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石蠟切片免疫組化實驗步驟2018/07/13

石蠟切片免疫組化實驗步驟1.石蠟切片置于67℃烘箱中，烘片2小時，脫蠟至水，用pH7.4的PBS沖洗三次，每次3分鐘（3×3’）。2.取一定量pH=6.0檸檬酸鹽緩沖液，加入微波盒中，微波加熱至沸騰，將脫蠟水化后的組織切片置于耐高溫塑料切片架上，放入已沸騰的緩沖液中，中檔微波處理10分鐘，取出微波盒流水自然泠卻，從緩沖液中取出玻片，先用蒸餾水沖洗兩次，之后用PBS沖洗2×3’。（注：不是所有的抗體都需要微波修復(fù)的，視具體情況而定）3.每張切片加1滴3%H2O2，室溫下孵育10分鐘，以阻斷內(nèi)源性過

間接ELISA中試劑的配制及反應(yīng)流程2018/07/13

實驗試劑1.包被緩沖液：(0.05mol/L，pH9.6的碳酸鹽緩沖液)Na2CO31.59gNaHCO32.93g蒸餾水1000ml4℃保存，一周內(nèi)用完。2.磷酸鹽緩沖液(PBS，PH7.4)NaCl8.0gKH2PO40.2gKCl0.2gNa2HPO4.12H2O3.65g蒸餾水1000ml3.洗滌液(0.01mol/L，pH7.4的PBST)1LPBS中加入0.5mlTween-204.封閉液(5%脫脂奶粉)5g脫脂奶粉加入100mlPBS緩沖液中。5.一抗及二抗稀釋液(2%脫脂奶粉)2

細(xì)菌總蛋白和膜蛋白提取方法2018/07/13

實驗試劑裂解液（pH8.5-9.0）：50mMTris-HCl，2mMEDTA,100mMNaCl，0.5%TritonX-100，調(diào)pH值至8.5-9.0備用；溶菌酶；蛋白酶抑制劑PMSF；1%SDS溶液；Trizol裂解液；無水乙醇；異丙醇；0.3M鹽酸胍；疏水性蛋白提取液（非裂解液）：1%TritonX-114，150mMNaCl,10mMTris-HCl，1mMEDTA，調(diào)pH值至8.0備用。實驗設(shè)備高速離心機；超聲儀；透析袋；EP管；渦旋儀；水浴鍋等。實驗步驟1.從新鮮樣品中提取總蛋白

已凍存細(xì)胞的傳代培養(yǎng)2018/07/13

實驗試劑細(xì)胞培養(yǎng)液成分為RPMI1640基本培養(yǎng)液10%胎牛血清1%三抗，PBS，凍存培養(yǎng)液(含10%DMSO或甘油)，Trypsine-EDTA消化液，液氮實驗設(shè)備水浴鍋，35mm培養(yǎng)皿，37℃培養(yǎng)箱，無菌凍存管，低溫冰箱，超低溫冰箱實驗材料已凍存的HEK293和HeLa細(xì)胞實驗步驟1.細(xì)胞的復(fù)蘇1)保存細(xì)胞的冷凍管直接投入37℃溫水，不時搖動令其盡快融化，解凍1分鐘；2)取出冷凍管，用酒精消毒后打開管蓋，吸出細(xì)胞懸液，注入離心管并滴加10倍以上培養(yǎng)液，混合后低速離心，除去上清液，再用培養(yǎng)液重

細(xì)胞培養(yǎng)之問題解答2018/07/12

1、冷凍管應(yīng)如何解凍？取出冷凍管后，須立即放入37℃水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化，并注意水面不可超過冷凍管蓋沿，否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時，必須注意安全，預(yù)防冷凍管之爆裂。2、細(xì)胞冷凍管解凍培養(yǎng)時，是否應(yīng)馬上去除DMSO？除少數(shù)特別注明對DMSO敏感之細(xì)胞外，絕大部分細(xì)胞株（包括懸浮性細(xì)胞），在解凍之后，應(yīng)直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中，待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解凍后細(xì)胞無法生長或貼附之問題。3、可否使

細(xì)胞化學(xué)染色方法2018/07/12

實驗原理1.細(xì)胞經(jīng)甲基綠一呱咯寧混合液處理后，其中的DNA和RNA出現(xiàn)不同的呈色反應(yīng)，一般認(rèn)為這是由于帶有負(fù)電荷的核酸對堿性染料呱咯寧和甲基綠具有親和力，且這兩種染料的作用有選擇性，甲基綠染高聚分子的DNA呈藍(lán)綠色，呱咯寧染低聚分子的RNA呈紅色。由此對細(xì)胞中的DNA和RNA進(jìn)行定位、定性、和定量分析。2.由于不同的蛋白質(zhì)分子所帶的堿性和酸性基團(tuán)的數(shù)目不同，在pH值不同的溶液中，蛋白質(zhì)分子所帶的凈電荷多少不同。如在生理條件下，整個蛋白質(zhì)所帶負(fù)電荷多，則為酸性蛋白質(zhì)；帶正電荷多，則為堿性蛋白質(zhì)。據(jù)

總蛋白和膜蛋白提取方法2018/07/12

膜蛋白具有多種功能，在細(xì)胞識別、細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、運輸?shù)扔兄兄匾慕巧?，因此也是的藥物靶點。抽提膜蛋白主要是進(jìn)行蛋白組分析：常用的實驗是非變性膠電泳、酶活分析、SDS-PAGE、westernblot等。本文敘述了總蛋白的抽提方法、和膜蛋白的提取方法。一、從新鮮樣品中提取總蛋白(簡易法)1.自配裂解液(pH8.5-9.0)：50mMTris-HCl，2mMEDTA,100mMNaCl，0.5%TritonX-100，調(diào)pH值至8.5-9.0備用;用前加入100μg/ml溶菌酶，1μl/ml的蛋白

抗體標(biāo)記與檢測指南2018/07/11

科技文獻(xiàn)中有很多抗體標(biāo)記方法指南，我們往往難以選擇方法。本指南可以幫助您更好的理解標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)標(biāo)記方法及它們的優(yōu)缺點，同時還介紹了Lightning-Link一步法抗體標(biāo)記技術(shù)。該技術(shù)極大簡化了抗體標(biāo)記步驟，利用該技術(shù)標(biāo)記抗體不需要您具備太多化學(xué)方面的知識，并且手頭操作時間僅需短短的30秒！抗體與標(biāo)記物在多種免疫實驗（流式細(xì)胞術(shù),ELISA,westernblotting,免疫組化等）中，抗體被廣泛應(yīng)用于檢測和定量抗原。直接識別抗原的抗體被稱為一抗（primaryantibody），賦予檢測的特異性

預(yù)防細(xì)胞污染及污染后對策2018/07/11

污染向來是在細(xì)胞培養(yǎng)中的大問題。預(yù)防或治理污染是細(xì)胞培養(yǎng)成功的關(guān)鍵因素。我們在細(xì)胞培養(yǎng)時，在開始階段就要十分重視污染問題，否則會前功盡棄，這樣不僅浪費時間，也會浪費人力、物力。(一)有哪幾類污染？在細(xì)胞培養(yǎng)過程中的污染不只是指微生物，而且還包括所有混入培養(yǎng)環(huán)境中的、對細(xì)胞生存有害或造成細(xì)胞不純的物質(zhì)，包括生物和化學(xué)物質(zhì)。1、細(xì)菌污染細(xì)菌污染是實驗室細(xì)胞培養(yǎng)中常見的污染，即使在細(xì)胞培養(yǎng)液中加入了抗菌素，也可能因為操作不慎而引起污染。常見的有革蘭氏陽性菌，如枯草桿菌以及大腸桿菌、假單胞菌等革蘭氏陰性

抗體的使用和保存方法2018/07/11

抗體，無論是保存還是運輸，都要避免反復(fù)凍融。反復(fù)凍融，冰晶會破壞抗體的空間結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致蛋白變性形成多聚體，從而降低抗體的結(jié)合能力，也加快了抗體球蛋白的降解速度?？贵w保存得當(dāng)與否，直接決定了抗體的活性和使用效果，如果抗體保存得當(dāng)，Bioss的抗體活性大部分都可以維持?jǐn)?shù)年。下面就給大家講解下，Bioss抗體的使用和保存方法：一、收到抗體后的操作收到Bioss抗體后（大部分抗體是溶液態(tài)），請務(wù)必在4℃，12000rpm，離心3分鐘，再打開管蓋進(jìn)行分裝、溶解和保存（如果抗體體積小于50ul，請延長離心時間

不看此文，別貿(mào)然開始ELISA實驗2018/07/10

酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）可以：（1）免疫酶染色各種細(xì)胞內(nèi)成份的定位；（2）研究抗酶抗體的合成；（3）顯現(xiàn)微量的免疫沉淀反應(yīng)；（4）定量檢測體液中抗原或抗體成份。實驗原理雙抗體夾心法（常用于測定抗原）用特異性抗體包被于固相載體，經(jīng)洗滌后加入含有抗原之待測樣品，如待檢樣品中有相應(yīng)抗原存在，即可與包被于固相載體上的特異性抗體結(jié)合，經(jīng)保溫孵育洗滌后，即可加入酶標(biāo)記特異性抗體，再經(jīng)孵育洗滌后，加底物顯色進(jìn)行測定，底物降解的量即為欲測抗原的量。實驗步驟一、材料準(zhǔn)備1.實驗材料：血清、血漿、體液2.實驗儀器

實時熒光定量PCR（realtime PCR）2018/07/09

所謂實時熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實驗材料細(xì)胞樣品試劑、試劑盒RNA提取試劑盒熒光定量PCRMixTRIZOLdNTP逆轉(zhuǎn)錄酶MMLV異丙醇Taq酶DEPC水ddH2OTEMgCl2瓊脂糖溴化乙錠MOPS甲醛乙酸鈉EDTAEB溴酚蘭儀器、耗材離心管離心機風(fēng)光光度計電泳槽凝膠板RealtimePCR儀實驗步驟一、樣品RNA的抽提1.取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。2.兩相

凝膠遷移實驗（EMSA）2018/07/09

實驗方法原理凝膠遷移或電泳遷移率實驗（EMSA-electrophoreticmobilityshiftassay）是一種研究DNA結(jié)合蛋白和其相關(guān)的DNA結(jié)合序列相互作用的技術(shù)，可用于定性和定量分析。這一技術(shù)初用于研究DNA結(jié)合蛋白，目前已用于研究RNA結(jié)合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常將純化的蛋白和細(xì)胞粗提液和32P同位素標(biāo)記的DNA或RNA探針一同保溫，在非變性的聚丙烯凝膠電泳上，分離復(fù)合物和非結(jié)合的探針。DNA-復(fù)合物或RNA-復(fù)合物比非結(jié)合的探針移動得慢。同位素標(biāo)記的探針依研究

小鼠成纖維細(xì)胞2018/07/07

培養(yǎng)操作及注意事項說明一．產(chǎn)品簡介1、細(xì)胞名稱：L929；小鼠成纖維細(xì)胞2、生長特性：□貼壁□懸浮□半懸浮半貼壁3、細(xì)胞生長條件：培養(yǎng)條件90%MEM+10%FBS+1%P/S溫度37℃空氣條件5%CO2,95%AIR傳代方法1:2傳代，2~3天換液凍存條件90%FBS+10%DMSO二．使用方法1、您收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作：取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)，然后換用新鮮*培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進(jìn)行傳代。

免疫熒光標(biāo)記實驗流程（IF）2018/07/02

免疫熒光標(biāo)記實驗流程（IF）免疫熒光單標(biāo)記方法免疫熒光單標(biāo)記是指只標(biāo)記一種蛋白質(zhì)分子，方法比較簡單，只要按照染色步驟去做，通常不存在太多的問題。但要注意固定液的選擇，固定液選擇的合適與否，可能會直接影響染色結(jié)果。具體染色方法如下。免疫熒光標(biāo)記實驗流程（IF）1、所需材料與試劑a,培養(yǎng)在蓋玻片或玻璃培養(yǎng)皿中融合程度達(dá)到60%-70%的細(xì)胞。b,一抗、FITC或TRITC標(biāo)記的二抗。c,4%多聚甲醛固定液或冷丙酮固定液(-20℃預(yù)冷20min)。d,封閉液。e,0.01mol／LPBS緩沖液。2、染

人淋巴瘤細(xì)胞，U-9372018/06/05

一．產(chǎn)品簡介1、細(xì)胞名稱：U-937;人淋巴瘤細(xì)胞2、生長特性：□貼壁□懸浮□半懸浮半貼壁3、細(xì)胞生長條件：培養(yǎng)條件90%1640+10%FBS+1%雙抗溫度37℃空氣條件5%CO2，,95%AIR傳代方法1:2傳代，2~3天換液凍存條件90%FBS+10%DMSO二．使用方法1、您收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作：取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置2-3小時以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)，然后離心換用新鮮*培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進(jìn)行傳代。2、細(xì)胞傳代：待細(xì)胞達(dá)

DNA Marker的選購與問題解答2018/05/16

一、novoproteinDNAMarker特點：每個條帶均為單獨定量制備可以用于DNA段大小和濃度的判斷帶型清晰明亮、條帶大小準(zhǔn)確，覆蓋范圍廣（100bp-10kb）明暗條帶優(yōu)化比例，條帶更美觀內(nèi)含上樣緩沖液和指示染料可直接上樣、快捷方便添加了特定穩(wěn)定劑，穩(wěn)定性高，于-20℃可保存兩年以上適用于TAE和TBE緩沖體系可以任選條帶定制DIYDNAMarker價格優(yōu)勢明顯二、如何選擇novoproteinDNAMarker如圖為novoprotein在售的18種DNAMarker，可以根據(jù)您的目的

*Z易懂的流式細(xì)胞實驗設(shè)計指南2018/05/08

流式細(xì)胞術(shù)是非常讓人著迷的實驗。在眾多醫(yī)學(xué)研究手段里，如果說弱水三千只取一瓢的話，那我會選流式細(xì)胞術(shù)。從我個人感受來講，流式細(xì)胞術(shù)高速客觀，具有統(tǒng)計學(xué)意義，能夠處理復(fù)雜樣本并同時獲取多種參數(shù)，zuizui關(guān)鍵的是它性能可靠，可重復(fù)性非常好。雖然也存在一些局限，但流式細(xì)胞術(shù)比起傳統(tǒng)的細(xì)胞生物學(xué)研究手段來講*可以獲得「獨孤求敗」的桂冠了；如果算上共聚焦和膜片鉗，當(dāng)真可以算拉動現(xiàn)代細(xì)胞生物學(xué)的「三駕馬車」了。雖然介紹流式細(xì)胞術(shù)的入門文章很多，很多同學(xué)也對流式細(xì)胞術(shù)耳濡目染已久，看師兄師姐做過無數(shù)，可真

即用型免疫組化試劑盒操作步驟2018/05/07

即用型免疫組化試劑盒操作步驟如下，歡迎新老客戶我公司SP免疫組化檢測試劑盒(兔)即用型SP(Streptavidin-Peroxidase)免疫組化檢測試劑盒是利用LAB-SA第二代技術(shù)生產(chǎn)的免疫組化檢測試劑，zui大特點是高靈敏度，低倍景染色，直接滴加，操作方便，孵育時間短，適用于冷凍切片、石蠟切片及固定的細(xì)胞涂片?？捎糜跈z測兔來源的一抗SP試劑盒內(nèi)容：無色試劑：內(nèi)源性過氧化物酶阻斷劑試劑A：封閉用正常山羊血清工作液試劑B：生物素標(biāo)記二抗工作液：生物素標(biāo)記羊抗兔IgG試劑C：辣根酶標(biāo)記鏈酶卵白

蛋白質(zhì)免疫印跡（Western Blot，WB ）2018/04/24

實驗材料蛋白質(zhì)樣品試劑、試劑盒裂解液PBSG250考馬斯亮藍(lán)溶液NaClSDS上樣緩沖液電泳緩沖液轉(zhuǎn)移緩沖液麗春紅染液封閉液TBSTTBS洗脫抗體緩沖液顯影液定影液抗體化學(xué)發(fā)光試劑儀器、耗材高壓鍋玻璃勻漿器高速離心機分光光度儀-20℃低溫冰箱垂直板電泳轉(zhuǎn)移裝置恒溫水浴搖床多用脫色搖床實驗步驟一、操作步驟：1.蛋白樣品制備（1）單層貼壁細(xì)胞總蛋白的提?。孩俚沟襞囵B(yǎng)液，并將瓶倒扣在吸水紙上使吸水紙吸干培養(yǎng)液（或?qū)⑵恐绷⒎胖靡粫菏箽堄嗯囵B(yǎng)液流到瓶底然后再用移液器將其吸走）。②每瓶細(xì)胞加3ml4℃預(yù)冷