MRD被認(rèn)為是在傳統(tǒng)檢測(cè)方法所能檢測(cè)到的腫瘤細(xì)胞水平以下的長(zhǎng)期存在的腫瘤細(xì)胞，這些腫瘤細(xì)胞一旦增殖到一定程度能引起復(fù)發(fā)。因此，有效利用MRD檢測(cè)能夠很好地指導(dǎo)治療以增加*，提高療效，特別是對(duì)HSCT的療效評(píng)估方面也有重要的意義。MRD的檢測(cè)方法MRD的檢測(cè)方法很多，主要有細(xì)胞形態(tài)學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)、FI
2016
01-27

細(xì)菌的形態(tài)和大小
細(xì)菌細(xì)菌是自然界中分布zui廣、數(shù)量zui大的一類(lèi)微生物．也是環(huán)境工程中所涉及的zui重要的原核微生物。1．細(xì)菌的形態(tài)和大小在正常生長(zhǎng)條件下，細(xì)菌主要有四種形態(tài)：球狀、桿狀、螺旋狀、絲狀。據(jù)此，細(xì)菌可分別命名為球菌、桿菌、螺旋菌、絲狀菌。(1)球菌按分裂后細(xì)胞的排列方式不同，球菌可分為單球菌、雙球菌、四聯(lián)球菌、八疊球菌、鏈球菌、葡萄球菌。(2)桿萄桿菌有單桿菌(分長(zhǎng)桿菌和短桿菌)、雙桿菌和鏈桿菌。桿菌的兩端或一端有平截狀、圓弧狀、分枝狀、膨大呈棒槌狀。(3)螺旋菌螺旋菌呈螺旋卷曲狀。根據(jù)其彎曲程
2016
01-25

微生物的呼吸作用
微生物的呼吸作用實(shí)質(zhì)上就是細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的分解、氧化和釋放能量的過(guò)程，是新陳代謝的異化作用。呼吸作用中物質(zhì)的氧化主要是以脫氫方式(同時(shí)失去電子)實(shí)現(xiàn)的，即在化學(xué)反應(yīng)中一種物質(zhì)脫氫同時(shí)失去電子被氧化，另一種物質(zhì)得到氫和電子被還原。在此過(guò)程中釋放的能量主要被貯存在ATP(三磷酸腺苷)中，滿(mǎn)足各需能代謝反應(yīng)的需要，未被貯存的能量則以熱量形式散發(fā)掉。根據(jù)生物氧化中zui終氫受體(或zui終電子受體)性質(zhì)的不同，可以把呼吸類(lèi)型分為發(fā)酵、有氧呼吸和無(wú)氧呼吸三類(lèi)。根據(jù)微生物與氧氣的關(guān)系，微生物可分為好氧微生物、厭
2016
01-22

微生物生長(zhǎng)的測(cè)定
微生物生長(zhǎng)是細(xì)胞物質(zhì)有規(guī)律地．不可逆增加，導(dǎo)致細(xì)胞體積擴(kuò)大的生物學(xué)過(guò)程，這是個(gè)體生長(zhǎng)的定義。繁殖是微生物生長(zhǎng)到一定階段，由于細(xì)胞結(jié)構(gòu)的復(fù)制與重建并通過(guò)特定方式產(chǎn)生新的生命個(gè)體，即引起生命個(gè)體數(shù)量增加的生物學(xué)過(guò)程。微生物的個(gè)體生長(zhǎng)特點(diǎn)是時(shí)間裉短，很快就進(jìn)入繁殖階段，生長(zhǎng)與繁殖難以分開(kāi)。因此，常常以群體生長(zhǎng)作為細(xì)菌生長(zhǎng)的指標(biāo)，除有特定的目的以外．在微生物的研究和應(yīng)用中，只有群體的生長(zhǎng)才有意義，而群體生長(zhǎng)常常表現(xiàn)為細(xì)胞數(shù)目或物質(zhì)的增加。對(duì)細(xì)胞物質(zhì)的增加可以用生物量來(lái)表示。對(duì)于單細(xì)胞微生物生長(zhǎng)進(jìn)行測(cè)定時(shí)
2016
01-20

轉(zhuǎn)座因子的轉(zhuǎn)座過(guò)程
轉(zhuǎn)座因子是存在于染色體DNA上可以自主復(fù)制和位移的基本單位。轉(zhuǎn)座因子不同于質(zhì)粒等一些可移動(dòng)的因子，當(dāng)質(zhì)粒或某些病毒遺傳物質(zhì)成為宿主染色體一部分后，它們是隨著染色體復(fù)制．是被動(dòng)的，轉(zhuǎn)座因子不但可以在一條染色體上移動(dòng)，而且可以從一條染色體跳到另一條染色體上，從一個(gè)質(zhì)粒跳到另一個(gè)質(zhì)?；蛉旧w上，甚至可以從一個(gè)細(xì)胞跑到另一個(gè)細(xì)胞。轉(zhuǎn)座因子介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移過(guò)程稱(chēng)為轉(zhuǎn)座作用．在原核生物和真核生物中普遍存在．并通過(guò)缺失、插入、移動(dòng)、交換等形式直接或間接地促進(jìn)DNA重組事件的發(fā)生。因此在代謝工程操作中，常將外源基
2016
01-18

羊水細(xì)胞的培養(yǎng)
羊水細(xì)胞(amnioticcell)是羊水中胎兒脫落細(xì)胞的總稱(chēng)，可分為上皮樣細(xì)胞、成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞、羊水樣細(xì)胞。羊水細(xì)胞主要用于胎兒染色體疾病和先天性代謝疾病的產(chǎn)前診斷。一、材料與試劑1．培養(yǎng)液PRMI1640、HamF10、HamF、12等培養(yǎng)液均可。一般添加20%胎牛血清或30％小牛血清，谷氨酰胺1mmol／L，青霉素50U／ml，鏈霉素50μg／ml。2．分層液比重為1．077g／ml的Ficoll一Urografin溶液。3．清洗液1：1混合的培養(yǎng)基與胎牛血清。4．消化液0．25％胰酶一
2016
01-15

ELISA試劑盒樣本前處理
ELISA試劑盒樣本前處理是酶聯(lián)免疫試驗(yàn)中關(guān)鍵的一步，稍有不慎將導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)滿(mǎn)盤(pán)皆輸，如何安全，快捷的處理樣本，我們公司是這樣做的。1均質(zhì)組織樣本：肉、肝食品類(lèi)切細(xì)，用絞肉機(jī)反復(fù)絞碎，混合均勻。水產(chǎn)樣本：去除樣品的非食用部分，食用部分切細(xì)，用均質(zhì)器均漿；原料表面較臟時(shí),需適當(dāng)用蒸餾水清洗。蛋類(lèi)：鮮蛋去殼，蛋黃和蛋白充分混勻。水果、蔬菜類(lèi)：先用水洗去泥沙，然后除去表面的水分，取食用部分。2振蕩提取將提取溶劑加入到裝有樣品的具塞容器中，振蕩，ELISA試劑盒使提取溶劑與容器內(nèi)的樣品充分接觸以深入到樣本組
2016
01-13

樣品蛋白含量的測(cè)定
測(cè)定方法如下：一、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線1、從-20℃取出1mg/mlBSA，室溫融化后，備用。ELISA試劑盒2、取18個(gè)1.5ml離心管，3個(gè)一組，分別標(biāo)記為0μg，2.5μg，5.0μg，10.0μg，20.0μg，40.0μg。3、按下表在各管中加入各種試劑。4、混勻后，室溫放置2min。在生物分光光度計(jì)上比色分析。二、檢測(cè)樣品蛋白含量1、取足量的1.5ml離心管，每管加入4℃儲(chǔ)存的考馬斯亮藍(lán)溶液1ml。室溫放置30min后即可用于測(cè)蛋白。2、取一管考馬斯亮藍(lán)加0.15mol/LNaCl溶液100

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