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2023
11-02

免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)操作有哪些？
免疫共沉淀（CO-IP）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法。那么你知道免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)操作有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！一、蛋白樣品制備裂解提取出免疫沉淀需要的蛋白樣品，以下為HEK293T細(xì)胞樣品的處理方法，其余的樣品制備方法參閱相關(guān)文獻(xiàn)。單層貼壁細(xì)胞總蛋白的提?。?.收集細(xì)胞：10cm細(xì)胞培養(yǎng)板上，每板細(xì)胞加1ml，4℃預(yù)冷的PBS（0.01MpH7.2～7.3）。反復(fù)沖洗把所有掛壁細(xì)胞洗下來轉(zhuǎn)移到1.5ml離心管內(nèi)離心：3400rpm2min。2.清洗細(xì)胞
2023
11-02

研究蛋白質(zhì)相互作用的方法有哪些？
相當(dāng)多的蛋白質(zhì)行使功能的時(shí)候并不是單打獨(dú)斗的，蛋白質(zhì)們通過蛋白質(zhì)相互作用形成復(fù)合體然后進(jìn)行工作。因此，研究蛋白質(zhì)的相互作用成為研究蛋白質(zhì)功能和作用機(jī)制的最為重要的環(huán)節(jié)之一。那么你知道研究蛋白質(zhì)相互作用的方法有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！一、酵母雙雜交系統(tǒng)原理：很多真核生物的位點(diǎn)特異轉(zhuǎn)錄激活因子通常具有兩個(gè)可分割開的結(jié)構(gòu)域，即DNA特異結(jié)合域（DNA-bindingdomain,BD）與轉(zhuǎn)錄激活域（Transcriptionalactivationdomain,AD）。這兩個(gè)結(jié)構(gòu)域各具功能，互不影
2023
11-01

ELISA實(shí)驗(yàn)的操作要點(diǎn)有什么？
優(yōu)質(zhì)的試劑，良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。ELISA的操作因固相載體的形成不同而有所差異，那么你知道ELISA實(shí)驗(yàn)的操作要點(diǎn)有什么嗎？讓我們一起來看看吧！一、標(biāo)本的采取和保存可用作ELISA測定的標(biāo)本十分廣泛，體液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、糞便)等均可作標(biāo)本以測定其中某種抗體或抗原成份。有些標(biāo)本可直接進(jìn)行測定(如血清、尿液)，有些則需經(jīng)預(yù)處理(如糞便和某些分泌物)。大部分ELISA檢測均以血清為標(biāo)本。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成
2023
11-01

RNA提取準(zhǔn)備工作及注意事項(xiàng)有什么？
你知道RNA提取準(zhǔn)備工作及注意事項(xiàng)都有什么嗎？讓我們一起來看看吧！一、槍頭和EP管等的消毒滅菌1.用去離子水配制0.1%（千分之一）的DEPC（劇毒物），須在通風(fēng)櫥中小心使用，避光密閉4℃保存;DEPC水是用DEPC處理過并經(jīng)高溫高壓消毒的純水。經(jīng)檢測不含RNase、DNase和proteinase。2.將槍頭和EP管放入0.1%的DEPC內(nèi)，保證槍頭和EP管內(nèi)都充滿0.1%的DEP。3.避光、靜置、過夜（12-24h）4.裝槍頭和EP管的盒子不需要用DEPC浸泡，將槍頭或者EP管內(nèi)的DEPC水
2023
10-31

如何配置培養(yǎng)基？
你知道該如何配置培養(yǎng)基嗎？讓我們一起來看看吧！一、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)全程注意事項(xiàng)1.無菌操作是重中之重，細(xì)胞培養(yǎng)對無菌條件比較苛刻，實(shí)驗(yàn)人在進(jìn)行整個(gè)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的無菌意識一定要強(qiáng)，否則一個(gè)不小心，發(fā)生細(xì)菌污染，輕則浪費(fèi)細(xì)胞，重則污染整個(gè)培養(yǎng)箱。2.實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)入細(xì)胞房前應(yīng)該換上干凈的鞋子、白大褂、手套和口罩。3.所有耗材放入工作臺前都需用75%酒精進(jìn)行消毒，雙手進(jìn)入工作臺前也需要用75%的酒精進(jìn)行消毒。4.進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前應(yīng)先對工作臺進(jìn)行紫外滅菌30min以上，并將所有需要用到的耗材放到工作臺上一起進(jìn)行紫外滅菌（簡稱
2023
10-31

如何選擇合適的培養(yǎng)基？
培養(yǎng)細(xì)胞的重要環(huán)節(jié)有很多，其中很重要的一步就是為細(xì)胞選擇適合的生長環(huán)境，為其選擇成分適合又營養(yǎng)豐富的細(xì)胞培養(yǎng)基。細(xì)胞培養(yǎng)基是供給細(xì)胞營養(yǎng)、維持細(xì)胞生長和增殖的多種營養(yǎng)物質(zhì)的混合物，種類一般包括經(jīng)典/基礎(chǔ)培養(yǎng)基、無血清培養(yǎng)基以及化學(xué)成分確定的培養(yǎng)基等。那么該如何選擇合適的培養(yǎng)基呢？讓我們一起來看看吧！1.RPMI-1640培養(yǎng)基RPMI-1640廣泛應(yīng)用于哺乳動(dòng)物、特殊造血細(xì)胞、正常或惡性增生的白細(xì)胞，雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)，是目前應(yīng)用十分廣泛的培養(yǎng)基。主要用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)。其它像K-562、HL-60
2023
10-30

影響WB實(shí)驗(yàn)的因素有什么？
WB實(shí)驗(yàn)是分子生物學(xué)中最為常見的實(shí)驗(yàn)，那么你知道影響WB實(shí)驗(yàn)的因素有什么嗎？讓我們一起來看看吧！一、蛋白樣本制備1.蛋白質(zhì)的樣品制備注意以下問題：（1）在合適的條件下，保持蛋白質(zhì)的最大溶解性和可重復(fù)性。（2）選擇合適的表面活性劑和還原劑，使其形成各自多肽的溶液。（3）盡量去除核酸，多糖，脂類等分子的干擾，裂解完畢離心之后取中層澄清溶液時(shí)避免吸到底層沉淀和上層脂類。（4）整個(gè)制作蛋白樣本的制備過程必須在低溫下進(jìn)行，避免細(xì)胞破碎釋放出各種酶類，但是注意不要反復(fù)凍融。（5）所抽取樣品的蛋白含量，蛋白變
2023
10-30

DMEM和1640培養(yǎng)基有哪些不同？
培養(yǎng)基有很多不同的名字是因?yàn)楦鶕?jù)不同細(xì)胞的培養(yǎng)和應(yīng)用場景，培養(yǎng)基可以分為多種類型，最常見的是DMEM、RPMI-1640、MEM等。這些培養(yǎng)基有自己的配方特點(diǎn)和適用范圍。那么你知道DMEM和1640培養(yǎng)基有哪些不同嗎？讓我們一起來看看吧！DMEM(Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium)是一種zui廣泛應(yīng)用的細(xì)胞培養(yǎng)基之一，它是由Eagle于1959年開發(fā)出來的，后由Dulbecco進(jìn)行了改良。DMEM主要適用于肝臟、腎臟、肺、心臟等多種類型的哺乳動(dòng)物細(xì)胞系的培養(yǎng)。DME
2023
10-27

細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)常見問題有哪些？
你知道細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)常見問題有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！一、細(xì)胞污染和感染的處理方法細(xì)菌污染：如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞培養(yǎng)物出現(xiàn)混濁或異味，可能存在細(xì)菌污染。立即停止細(xì)胞培養(yǎng)，對細(xì)胞培養(yǎng)器具進(jìn)行嚴(yán)格的消毒和清潔，更換新的細(xì)胞培養(yǎng)物和培養(yǎng)基。真菌污染：真菌污染常常表現(xiàn)為細(xì)胞培養(yǎng)物表面的白色或黑色斑點(diǎn)。細(xì)胞培養(yǎng)器具應(yīng)che底清潔，細(xì)胞培養(yǎng)物可以添加抗真菌劑來預(yù)防和處理。細(xì)胞病毒感染：如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞培養(yǎng)物出現(xiàn)明顯的細(xì)胞溶解和變形，可能存在細(xì)胞病毒感染?？墒褂每共u藥物來處理感染，并且進(jìn)行核酸檢測以確認(rèn)病毒類型。二、細(xì)
2023
10-26

什么是液體培養(yǎng)基？它的組分有哪些？
細(xì)胞培養(yǎng)，是人工創(chuàng)造與體內(nèi)生長相似的環(huán)境，使細(xì)胞生長、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的技術(shù)。培養(yǎng)基是一切體外培養(yǎng)的基礎(chǔ)，為細(xì)胞的生長和代謝活動(dòng)提供了各種必需的營養(yǎng)物質(zhì)。根據(jù)培養(yǎng)基的來源和組成成分，它的發(fā)展經(jīng)歷了三個(gè)階段，分別是天然培養(yǎng)基階段、合成培養(yǎng)基階段以及無血清培養(yǎng)基階段。那么你知道什么是液體培養(yǎng)基嗎？它的組分是什么嗎？讓我們一起來看看吧！在20世紀(jì)50年代，當(dāng)時(shí)體外培養(yǎng)普遍直接采用組織凝塊、生物性液體和組織提取液，如血漿凝塊、血清、淋巴液、胚胎浸液等，這就是天然培養(yǎng)基階段。由于天然培養(yǎng)基的使用會
2023
10-26

液體培養(yǎng)基的常見問題有哪些？
液體培養(yǎng)基是最為常見的培養(yǎng)基類型，它具有可進(jìn)行通氣培養(yǎng)或振蕩培養(yǎng)的優(yōu)勢，因?yàn)樗牧鲃?dòng)性便于精確控制培養(yǎng)基的溶液溫度、營養(yǎng)濃度和氣體含量等；它對細(xì)胞生長時(shí)的附著能力要求小，細(xì)胞可快速擴(kuò)增；當(dāng)需要大量細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)也更經(jīng)濟(jì)高效。那么你知道液體培養(yǎng)基的常見問題有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！一、液體培養(yǎng)基為什么顏色不一樣酚紅加量不同，導(dǎo)致顏色差異：DMEM＞MEM＞DMEM/F12＞RPMI1640＞F12&F10。二、培養(yǎng)基放冰箱里顏色變深空氣中CO2濃度低，培養(yǎng)基內(nèi)CO2會逐漸溢出，HCO3-減少，造成
2023
10-25

你知道什么是瓊脂糖凝膠電泳嗎？
你知道什么是你知道什么是瓊脂糖凝膠電泳嗎？讓我們一起來看看吧！一、瓊脂糖凝膠的特點(diǎn)核酸分子是兩性解離分子，在高于其等電點(diǎn)的電泳緩沖液中，其堿基不解離，而磷酸基團(tuán)全部解離，核酸分子因而帶負(fù)電荷，電泳時(shí)向正極遷移。瓊脂糖主要從海洋植物瓊脂中提取而來并經(jīng)糖基化修飾，為一種聚合鏈線性分子，使用瓊脂糖凝膠作為電泳支持介質(zhì)，發(fā)揮分子篩功能，使得大小和構(gòu)象不同的核酸分子的遷移率出現(xiàn)較大差異，從而達(dá)到分離的目的。因此，目前多用瓊脂糖為電泳支持物進(jìn)行平板電泳，其優(yōu)點(diǎn)如下。（1）瓊脂糖凝膠電泳操作簡單，電泳速度快，
2023
10-25

瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)的試驗(yàn)方法是什么？注意事項(xiàng)有什么？
你知道瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)方法是什么嗎？有什么注意事項(xiàng)呢？讓我們一起來看看吧！一、瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)方法1.擇適合樣品預(yù)期片段大小的瓊脂糖凝膠濃度百分比。將瓊脂糖粉末與用于運(yùn)行凝膠的相同類型的緩沖液（TAE）結(jié)合起來，加熱使混合物融化，避免沸騰。2.選擇所需尺寸的凝膠澆注模具和梳子，為樣品和marker提供足夠數(shù)量的孔，以及容納每個(gè)待裝樣品數(shù)量的孔容量。3.膠凝固后，將凝膠放入電泳儀中，電泳液沒過凝膠，根據(jù)加入量的多少，決定混合多少ul的lodingbuffer，將樣液混合lodingbuf
2023
10-25

如何選擇DNA提取方法
DNA的提取可以簡單的分為裂解和純化兩大步驟，裂解是破壞樣品細(xì)胞結(jié)構(gòu)，從而使樣品中的DNA游離在裂解體系中的過程，純化則是使DNA與裂解體系中的其它成分，如蛋白質(zhì)、鹽及其它雜質(zhì)分離的過程。那么該如何選擇DNA提取方法呢？讓我們一起來看看吧！一、酚氯仿抽提法酚氯仿抽提是去除蛋白質(zhì)的有效手段，但如果蛋白質(zhì)含量超過了其飽和度，裂解體系中的蛋白質(zhì)就不會被一次性去除，需要進(jìn)行多次反復(fù)抽提，而每次的抽提均會導(dǎo)致核酸的損失。酚氯仿抽提的優(yōu)勢是成本低廉，對實(shí)驗(yàn)條件要求較低。二、高鹽沉淀法高鹽沉淀法是酚氯仿抽提方
2023
10-24

熒光原位雜交（FISH）的實(shí)驗(yàn)步驟是什么？
熒光原位雜交（FluorescenceinsituhybridizationFISH）是一門新興的分子細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)，是20世紀(jì)80年代末期在原有的放射性原位雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種非放射性原位雜交技術(shù)。那么你知道熒光原位雜交（FISH）的實(shí)驗(yàn)步驟是什么嗎？讓我們一起來看看吧！一、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備1.實(shí)驗(yàn)用具及材料（1）人的MyoD1（MYF3)基因探、人外周血中期染色體細(xì)胞標(biāo)本；（2）指甲油、甲酰胺、氯化鈉、檸檬酸鈉、氫氧化鈉、吐溫20等；（3）恒溫水浴鍋、培養(yǎng)箱、染色缸、載玻片、Nikon
2023
10-24

蛋白表達(dá)的常見問題有哪些？
蛋白表達(dá)實(shí)驗(yàn)的時(shí)，有時(shí)候?qū)嶒?yàn)會覺得參考實(shí)驗(yàn)方法和克隆的蛋白基因序列wan全沒有問題，但蛋白電泳就是沒有結(jié)果。下面讓我們一起來看看蛋白表達(dá)的常見問題有哪些吧！1、載體構(gòu)建錯(cuò)誤，很多克隆新人經(jīng)常弄錯(cuò)讀碼框。比如Qiagen的pQE系列載體，其克隆位點(diǎn)常有一兩個(gè)堿基的區(qū)別；另外有些酶產(chǎn)生粘端有些酶產(chǎn)生平端，這些都容易導(dǎo)致讀碼框錯(cuò)誤，從而表達(dá)不出來。2、宿主菌選擇不當(dāng)，不同的宿主菌其基因型是不一樣的。有些經(jīng)過特殊修飾的載體，或者特殊用途的載體，或者有特殊啟動(dòng)子的載體，必須選擇合適的宿主菌進(jìn)行表達(dá)。因此，
2023
10-23

PCR反應(yīng)體系主要是什么？
你知道PCR反應(yīng)體系主要包含那些嗎？讓我們一起來看看吧！一、模板（template)模板即擴(kuò)增用的DNA，可以是任何來源DNA(如基因組DNA、質(zhì)粒DNA等)或RNA（如總RNA、mRNA、tRNA、rRNA、病毒RNA等），但必須符合兩個(gè)條件：一是純度必須較高，二是濃度不能太高以免抑制。模板是待擴(kuò)增的目的基因或特異片段，如診斷病人是否攜帶有突變基因時(shí)，其模板就是提取的病人血液中的DNA或RNA片段。PCR對模板DNA的純度不要求很高，但應(yīng)盡量不含有對PCR反應(yīng)有抑制作用的雜質(zhì)存在，如蛋白酶、核
2023
10-23

PCR技術(shù)的基本原理、各步驟的目的是什么？
你知道PCR技術(shù)的基本原理、各步驟的目的是什么嗎？讓我們一起來看看吧！一、PCR技術(shù)基本原理PCR是一種選擇性體外快速擴(kuò)增DNA片段的方法。在體外以類似于細(xì)胞內(nèi)DNA的半保留復(fù)制過程，以擬擴(kuò)增的模板DNA分子，與模板DNA互補(bǔ)的寡核苷酸引物、DNA聚合酶、4種dNTP及適合的緩沖體系組成的反應(yīng)體系，經(jīng)過重復(fù)地變性一退火一延伸三步，擴(kuò)增新的目的DNA鏈，這個(gè)過程通過控制反應(yīng)體系的溫度來實(shí)現(xiàn)。PCR包含下列三步反應(yīng)：1、變性(denaturation)將反應(yīng)體系混合物經(jīng)加熱至94℃左右，維持較短的時(shí)
2023
10-20

如何選擇免疫組化中的一抗？
免疫組化實(shí)驗(yàn)看似容易，但真想把結(jié)果做漂亮，還是需要花上很長一段時(shí)間去積累和摸索經(jīng)驗(yàn)。一味按照網(wǎng)上操作流程來做，結(jié)果往往并不理想，最終結(jié)果未能達(dá)到預(yù)期的效果。那么如何選擇免疫組化實(shí)驗(yàn)中的一抗呢？讓我們一起來看看吧！一、單克隆和多克隆抗體的選擇存在于抗原表面的，決定抗原特異性的特殊化學(xué)基團(tuán)稱為抗原決定簇，又稱抗原表位。一個(gè)抗原可以有一種或多種不同的抗原表位，每種表位只有一種抗原特異性。用一種包含多種抗原決定簇的抗原免疫動(dòng)物，可刺激機(jī)體多個(gè)B細(xì)胞克隆產(chǎn)生針對多種抗原表位的抗體，就是多克隆抗體（poly
2023
10-20

細(xì)胞胞內(nèi)染色操作流程是什么？
你知道細(xì)胞胞內(nèi)染色操作流程是什么嗎？讓我們一起來看看吧！一、細(xì)胞計(jì)數(shù)將培養(yǎng)好的細(xì)胞收集于15mL離心管并計(jì)數(shù)；500g離心4min，去上清。二、制備單細(xì)胞懸液將收集的細(xì)胞用1mL0.5%BSA/PBS溶液重懸，400g離心3min，去上清，重復(fù)2次；用0.5%BSA/PBS溶液重懸細(xì)胞至濃度1x106個(gè)細(xì)胞/mL，分配到96孔板中，每孔100μl細(xì)胞懸液，400g離心5min去上清。三、固定每孔加入100μl細(xì)胞固定劑重懸細(xì)胞，2-8°孵育20min。四、洗滌400g離心5min，去上清后加入2

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