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鹽溶液配制2018/09/19

AcO----partone---(AcO)2Ca1;1.5MAcOK1;2;3;4;5;6;7;8M(AcO)2Mg1MAcONa1;2;3;4MpHofAcK/NasolutionsAcONH41;2;3;4MCO3-K2CO31;2;3;4;5;6MKHCO31MNa2CO31;2MNaHCO31M(NH4)2CO31;2;3;4;5MBr-KBr1;2;3;4;4.5MNaBr1;2;3;4;5.5MCl-CaCl21;2;3;4;5MCoCl21;1.5MCsCl1;2;3;4;5;6

一種提高單克隆抗體產(chǎn)量的簡易方法2018/09/13

近年來單克隆抗體已廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)理論與臨床應(yīng)用研究［1］。如何制備質(zhì)量好產(chǎn)量高的單克隆抗體是當前各有關(guān)實驗室研究的重要問題，通常用于生產(chǎn)單克隆抗體的方法有兩種：①利用純系小鼠生產(chǎn)免疫腹水，該法的優(yōu)點是產(chǎn)量和效價高，但純化困難，價格昂貴，生產(chǎn)周期長；②雜交瘤細胞常規(guī)體外培養(yǎng)法，此法雖然產(chǎn)量不價低，但不含正常小鼠免疫球蛋白，較易純化且成本低，但此法若需大量生產(chǎn)則需特殊設(shè)備［2］。近有人報道用雜交瘤細胞培養(yǎng)也可提高單克隆抗體的產(chǎn)量且方法簡便［3］。經(jīng)我們對3株抗人衰變加速因子（Decay-Accele

單克隆抗體細胞融合2018/09/13

（一）融合劑細胞融合的方法有物理法，如電融合、激光融合，化學(xué)融合法和生物融合法，如仙臺病毒，此處例舉化學(xué)融合法中的一種即聚乙二醇融合法。聚乙二醇（PEG），在分子量為200～700時，呈無色、無臭的粘稠狀液體，分子量大于1000時，呈乳白色蠟狀固體，能溶于水、乙醇及其他許多有機溶劑，對熱穩(wěn)定，與許多化學(xué)藥品不起作用。用作細胞融合劑的聚乙二醇一般選用分子量為4000者，常用濃度為50％，pH8.0～pH8.2（用10％NaHCO3調(diào)整），分子量小的PEG，融合效應(yīng)差，又有毒性，分子量過大，則粘性太

細胞瞬時轉(zhuǎn)染2018/09/13

1.1細胞瞬時轉(zhuǎn)染原理：通過脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染法及電穿孔等基因轉(zhuǎn)染技術(shù)，將靶基因?qū)爰毎?，一般在轉(zhuǎn)染后48小時左右，靶基因即可在細胞內(nèi)表達。根據(jù)不同的實驗?zāi)康模?8小時后即可進行靶基因表達的檢測等實驗。應(yīng)用：觀察目的基因及其表達蛋白在某種細胞中的功能（短時間即可進行觀察，但效應(yīng)會很快丟失）一般流程：1）細胞接種：轉(zhuǎn)染實驗前天接種細胞，各種細胞的平板密度依據(jù)各種細胞的生長率和細胞形狀而定。進行轉(zhuǎn)染當天細胞密度應(yīng)達到60%~80%覆蓋2）細胞轉(zhuǎn)染（脂質(zhì)體、電穿孔、FuGENE6等）3）48小時以后鑒定目

免疫細胞化學(xué)與圖像分析2018/09/12

在細胞生物學(xué)中，一個常見的問題是如何獲取與細胞功能相關(guān)的各種定量測量信息。在免疫細胞化學(xué)中也存在同樣的問題。制作免疫細胞化學(xué)標本環(huán)節(jié)較多，只要有一個環(huán)節(jié)失誤就會影響實驗結(jié)果，除了需要精制的藥品外，還需要熟練的技術(shù)。那么，做成了理想的標本后，如何進行觀察，才能獲得盡量多的的各種定量信息，而且使這些信息能較客觀的反映出來，這就是本章的編寫目的。一、定量分析的重要性目前有許多研究免疫細胞化學(xué)的文章，是做定性和定位研究的。如有文獻中提到，P物質(zhì)在腦組織中存在于30處以上，這只是解決了定性定位問題，這些部

免疫沉淀2018/09/12

疫沉淀是利用特異性抗體識別并分離抗原的方法。材料：上樣buffer的配方(用前現(xiàn)配):2ul1.25MTris-HCL,pH6.835uldistilledwater2.5ul2-mercaptoethanol12.5ul10%SDS10ul80%glycerol2ulbromphenolblueTNEbuffer:10mMTris-HClpH8.010mMNaCl0.5mMEDTA方法：1．用含有1%NP40的緩沖液重懸細胞，充分振蕩。2．在冰上孵育30分鐘或37℃孵育10—15分鐘3．轉(zhuǎn)入e

蛋白定量技術(shù)2018/09/11

（一）雙縮脲測定法1．原理蛋白質(zhì)中的肽鍵有雙縮脲反應(yīng)，在堿性溶液中與二價銅離子形成藍紫色的絡(luò)合物，在一定的范圍內(nèi)，顏色的深淺與蛋白質(zhì)的含量成正比。此法特異性強，游離的氨基酸、小肽和核酸均不產(chǎn)生這種反應(yīng)，但此法不夠敏感，僅能測出毫克水平。2．試劑配制硫酸銅（CuSO4·5H2O）1.50g酒石酸鉀鈉5.00gH2O500.0ml10％氫氧化鈉（不含硫酸鈉）300mlH2O加至1000ml此溶液可長期保存，如產(chǎn)生暗紅色沉淀，則應(yīng)廢棄重配。3．標準曲線的制備⑴準確稱取牛血清白蛋白1.0g（必要時須首先

七葉皂苷D產(chǎn)品分析證書2018/09/10

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厭氧菌的培養(yǎng)2018/09/07

厭氧菌在有氧的情況下不能生長。要培養(yǎng)厭氧菌，必須創(chuàng)造一個無氧的環(huán)境。通常用培養(yǎng)基中加入還原劑，或用物理、化學(xué)方法去除環(huán)境中的游離氧，以降低氧化還原電勢。如皰肉培養(yǎng)基、硫基乙酸鈉培養(yǎng)基，牛心腦浸液培養(yǎng)基等。常用的厭氧培養(yǎng)方法有許多，可根據(jù)實際情況選用。1．厭氧缸法接種好標本的平板或液體培養(yǎng)基試管，可放入?yún)捬醺變?nèi)培養(yǎng)，厭氧缸是普通的干燥缸，用物理化學(xué)的方法使缸內(nèi)造成厭氧環(huán)境，從而將厭氧菌培養(yǎng)出來。2．厭氧袋（Bio-bag）即在塑料袋內(nèi)造成厭氧環(huán)境來培養(yǎng)厭氧菌。塑料袋透明而不透氣，內(nèi)裝氣體發(fā)生管（有

純干貨：IHC，WB 常見問題與結(jié)果解析2018/09/06

免疫組化結(jié)果常見問題分析(一)結(jié)果陰性的原因1.抗體濃度和質(zhì)量問題以及抗體來源選擇錯誤；2.抗原修復(fù)不全，換修復(fù)液或加強修復(fù)；3.組織切片本身這種抗原含量低，設(shè)陽性對照片；4.血清封閉時間過長；DAB孵育時間過短；6.細胞通透不全，抗體未能充分進入胞內(nèi)參與反應(yīng)。(二)非特異性染色的原因（著色一片黃/背景深）1.抗體孵育時間過長，抗體濃度；2.多抗易出現(xiàn)非特異性，可選擇單抗；3.內(nèi)源性過氧化物酶和生物素滅活不夠；4.非特異性組分與抗體結(jié)合，延長血清封閉時間；5.DAB孵育時間過長或濃度過高；6.P

腺相關(guān)病毒（AAV）在動物實驗中的應(yīng)用2018/09/03

腺相關(guān)病毒屬于微小病毒科(parvovirus)，為無包膜的單鏈線狀DNA病毒，基因組大小約4.7kb。利用腺相關(guān)病毒可以將外源基因轉(zhuǎn)入動物組織和細胞中，具有安全性高、免疫原性低、宿主范圍廣、表達穩(wěn)定等多種優(yōu)點，廣泛應(yīng)用于動物體內(nèi)研究。腺相關(guān)病毒血清型眾多（12種），不同血清型對不同組織親和性不同，因此在具體科學(xué)研究中，以下問題往往困擾著廣大科研工作者：選擇何種血清型？如何注射？注射多少病毒？注射部位如何選擇？注射多久檢測？本文就常見的注射部位（大腦、視網(wǎng)膜、肝臟、心臟和動脈、肺臟、腎臟、肌肉、

PCR污染與對策2018/08/30

PCR反應(yīng)的大特點是具有較大擴增能力與*的靈敏性，但令人頭痛的問題是易污染，極其微量的污染即可造成假陽性的產(chǎn)生.污染原因(一)標本間交叉污染:標本污染主要有收集標本的容器被污染，或標本放置時，由于密封不嚴溢于容器外，或容器外粘有標本而造成相互間交叉污染;標本核酸模板在提取過程中，由于吸樣槍污染導(dǎo)致標本間污染;有些微生物標本尤其是病毒可隨氣溶膠或形成氣溶膠而擴散，導(dǎo)致彼此間的污染.(二)PCR試劑的污染:主要是由于在PCR試劑配制過程中，由于加樣槍、容器、雙蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染.(三

膜蛋白研究的整體解決方案2018/08/30

提起膜蛋白，浮現(xiàn)在廣大從事蛋白研究的科研工作者腦海中的是兩點：1.膜蛋白功能的重要性。2.膜蛋白研究的困難性。*，膜蛋白在細胞間接觸、表面識別、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、酶活性和運輸方面都扮演著重要的角色。由于它們功能多樣，也就成為理想的藥物靶點。然而，膜蛋白的生化和結(jié)構(gòu)研究一直都很緩慢。ProteinDatabase的統(tǒng)計數(shù)據(jù)表明，在成功解析出三維結(jié)構(gòu)的蛋白中，膜蛋白只占1%，這與膜蛋白占總蛋白的1/3的總量的差別巨大。由此也可以看出膜蛋白研究確實困難重重。圖1.利用QIAgenes優(yōu)化序列，昆蟲細胞體外進行

小鼠尿微量白蛋白（ALB）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）2018/08/28

小鼠尿微量白蛋白(ALB）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用目的：本試劑盒用于測定小鼠血清，血漿,相關(guān)液體樣本尿微量白蛋白(ALB）含量。實驗原理：本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中小鼠尿微量蛋白(ALB)水平。用純化的小鼠尿微量蛋白(ALB)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入尿微量蛋白(ALB)，再與HRP標記的ALB抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終

SDS-PAGE測定蛋白質(zhì)分子量及蛋白質(zhì)的純度鑒定2018/08/28

一、實驗?zāi)康呐c原理蛋白質(zhì)在聚丙烯酰胺凝膠中電泳時，它的遷移取決于它所帶電荷以及分子大小和形狀等因素。1967年Shapiro等人發(fā)現(xiàn)，如果在聚丙烯酰胺系統(tǒng)中加入陰離子去污劑十二烷基磺酸鈉（SDS），大多數(shù)蛋白質(zhì)能與SDS按一定比例結(jié)合，即每克蛋白質(zhì)結(jié)合1.4g的SDS－復(fù)合物都帶上相同密度的負電荷，它的量大大超過了蛋白質(zhì)分子原有的電荷量，因而消除了蛋白質(zhì)原有的電荷差別，使蛋白質(zhì)分子電泳的遷移率主要取決于本身的分子量，而與蛋白質(zhì)所帶的電荷無關(guān)，在一定條件下，蛋白質(zhì)的分子量的對數(shù)與電泳遷移率間呈負相

凝膠層析法脫鹽和分離蛋白質(zhì)2018/08/27

（一）原理凡鹽析所獲得的粗制蛋白質(zhì)（鹽析得到的IgG）中均含有硫酸銨等鹽類，這類將影響以后的純化，所以純化前均應(yīng)除去，此過程稱為“脫鹽”（desalthing）。脫鹽常用透析法和凝膠過濾法，這兩種方法各有利弊。前者的優(yōu)點是透析后析品終體積較小，但所需時間較長，且鹽不易除盡；凝膠過濾法則能將鹽除盡，所需時間也短，但其凝膠過濾后樣品體積較大。所以，要根據(jù)具體情況選擇使用。前實驗中樣品體積較小，凝膠達濾后樣品體積不會太增加，所以選用凝膠過濾法。（二）試劑與器材（1）SephadexG-25。（2）0.

大鼠表皮生長因子（EGF）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）2018/08/24

大鼠表皮生長因子(EGF)酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用目的：本試劑盒用于測定大鼠血清，血漿及相關(guān)液體樣本中表皮生長因子(EGF)的含量。實驗原理：本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中大鼠表皮生長因子(EGF)水平。用純化的大鼠表皮生長因子(EGF)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入表皮生長因子(EGF)再與HRP標記抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終

雜交瘤細胞和重組抗體2018/08/24

概述在過去的二十五年里,利用雜交瘤細胞生產(chǎn)了成千上萬的鼠單克隆抗體.人們用同樣的技術(shù)從轉(zhuǎn)基因鼠中克隆人類的抗體,并設(shè)計了全長型抗體和重組片段,它們可以被用于多種診斷和治療.而且如果他們能在哺乳動物細胞,牛奶及植物中表達,就可以大量獲得.一個世紀以前,PaulEhrlich提出了的側(cè)鏈理論來解釋抗原抗體的相互作用.他不久又鑄造了一個虛構(gòu)的短語"魔彈"來形容抗體對準及中和抗原.七十五年以后GeorgesKhlerａndCésarMilstein發(fā)明了單克隆抗體技術(shù),因此為細胞生物學(xué)和臨床診斷學(xué)的巨大

狂犬病病毒實時熒光RT-PCR檢測試劑盒說明書2018/08/24

狂犬病病毒實時熒光RT-PCR檢測試劑盒說明書如需更詳細說明書，請聯(lián)系雅吉生物用途本試劑盒采用實時熒光RT-PCR方法用于動物狂犬病疑似腦組織、唾液樣品中狂犬病病毒RNA的檢測。原理利用離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜提取樣品總RNA，在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下，以RNA為模板，以引物為起點合成與RNA模板互補的cDNA鏈。在熱啟動Taq酶的作用下，經(jīng)高溫變性、中溫退火及延伸的循環(huán)，使特異DNA片段的拷貝數(shù)放大一倍，經(jīng)熒光素標記的探針與擴增的DNA雜交，利用Taq聚合酶的5'→3'外切活性，使熒光探針的報告基團與淬滅基

非洲豬瘟病毒PCR檢測試劑盒2018/08/24

非洲豬瘟病毒PCR檢測試劑盒如需更詳細說明書請聯(lián)系我公司AfricanSwineFeverVirusPCRKit使用手冊V1.2產(chǎn)品及特點非洲豬瘟(Africanswinefever,ASF)是由非洲豬瘟病毒(Africanswinefevervirus,ASFV)引起豬的一種急性、熱性、高度接觸傳染性疾病，病死率高達100%,是我國一類動物疫病和世界動物衛(wèi)生組織規(guī)定的必須報告的動物疫病，受到世界各國的高度重視。因此ASFV的快速準確鑒定，對該病的預(yù)防和檢疫有著重要作用。目前，對于中國這種非AS