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            上海一研生物科技有限公司
            
			
            
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				ARTICLE
					
            當前位置：上海一研生物科技有限公司>>技術文章展示
            
			
            
		
            
	
            
	
	
            
		
            
			
            
				
              
										
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              2015
              11-18
              
							
              
								
              骨髓細胞的培養(yǎng)
              
								骨髓作為主要的造血場所，可進行體外培養(yǎng)。在無菌條件下，把骨髓細胞分離出來，置于培養(yǎng)系統(tǒng)中，在合適的環(huán)境中，提供營養(yǎng)物質(zhì)，使其繼續(xù)生存或生長。通過培養(yǎng)骨髓，可見到造血干細胞不同分化階段時各種血細胞的前驅細胞。用通常的形態(tài)學方法不可能識別造血干細胞和各種血細胞的前驅細胞，但在加入各種造血因子的半固體培養(yǎng)基進行培養(yǎng)后，可出現(xiàn)單個前驅血細胞的增殖、分化，并形成細胞克隆。一、材料1．實驗動物小鼠(C57BL／6\B6D2Fl等)2只。2．培養(yǎng)液瓊脂(Difco)、a—MEM、FBS(用新生牛血清、人血清也 
							
              
						
              
					
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              2015
              11-16
              
							
              
								
              細胞介導細胞毒作用檢測法
              
								(一)原理以NK細胞為例。將待測者外周血中的NK細胞與靶細胞(K562細胞)按一定比例混合培養(yǎng)一定時間，NK細胞作用于靶細胞，使靶細胞被殺死、破壞，進而使靶細胞線粒體內(nèi)的乳酸脫氫酶釋放出來．使底物發(fā)生顏色變化，其顏色深淺與酶的釋放量成正比，檢測顯色后的光密度OD值，便可推算出NK細胞的殺傷活性。(二)材料1．待檢者肝素抗凝血，靶細胞為K562細胞。2．RPMI1640培養(yǎng)液、淋巴細胞分離液。3．酶標儀、離心機。(三)方法1．用含5％小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液將靶細胞調(diào)整到5×104～2×1 
							
              
						
              
					
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              2015
              11-13
              
							
              
								
              胰島素對細胞增殖影響的實驗
              
								胰島素對離體犢牛小腸上皮細胞增殖及吸收功能影響的實驗(一)試驗原理新生哺乳動物胃腸道的生長發(fā)育非常迅速，這與初乳的攝入有關，初乳中含大量多肽類生長因子如胰島素等。本實驗通過體外犢牛小腸上皮細胞培養(yǎng)法，用細胞增殖率和葡萄糖吸收率作為細胞生長發(fā)育及功能成熟的指標，探討胰島素或其他生長因子對細胞生長發(fā)育的影響，同時為新生胃腸道營養(yǎng)發(fā)育生理研究提供研究方法。(二)材料1．待檢藥物胰島素(o．01μg／ml、0．1μg／ml、1μg／ml、10μg／ml及50μg／m1)。2．動物出生1日齡以內(nèi)未吮乳的中 
							
              
						
              
					
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              2015
              11-11
              
							
              
								
              X-Gal和IPTG-X-gal 平板制作
              
								一、簡介X-Gal在β-半乳糖苷酶的催化下水解后呈藍色，因此常用于轉基因篩選試驗中，如藍白斑篩選或β-半乳糖苷酶的原位染色檢測實驗。藍白斑試驗中主要根據(jù)菌落呈現(xiàn)的顏色即可簡單的挑選出哪些是轉化子。分子式為C14H15BrClNO6，分子量為408.63，CASNumber7240-90-6。X–Gal是β–半乳糖苷酶(β–galactosidase)的底物，水解后呈藍色?；谶@個特點，pUC系列載體DNA(或其他帶有l(wèi)acZ基因載體DNA)以lacZ缺失細胞為宿主進行轉化時、或用M13噬菌體載體 
							
              
						
              
					
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              2015
              11-09
              
							
              
								
              細菌組成可能受到出生時刻的影響
              
								一項研究表明，已被證明能夠影響消化和免疫健康的個人*的細菌組成可能受到出生時刻的影響。ELISA試劑盒科學家對來自9位母親和10位出生后不足一天的新生兒進行了細菌取樣。這組科學家發(fā)現(xiàn)，陰道分娩的嬰兒獲得的細菌群落類似于他們的母親的陰道細菌組成，而通過剖宮產(chǎn)出生的嬰兒攜帶了常見的皮膚細菌，這些細菌并不比來自其他剖宮產(chǎn)嬰兒的細菌更加類似于他們的母親的細菌組成。通常與乳汁消化、細菌病或陰道感染有關的細菌占了來自陰道分娩的兒童的皮膚和嘴的樣本的大部分。剖宮產(chǎn)嬰兒的細菌群落大部分是由與食物中毒、白喉和痤瘡 
							
              
						
              
					
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              2015
              11-06
              
							
              
								
              免疫組化ABC法實驗步驟
              
								1、4%多聚甲醛常規(guī)灌注固定，取材并置20%蔗糖溶液（4℃），蠟塊制作，切片，貼片。0.01MPBS清洗5min×3次;抗體2、脫蠟、水化：用二甲苯兩次10min，用梯度乙醇由低濃度到高濃度進行水化;3、加入0.3%的過氧化氫甲醇溶液（甲醇80ml+0.01MPBS100ml+30%過氧化氫）30min，以消除內(nèi)源性過氧化物酶的影響，0.01MPBS清洗5min×3次;4、加入0.3%TritonX-100（0.3mlTritonX-100+0.01MPBS100ml）30min，以增加細胞的通 
							
              
						
              
					
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              2015
              11-04
              
							
              
								
              ELISA的應用與操作注意事項
              
								ELISA的應用ELISA法是免疫診斷中的一項新技術，現(xiàn)已成功地應用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定，根據(jù)已經(jīng)使用的結果，認為ELISA法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩(wěn)定及易于自動化操作等特點。不僅適用于臨床標本的檢查，而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標本,因此，也適合于血清流行病學調(diào)查。本法不僅可以用來測定抗體，而且也可用于測定體液中的循環(huán)抗原，所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫(yī)學各領域的 
							
              
						
              
					
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              2015
              11-02
              
							
              
								
              實驗前了解血清怎么儲存與操作
              
								血清是ELISA試劑盒實驗前的必要標本之一，所以我們在做實驗前需要對血清有個充分的了解，我們需要知道血清是怎么儲存的，血清是怎么操作的。1.血清必須貯存于–20～-70℃,若存放于4℃,請勿超過一個月。如果一次無法用完一瓶,可將40～45ml分裝于無菌50ml離心管中,由于血清結凍時體積會增加約10%,必須預留此膨脹體積之空間,否則易發(fā)生污染或容器凍裂之情形。2.一般提供之血清為無菌,不需再無菌過濾。若發(fā)現(xiàn)血清有許多懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾,勿直接過濾血清。3.瓶裝（500ml）血 
							
              
						
              
					
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              2015
              10-30
              
							
              
								
              細胞因子溶解操作方法
              
								peprotech細胞因子溶解操作方法PeproTech細胞因子中不含載體蛋白（CarrierProtein）或其他添加劑（如BSA、HAS或蔗糖等），并且通常以zui少量的鹽來進行凍干處理，因此微量的細胞因子在凍干過程中會沉積于管內(nèi)，形成很薄或不可見的蛋白層。所以我們建議在收到產(chǎn)品后，務必在開蓋前先離心，使粘在管蓋或管壁上的蛋白聚集于管底（此時能否見到白色沉淀均屬正?，F(xiàn)象）。1．離心：高速離心(10,000rpm)20-30秒，或低速離心(2,000rpm)5分鐘。2．溶解（Reconstit 
							
              
						
              
					
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              2015
              10-28
              
							
              
								
              原代培養(yǎng)物及傳代培養(yǎng)物之間的區(qū)別
              
								原代培養(yǎng)物及傳代培養(yǎng)物之間的區(qū)別細胞系與細胞株的比對條件。一般實驗者都知道傳代培養(yǎng)的細胞是細胞系；細胞株就是從細胞系篩選出來的有特殊屬性的比如無線增值的。細胞株(CellStrain)：通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標志物的培養(yǎng)物稱為細胞株(CellStrain)，也就是說，細胞株是用單細胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法，由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質(zhì)或標志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。原代培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后即為細胞系(cellline)，由原先存在于原代培養(yǎng) 
							
              
						
              
					
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              2015
              10-26
              
							
              
								
              ELISA試劑盒實驗測定標本分解
              
								（1）標本溶血由于各種人為原因引起的標本溶血，均可因紅細胞破壞溶解時釋放出大量具有過氧化物酶活性的血紅蛋白，在以辣根過氧化物酶為標記的ELISA測定中，會導致非特異性顯色，干擾測定結果。為克服上述干擾作用，標本采集時必須注意避免溶血。（2）標本受細菌污染因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶，因此，被細菌污染的標本同溶血標本一樣，亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測定結果。（3）標本保存不當在冰箱中保存過久的標本，血清中IgG可聚合成多聚體、AFP可形成二聚體，在間接法ELISA測定中會導致本底過深、甚至 
							
              
						
              
					
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              2015
              10-23
              
							
              
								
              小鼠胚胎干細胞融入視網(wǎng)膜
              
								在皮氏培養(yǎng)皿中培養(yǎng)小鼠胚胎干細胞所產(chǎn)生的感光細胞能與患有視網(wǎng)膜疾病的成年小鼠的視網(wǎng)膜相融合。這意味著，通過細胞療法來矯正因視網(wǎng)膜疾病或損傷造成的失明的研究又邁進了一步。在與年齡相關的黃斑退化和各種遺傳視網(wǎng)膜疾病中，視網(wǎng)膜的功能會因為一種被稱為“感光體”的感光細胞受損而喪失。先前研究發(fā)現(xiàn)，對于患有類似疾病的失明小鼠來說，可以通過從視力正常的年輕小鼠的視網(wǎng)膜中分離出未成熟的感光體并移植到失明小鼠視網(wǎng)膜中，從而改善其視力。RobinAli等人從胚胎干細胞中獲取并培養(yǎng)出未成熟的類似視桿細胞并進行了研究。 
							
              
						
              
					
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              2015
              10-21
              
							
              
								
              細胞傳代的方法
              
								多數(shù)細胞系和原代細胞都會以一種單層的形式生長（單層細胞）或者覆蓋在玻璃或經(jīng)處理的塑料物體表面。為了保持細胞的健康與活躍增殖，通常需要對細胞進行有規(guī)律的傳代。zui常見的傳代方法是使用蛋白酶如胰酶或膠原酶破壞細胞間以及細胞與培養(yǎng)介質(zhì)間的連接。當細胞被解離成單細胞懸液時，再將它們稀釋并分發(fā)至新的培養(yǎng)容器中。在那里，細胞可以重新貼壁生長和分裂，然后經(jīng)過一段時間培養(yǎng)，細胞又再一次長滿（接近匯合）。此時，細胞又需要進行傳代或用于下游實驗。注意：以下指南描述了典型單層細胞的常規(guī)傳代與維持的基本原則。為了得到 
							
              
						
              
					
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              2015
              10-19
              
							
              
								
              血小板分析的應用范圍及臨床意義
              
								血栓性疾病、出血性疾病、心血管疾病以及自身免疫性血小板減少癥等疾病的病理生理過程與血小板相關。血小板功能檢測包括黏附、聚集和活化功能試驗。使用流式細胞儀檢測全血中血小板表面相關標志物是一種新技術，它拓寬了血小板相關疾病的診斷與功能研究方法，豐富了血小板功能評估指標。一、流式細胞儀血小板分析應用范圍1.通過分析信號傳遞、細胞骨架結構、顆粒釋放、糖蛋白構形、膜磷脂、與抗凝因子的結合和微粒形成，分析血小板活化，血小板對刺激物的反應性。2.通過分析受激后表面結合蛋白觸發(fā)凝血鏈式反應和表面糖蛋白缺陷檢測， 
							
              
						
              
					
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              2015
              10-16
              
							
              
								
              常用的熒光色素
              
								熒光色素許多物質(zhì)都可產(chǎn)生熒光現(xiàn)象，但并非都可用作熒光色素。只有那些能產(chǎn)生明顯的熒光并能作為染料使用的有機化合物才能稱為免疫熒光色素或熒光染料。ELISA試劑盒常用的熒光色素有：1．異硫氰酸熒光素（fluoresceinisothiocyanate，F(xiàn)ITC）為黃色或橙黃色結晶粉末，易溶于水或酒精等溶劑。分子量為389.4，zui大吸收光波長為490495nm，zui大發(fā)射光波長520530nm，呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光，結構式如下：有兩種同分異結構，其中異構體Ⅰ型在效率、穩(wěn)定性、與蛋白質(zhì)結合能力等方 
							
              
						
              
					
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              2015
              10-14
              
							
              
								
              細胞傷口愈合實驗步驟
              
								實驗步驟1.細胞在含有10%FBS的DMEM培養(yǎng)基中生長。2.細胞以一定密度接種到24孔細胞培養(yǎng)板中，生長24小時后，單層細胞融合度應達到70-80%。3.不要更換培養(yǎng)基。用新的1ml槍頭輕輕的在單層培養(yǎng)細胞間劃痕，劃痕橫穿過孔，槍頭盡量與板孔的底部垂直，不要傾斜。這樣產(chǎn)生的gap的距離才與槍頭末端的外直徑相等。Gap的距離可以選用不同型號的槍頭調(diào)節(jié)。劃痕在同一方向成一條直線。4.在垂直與*條劃痕的方向制作另一條劃痕，每孔劃痕成十字交叉型。5.劃痕后，用培養(yǎng)基輕輕的清洗板孔2次，以去除脫落細胞。 
							
              
						
              
					
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              2015
              10-12
              
							
              
								
              RNA干擾實驗技術
              
								通過生化和遺傳學研究表明，RNA干擾包括起始階段和效應階段(inititationａndeffectorsteps)。在起始階段，加入的小分子RNA被切割為21-23核苷酸長的小分子干擾RNA片段(smallinterferingRNAs,siRNAs)。證據(jù)表明；一個稱為Dicer的酶是RNaseIII家族中特異識別雙鏈RNA的一員，它能以一種ATP依賴方式逐步切割由外源導入或者由轉基因，病毒感染等各種方式引入的雙鏈RNA，切割將RNA降解為19-21bp的雙鏈RNAs(siRNAs)，每個片 
							
              
						
              
					
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              2015
              10-09
              
							
              
								
              ELISA試劑盒應用定性夾心免疫檢測技術
              
								ELISA試劑盒應用定性夾心免疫檢測技術，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條，這些多肽是中國型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強的肽段，分別來自于該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。ELISA檢測試劑盒將樣品或標準品加入孔中并孵育，如果其中存在HEVIgM抗體，這些抗體就會與HEV的多肽抗原結合，并固定在上面，洗板除去其它非特異性抗體和樣品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP（辣根過氧化物酶）酶結合物，經(jīng)第二次孵育后，酶結合物就會與*次孵育結合上的HEVIgM抗體相結合，ELISA試劑 
							
              
						
              
					
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              2015
              10-07
              
							
              
								
              ELISA各個操作步驟的注意要點
              
								按試劑盒說明書的要求準備實驗中需用的試劑。ELISA中用的蒸餾水或去離子水，包括用于洗滌的，應為新鮮的和高質(zhì)量的。自配的緩沖液應用pH計測量較正。從冰箱中取出的試驗用試劑應待溫度與室溫平衡后使用。試劑盒中本次試驗不需用的部分應及時放回冰箱保存。ELISA試劑盒的配制：對于每種細胞因子應仔細閱讀說明書，注意每批的細節(jié)。在使用細胞因子前，瞬時離心試劑瓶，盡可能多地收回其中的細胞因子。根據(jù)每批說明書中的細節(jié)，將凍干的細胞因子復溶。一般待測抗原標準曲線的線性范圍的可通過將標準品做8次2倍系列稀釋從200 
							
              
						
              
					
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              2015
              09-30
              
							
              
								
              采血管中添加物的影響
              
								研究經(jīng)驗指出酶聯(lián)免疫試劑盒可以用來檢測血清樣本，看有還是沒有某個抗原或抗體，也可以看該抗原或抗體是多還是少，可以比較不同血清樣本之間該抗原/抗體的含量高低。如果該抗原是一個病原，或該抗體是一個對某病原具有特異性的抗體，則酶聯(lián)免疫試劑盒該抗原或該抗體的結果，可以用來幫助判斷，提供血清的個體，是否感染或曾經(jīng)感染過這個病原。采血管中添加物等影響。（1）標本溶血由于各種人為原因引起的標本溶血，均可因紅細胞破壞溶解時釋放出大量具有過氧化物酶活性的血紅蛋白，在以辣根過氧化物酶為標記的酶聯(lián)免疫試劑盒測定中，會 
							
              
						
              
					
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