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						上海雅吉生物科技有限公司
            初級會員 | 第8年
            
					
            
				
            
			
            
		
            
	
            
	
	
            
		
            
			
		
            
	
            

            

	
            
		
            
			
			
            
							
            
					
            CHO細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)與酵母細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)比較2018/08/02
            
					
            
				CHO細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)與畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)是當(dāng)前發(fā)展前景看好的兩個表達(dá)系統(tǒng)，為了能夠更加直觀地對兩個表達(dá)系統(tǒng)有一定的認(rèn)識，特意在此篇中對兩個表達(dá)系統(tǒng)作一定的比較，從而能夠更進(jìn)一步的對兩個表達(dá)系統(tǒng)有更深的了解1．CHO細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)（1）優(yōu)點CHO細(xì)胞屬于成纖維細(xì)胞，既可以貼壁生長。也可以懸浮生長。目前常用的CHO細(xì)胞包括原始CHO和二氫葉酸還原酶雙倍體基因缺失型(DHFR-)突變株CHO。近年來，為降低生產(chǎn)成本和減少血制品帶來的潛在危害性，動物細(xì)胞生產(chǎn)開始使用無血清培養(yǎng)基(SFM)，但SFM往往導(dǎo)致細(xì)胞
					
            
				
            
								
            
					
            腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)2018/08/02
            
					
            
				腫瘤細(xì)胞在組織培養(yǎng)中占有核心的位置，首先癌細(xì)胞是比較容易培養(yǎng)的細(xì)胞。當(dāng)前建立的細(xì)胞系中癌細(xì)胞系是多的。另外腫瘤對人類是威脅大的疾病。腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)是研究癌變機理、抗癌藥檢測、癌分子生物學(xué)極其重要的手段。腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)對闡明和解決癌癥將起著不可估量的作用。一、組織培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞生物學(xué)特性腫瘤細(xì)胞與體內(nèi)正常細(xì)胞相比，不論在體內(nèi)或在體外，在形態(tài)、生長增值、遺傳性狀等方面都有顯著的不同。生長在體內(nèi)的腫瘤細(xì)胞和在體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞，其差異較小，但也并非*相同。培養(yǎng)中的腫瘤細(xì)胞具以下突出特點：（－）形態(tài)和性狀培養(yǎng)
					
            
				
            
								
            
					
            細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)2018/07/30
            
					
            
				一.細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理細(xì)胞培養(yǎng)是用酶消化法將組織碎塊分離成單個細(xì)胞，用培養(yǎng)基制成細(xì)胞懸液，在體外適宜條件下，使細(xì)胞生長繁殖，并保留其一定的結(jié)構(gòu)和功能特性。細(xì)胞培養(yǎng)與組織培養(yǎng)、器官培養(yǎng)主要不同點在于原始培養(yǎng)的對象不同。細(xì)胞培養(yǎng)使用的是單個細(xì)胞懸液，組織培養(yǎng)使用的是組織塊(0．5～1立方毫米)或薄片(厚0．2毫米)，而器官培養(yǎng)使用的是器官原基或器官的一部分或整個器官。在組織培養(yǎng)中，細(xì)胞自組織塊周圍移出并生長，細(xì)胞在生長過程中總有移動(運動)或其它變動，這樣就使被培養(yǎng)的組織難以長期維持其原有的結(jié)構(gòu)和功
					
            
				
            
								
            
					
            CHO細(xì)胞的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染與基因表達(dá)2018/07/30
            
					
            
				1、pcDNA3.1＋-gD的線性化:pcDNA3.1＋使用說明書推薦了以下幾個酶作為線性化酶(BglⅡMfeⅡBst1107ⅠEam1105ⅠPvuⅠScaⅠSspⅠ),通過DNAMAN分析gD序列發(fā)現(xiàn)其帶有MfeⅡ酶切位點。2、轉(zhuǎn)染前一天,在60mm的dish中接種8×105個細(xì)胞,加入5ml培養(yǎng)基(含血清,不含抗生素),37℃,5%CO2培養(yǎng),至轉(zhuǎn)染時要求細(xì)胞40%-80%匯合。3、通過分光光度計測定pcDNA3.1＋-gD的濃度,用不含血清、抗生素、蛋白質(zhì)的培養(yǎng)基稀釋2.5ug的pcDN
					
            
				
            
								
            
					
            人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）培養(yǎng)2018/07/30
            
					
            
				人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）培養(yǎng)1).將15-20cm長的新生兒臍帶放入無菌的PBS溶液中儲存。（注：4℃下多貯存24小時，室溫下不超過6小時，否則廢棄）2).用一個鈍頭的針頭扎入臍帶靜脈管中，用無菌的PBS溶液沖洗3-5次，將污血沖洗干凈為止。3).用手術(shù)鉗夾緊臍帶下端，加入15ml的膠原酶（1mg/ml）室溫下消化15-20分鐘，并不時上下?lián)u動臍帶。4).消化完后，將下端手術(shù)鉗松開，消化液流入一個50ml無菌離心管中，用無菌的PBS溶液沖洗臍帶2-3次。5).將收集液離心（2000轉(zhuǎn)/分）
					
            
				
            
								
            
					
            細(xì)胞培養(yǎng)用液的配制與消毒2018/07/30
            
					
            
				器材與試劑：干粉型培養(yǎng)基、胰蛋白酶，青霉素、鏈霉素.純凈水系統(tǒng)、電子天平、PH計、磁力攪拌器。具體步驟：一.水的制備：細(xì)胞培養(yǎng)用水必須非常純凈，不含有離子和其他的雜質(zhì)。需要用新鮮的雙蒸水、三蒸水或純凈水。二.PBS的制備與消毒(也可用于其它BSS，如：Hanks，D-Hanks液的配制)：1.溶解定容：將藥品（NaCl8.0g，KCl0.2g，Na2HPO4·H2O1.56g，KH2PO40.2g）倒入盛有雙蒸水的燒杯中，玻璃棒攪動，充分溶解，然后把溶液倒入容量瓶中準(zhǔn)確定容至1000ml，搖勻即
					
            
				
            
								
            
					
            銅離子轉(zhuǎn)運蛋白1抗體說明書2018/07/24
            
					
            
				產(chǎn)品編號bs-10773R英文名稱CTR1中文名稱銅離子轉(zhuǎn)運蛋白1抗體別名Coppertransport1homolog;Coppertransporter1;COPT1;COPT1_HUMAN;CTR1;hCTR1;Highaffinitycopperuptakeprotein1;SLC31A1;solutecarrierfamily31(coppertansporters)member1;Solutecarrierfamily31member1.規(guī)格價格100ul200ul研究領(lǐng)域神經(jīng)生物學(xué)
					
            
				
            
								
            
					
            細(xì)胞凋亡檢測實驗2018/07/23
            
					
            
				（1）用于腫瘤細(xì)胞和組織在內(nèi)的不同種類病理標(biāo)本研究；（2）應(yīng)用于臨床診療，新藥研制、生物制品開發(fā)、腫瘤放化療、以及從促凋亡角度探索腫瘤的基因治療；（3）對相關(guān)疾病的早期發(fā)現(xiàn)、放化療的療效評價具有舉足輕重的地位。實驗方法原理本實驗用1μg/ml三尖杉酯堿HT在體外誘導(dǎo)培養(yǎng)的HL-60細(xì)胞發(fā)生凋亡，同時也有少數(shù)細(xì)胞發(fā)生壞死。用Hoechst33342和碘化丙啶（propidiumiodide，PI）對細(xì)胞進(jìn)行雙重染色，可以區(qū)別凋亡、壞死及正常細(xì)胞。三尖杉酯堿（HT）是我國自行研制的一種對急性粒細(xì)胞白
					
            
				
            
								
            
					
            大鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)實驗2018/07/23
            
					
            
				大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)可以：（1）用于血液流動性、防止血栓形成、調(diào)節(jié)血管張力等研究；（2）用于選擇性通透性以及免疫調(diào)節(jié)等方面研究。實驗方法原理貼塊法適用于內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)量低的、管徑較小血管的內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)，其方法較酶消化法簡便、經(jīng)濟。但缺點使易混有成纖維細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞，前者的貼壁時間和內(nèi)皮接近，后者貼壁較內(nèi)皮慢，而且會被肝素所抑制。實驗材料雄性Wistar大鼠試劑、試劑盒DMEM胎牛血清內(nèi)皮細(xì)胞生長因子肝素鈉青鏈霉素明膠胰蛋白酶PBSD-Hanks’液儀器、耗材手術(shù)器械眼科剪眼科鑷培養(yǎng)皿手術(shù)刀培養(yǎng)瓶C
					
            
				
            
								
            
					
            流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡方法（Annexin V 法）2018/07/19
            
					
            
				實驗原理AnnexinV是檢測細(xì)胞凋亡的靈敏指標(biāo)之一。它是一種磷脂結(jié)合蛋白，可以與早期凋亡細(xì)胞的胞膜結(jié)合，而細(xì)胞質(zhì)膜的改變是細(xì)胞發(fā)生凋亡時早的改變之一。在細(xì)胞發(fā)生凋亡時，膜磷脂酰絲氨酸(PS)由質(zhì)膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。AnnexinV與磷脂酰絲氨酸有高度親和力，因而與細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸結(jié)合。由于在發(fā)生凋亡時，磷脂酰絲氨酸外翻的發(fā)生早于細(xì)胞核的改變，因此，與DNA碎片檢測比較，使用AnnexinV可以更早地檢測到凋亡細(xì)胞。因為細(xì)胞壞死時也會發(fā)生磷脂酰絲氨酸外翻，所以AnnexinV常與鑒定細(xì)胞死
					
            
				
            
								
            
					
            飽和氯化鈉法提取外周血DNA2018/07/19
            
					
            
				實驗原理以蛋白酶K和SDS裂解細(xì)胞釋放DNA，而DNA在濃度較高的氯化鈉溶液中的溶解度很高，Na與帶負(fù)電的DNA結(jié)合成DNA鈉鹽，這時DNA在溶液中呈溶解狀態(tài)。以抽提DNA，去除溶液中蛋白雜質(zhì)后以3MNaAc沉淀DNA。實驗試劑1.TEbuffer（pH8.0）2.蛋白酶K3.SDS4.飽和氯化鈉6.3MNaAc（pH5.2）7.異丙醇8.乙醇實驗設(shè)備1.電熱恒溫水槽2.高速離心機實驗材料抗凝外周全血實驗步驟1.取0.5ml抗凝外周全血，加入0.8ml生理鹽水混勻后，室溫離心10000rpm1m
					
            
				
            
								
            
					
            細(xì)胞共定位2018/07/19
            
					
            
				實驗試劑高保真聚合酶(pfuultra)，限制性內(nèi)切酶(XhoI、SpeI、BamHI、SpeI、SacI)，金粉，無水乙醇，2.5MCaCl2，20ul0.1M亞精胺實驗設(shè)備PCR擴增儀，PDS-1000/He型基因槍，激光共聚焦顯微鏡(CarlZeissLSM510)實驗材料洋蔥實驗步驟1.載體的構(gòu)建pA7-CFP-AtCOP1，pA7-AtCRY1-YFPpA7-CFP-OsCOPl，pA7-OsCRY1b-YFP中間載體pA7-CFP和pA7-YFP為本實驗室構(gòu)建。將AtCOPl(引物為
					
            
				
            
								
            
					
            應(yīng)用細(xì)胞融合技術(shù)制備染色體提前凝集標(biāo)本2018/07/19
            
					
            
				實驗原理在自然條件下或用人工的方法(物理、化學(xué)或生物)將兩個或兩個以上的同種或不同種細(xì)胞融合成一個細(xì)胞的過程稱為細(xì)胞融合。七十年代初，由于發(fā)現(xiàn)M期細(xì)胞內(nèi)有某種促進(jìn)染色體凝集因子，它無種屬特異性，所以在細(xì)胞融合和染色體技術(shù)的基礎(chǔ)上，建立了制備染色體提前凝集標(biāo)本的方法。即讓M期細(xì)胞與間期(I期)細(xì)胞融合，從而誘導(dǎo)I期細(xì)胞染色質(zhì)提前濃縮成染色體。形成的這種染色體稱提前凝集的染色體(PrematurelyCondensedChromosome，PCC)。這項技術(shù)已應(yīng)用于細(xì)胞周期分析、正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞染
					
            
				
            
								
            
					
            Omega質(zhì)粒小量提取流程2018/07/19
            
					
            
				實驗試劑1.使用前，將RNaseA全部加入SolutionI中并于4度保存。2.按下表用無水乙醇稀釋DNAWashBuffer，并于室溫保存。D6948-00B:加入8ml無水乙醇D6948-01B:加入80ml無水乙醇D6848-02B:加入80ml無水乙醇實驗步驟1.取1.5-5ml菌液10，000xg室溫離心1min收集菌體沉淀；2.小心去除上清液，加250ulSolutionI/RNase，渦旋或用移液槍上下吹打重懸菌體。3.加250ulSolutionⅡ，來回顛倒4-6次輕柔混勻，得到
					
            
				
            
								
            
					
            抗體分泌細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄信號研究2018/07/18
            
					
            
				抗體是免疫系統(tǒng)*的效應(yīng)分子，抗體提供了直接和長效的保護(hù)以免感染，目前大多利用疫苗開發(fā)抗體。當(dāng)B細(xì)胞遇到抗原，它們改變生理狀態(tài)、位置，并且啟動分化過程，終產(chǎn)生抗體分泌細(xì)胞（Antibody-secretingcells,ASCs）。抗體分泌細(xì)胞是稀有的高度特異性細(xì)胞，代表了B細(xì)胞分化的終階段。抗體分泌細(xì)胞由短壽命循環(huán)再生的漿母細(xì)胞（plasmablasts,PBs）組成，這些漿母細(xì)胞產(chǎn)生于次級淋巴器官的免疫反應(yīng)早期。長壽命的有絲分裂后漿細(xì)胞（plasmacells,PCs）駐留在次級淋巴器官中，并
					
            
				
            
								
            
					
            CAR陽性表達(dá)率檢測2018/07/17
            
					
            
				CAR陽性表達(dá)率檢測是CAR-T療法質(zhì)量控制的重要一環(huán)，常用的檢測方案有利用ProteinL、Anti-Fab抗體或靶點蛋白結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行檢測。其中，靶點蛋白結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)的檢測方案因其靶點特異性強的優(yōu)勢而備受青睞，許多業(yè)內(nèi)人士預(yù)期靶點特異性的檢測將會被監(jiān)管機構(gòu)納入CAR-T質(zhì)量控制監(jiān)管考量的范疇。本文將對CAR陽性表達(dá)率檢測相關(guān)案例做一匯總以供大家參考。三種CAR-T陽性率檢測試劑優(yōu)劣勢對比檢測試劑檢測原理優(yōu)點缺點ProteinL結(jié)合抗體κ輕鏈成本低，且市面有能簡化操作的直標(biāo)Protein
					
            
				
            
								
            
					
            E-Z 96植物DNA協(xié)議真空歧管處理2018/07/17
            
					
            
				實驗方法：注：以下協(xié)議是基于使用OBI的真空歧管（產(chǎn)品編號VAC-03）。1。按照制造商的指示設(shè)置真空歧管。2。將廢物收集托盤放置在真空歧管內(nèi)，然后將E-Z96®DNA板放置在歧管的頂部。三。將整個樣品（包括任何可能形成的沉淀物）應(yīng)用于E-Z96®DNA板。注意：在這個階段標(biāo)記E-Z96®DNA板和收集板是很好的主意，以便它們可以在整個協(xié)議中被容易地識別。*不要觸摸威爾斯的邊緣與吸管提示，以避免交叉污染。4。打開真空歧管并通過真空過濾樣品混合物。關(guān)掉真空。5。通過使用多通道吸管將700ULDNA
					
            
				
            
								
            
					
            蛙或蟾蜍坐骨神經(jīng)－腓腸肌標(biāo)本的制備2018/07/17
            
					
            
				實驗原理蛙或蟾蜍等兩棲類動物的一些基本生命活動和生理功能與溫血動物相似，而其離體組織生活條件易于掌握，在任氏液的浸潤下，神經(jīng)肌肉標(biāo)本可較長時間保持生理活性，因此，在生理學(xué)實驗中常用蛙或蟾蜍坐骨神經(jīng)腓腸肌離體標(biāo)本來觀察神經(jīng)肌肉的興奮性、興奮過程以及骨骼肌收縮特點等。實驗設(shè)備蛙類手術(shù)器械和藥品1套，包括：蛙板、小玻板各1塊，粗剪刀、直剪刀各1把，大鑷子、小鑷子各1把，眼科剪刀1把、探針1根、玻璃分針2根，大燒杯、小燒杯各1個，滴管1支，培養(yǎng)皿1個，棉線，任氏液，鋅銅叉。實驗步驟1.破壞腦脊髓：取蟾蜍
					
            
				
            
								
            
					
            ELISA實驗操作中的成敗細(xì)節(jié)2018/07/16
            
					
            
				轉(zhuǎn)載請注明：解螺旋·臨床醫(yī)生科研成長平臺酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）因其具有敏感性高、特異性強等優(yōu)點，被廣泛應(yīng)用于臨床檢測中的各種抗原和抗體的測定。盡管ELISA操作簡單，但是小實驗里也蘊含著大文章，ELISA操作各個環(huán)節(jié)對實驗的檢測效果影響較大，稍不注意就會產(chǎn)生假陽性或假陰性的結(jié)果?，F(xiàn)在小魚就跟大家818應(yīng)用ELISA應(yīng)該了解的一些常識。ELISA分類及具體過程一般，ELISA可分為以下四大類：直接ELISA、間接ELISA、夾心ELISA、競爭抑制ELISA。其他的ELISA都隸屬于這四類
					
            
				
            
								
            
					
            理性闡述qPCR實驗的Ct值的合理范圍2018/07/16
            
					
            
				理性闡述qPCR實驗的Ct值的合理范圍。（附Ct值過大或過小的解決方法）Ct值是什么？Ct值具有什么樣的作用？Ct值的正常范圍是多少？Ct值太大或者太小的原因？Ct值是熒光定量PCR重要的結(jié)果呈現(xiàn)形式。它被用于計算基因表達(dá)量差異或者基因拷貝數(shù)。那么熒光定量的Ct值多大可被認(rèn)為是合理？如何保證Ct值的有效范圍呢？今天就讓小編來為大家解答這個問題。Ct值是什么？qPCR擴增過程中，擴增產(chǎn)物的熒光信號達(dá)到設(shè)定的熒光閾值時的所對應(yīng)的擴增循環(huán)數(shù)（CycleThreshold）。C代表Cycle，T代表Th
					
            
				
            
							
				
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