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2023
10-19

免疫細胞（ICC）實驗步驟有哪些？
免疫細胞化學(ICC)是一種使用熒光抗體或染料來檢測細胞內(nèi)靶抗原的技術(shù)。那么你知道免疫細胞（ICC）實驗步驟有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！一、細胞培養(yǎng)/固定很多抗原在離體組織中只存在很短時間，自溶（autolysis）和壞死（necrosis）使得抗原進一步降解，組織形態(tài)和結(jié)構(gòu)被破壞。樣品浸泡在合適的固定液中，固定液完quan滲透組織，使蛋白失去活性，并且使組織被保存、穩(wěn)定在接近invivo狀態(tài)。二、通透處理通透即為對細胞膜進行打孔處理，使抗體能進入到細胞中和抗原發(fā)生結(jié)合。通常，當抗體檢測細胞內(nèi)
2023
10-19

免疫組化實驗常見問題有哪些？
免疫組織化學(immunohistochemistry，IHC)是一種綜合定性、定位和定量；形態(tài)、機能和代謝密切結(jié)合為一體的研究和檢測技術(shù)。在原位檢測出病原的同時，還能觀察到組織病變與該病原的關(guān)系，確認受染細胞類型，從而有助于了解疾病的發(fā)病機理和病理過程。那么你知道免疫組化實驗常見問題有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！一、石蠟切片再染色過程出現(xiàn)脫片現(xiàn)象1.烤片時間不夠，或溫度不夠，可以延長烤片時間和提高烤片溫度；2.用含有多聚賴氨酸的玻片，可以購買到或這自己做；3.有些組織本身就容易掉片，如骨組織等
2023
10-18

二代測序（NGS）的原理
DNA測序技術(shù)一直是分子生物學相關(guān)研究中常用的技術(shù)手段之一，從一定程度上推動了該領(lǐng)域的快速發(fā)展。每一代測序技術(shù)的更替都標志著生物學中基因芯片、數(shù)據(jù)分析、表面化學、生物工程等技術(shù)領(lǐng)域有了新的突破，使測序向著高通量、低成本、高安全性和商業(yè)化的方向發(fā)展。那么二代測序(NGS)的原理是什么？讓我們一起來看看吧！第二代測序(NGS)又稱為高通量測序(High-throughputsequencing)，是基于PCR和基因芯片發(fā)展而來的DNA測序技術(shù)。二代測序引入了可逆終止末端，從而實現(xiàn)邊合成邊測序。二代測
2023
10-18

支原體污染的檢測方法有哪些？
支原體污染一般在顯微鏡下不可見，很難察覺，但細胞會受到極大的損傷，主要通過以下途徑影響細胞生長及功能。那么支原體污染的檢測方法有哪些呢？讓我們一起來看看吧！一、分離培養(yǎng)法檢測方法：將待檢樣品接種到適合支原體生長的液體培養(yǎng)基或固體培養(yǎng)基中，如有支原體污染，液體培養(yǎng)基顏色會改變，固體培養(yǎng)基將會有菌落生長。優(yōu)點：該方法被稱為支原體培養(yǎng)法的金標準，可以檢測絕大多數(shù)支原體。缺點：支原體生長到一定數(shù)量才能判斷是否有污染，檢測時間長，無法實現(xiàn)對支原體的快速檢測二、原位染色法檢測方法：通過染色試劑（如DAPI、
2023
10-18

細胞被支原體污染，該怎么辦？
支原體是目前為止發(fā)現(xiàn)的最小的原核生物，支原體污染一般在顯微鏡下不可見，很難察覺，但細胞會受到極大的損傷，主要通過以下途徑影響細胞生長及功能。那么細胞被支原體污染，該怎么辦呢？讓我們一起來看看吧！一、支原體污染的來源1.環(huán)境污染：如細胞培養(yǎng)房、細胞培養(yǎng)箱、超凈工作臺內(nèi)已被支原體污染；2.實驗器材的污染：移液槍、移液管、細胞培養(yǎng)皿、水浴鍋等；3.細胞培養(yǎng)試劑的污染：培養(yǎng)基、胰酶、血清、細胞凍存液等；二、處理方法1.及時更換培養(yǎng)液：可以減緩支原體的污染，但不能wan全清除；2.使用抗生素類去除試劑：抗
2023
10-18

夾心法與競爭法的ELISA檢測原理是什么？
ELISA的原理是以免疫學反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。在實際應(yīng)用中，通過不同的設(shè)計，具體的方法步驟可有多種。那么你知道夾心法與競爭法的ELISA檢測原理是什么嗎？讓我們一起來看看吧！一、夾心法原理夾心法使用的是兩個抗體夾抗原或者兩個抗原夾抗體的方法，這種復(fù)合物被稱之為三明治夾心結(jié)構(gòu)，利用一對配對wan全的抗體，可以特異性檢測抗原，當然主要針對的是具有至少2個以上抗原表位的抗原，抗體的配對可是門技術(shù)活，很多公司可以生產(chǎn)抗體，但是
2023
10-18

直接法與間接法的ELISA檢測原理是什么？
在實際應(yīng)用中，通過不同的設(shè)計，具體的方法步驟可有多種。即：用于檢測抗體的間接法、用于檢測抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。那么你知道直接法與間接法的ELISA檢測原理是什么嗎？讓我們一起來看看吧！一、直接法原理直接法是利用包被抗原，檢測抗體或者進行重組蛋白的活性驗證，利用蛋白與板材（即微孔板底）通過疏水鍵、流水/離子鍵的被動吸附,通過引入其它活性基團如氨基和碳基的共價結(jié)合，以及通過表面改性后的親水鍵結(jié)合等等，當然也有利用親和素預(yù)包被的板材，通過親和素與生物素的共價
2023
10-17

細胞凋亡與細胞壞死的不同點有哪些？
你知道細胞凋亡與細胞壞死的不同點有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！一、定義細胞凋亡：細胞凋亡是一種正常的基因程序性細胞死亡，其中衰老細胞在其生命周期結(jié)束時收縮，其剩余片段被吞噬而沒有任何炎癥反應(yīng)。細胞壞死：壞死是由于存在外部因素（如真菌或細菌毒素）而產(chǎn)生的信號導致細胞過早死亡。二、誘導細胞凋亡：當細胞發(fā)出DNA損傷或促凋亡和抗凋亡蛋白失衡的信號時，它就會被誘導。細胞壞死：它是由感染、外傷和毒素等外部存在因素引起的。三、形態(tài)變化細胞凋亡：可能會發(fā)生膜出血，但會保持膜的完整性。細胞壞死：細胞最終會失去其
2023
10-17

ELISA實驗結(jié)果異常的因素有哪些？
ELISA運用了免疫學原理和化學反應(yīng)顯色原理，需要將抗原或抗體預(yù)包被在固相載體表面，使后來形成的抗原-抗體-酶（熒光基團）-底物復(fù)合物黏附在載體上，通過檢測OD值或發(fā)光值，來檢測靶蛋白的含量。ELISA適合用于定量檢測胞外的分泌性蛋白，檢測大分子抗原和特異性抗體等。那么ELISA實驗結(jié)果異常的因素有哪些呢？讓我們一起來看看吧！一、樣品樣品是檢測的前提，樣品質(zhì)量會直接影響實驗結(jié)果?？梢杂肊LISA來檢測的樣品很多，根據(jù)檢測項目不同可以是血清、血漿、唾液、尿液等，但大部分還是以血清為樣品。作為血清樣
2023
10-17

如何選擇ELISA試劑盒？
酶聯(lián)免疫吸附試驗(Enzyme-linkedImmunosorbentAssay,ELISA)技術(shù)從1970年代發(fā)展至今已近半個世紀，是一項實驗室最基本的免疫檢測技術(shù)，被廣泛的應(yīng)用于基礎(chǔ)研究和臨床檢驗。那么面對市面上數(shù)以千計的試劑盒，數(shù)百家供應(yīng)商，該如何選擇適合的ELISA試劑盒呢？讓我們一起來看看吧！一、明確研究種屬一般來說，廠家都會在產(chǎn)品名稱上標明種屬，且為shou個單詞，檢索種屬的常用語言為英文。如果您需對不同物種的同一因子進行定量，建議優(yōu)先尋找適用于多個種屬的ELISA試劑盒，產(chǎn)品介紹中
2023
10-17

ELISA樣本處理的注意事項有什么？
ELISA的檢測目的是為了實驗提供準確的實驗依據(jù)，為了保證實驗數(shù)據(jù)的可靠性，在實驗過程中必須堅持全面的質(zhì)量控制和全過程質(zhì)量控制，在收集標本前都必須有一個完整的計劃。那么你知道ELISA樣本處理的注意事項有什么嗎？讓我們一起來看看吧！一、每個樣本量收集體積=100ulx檢測種類，如果要做復(fù)孔，標本量收集體積=100ulx檢測種類x2。二、樣本收集后若在一周內(nèi)進行檢測可保存于2-8°C，若不及時檢測，請進行分裝，凍存于-20°或-80°C，避免反復(fù)凍融。三、試劑盒的檢測范圍不等同于樣本中待測物的濃度
2023
10-16

蛋白檢測條帶的常見問題有哪些？如何解決？
你知道在蛋白檢測中條帶的常見問題有哪些？該如何解決嗎？讓我們一起來看看吧！一、條帶出現(xiàn)位置比預(yù)期低或高①當條帶出現(xiàn)位置比預(yù)期低：原因：目的蛋白經(jīng)過剪切或降解，有相同或相似抗原表位的蛋白被抗體檢測出解決辦法：樣品準備時候要在冰上操作；加入更過蛋白酶抑制劑；更換別的抗體②當條帶出現(xiàn)位置比預(yù)期略高：原因1：蛋白可能被糖基化，或氨基酸基被修飾解決辦法：使用酶去除可能的蛋白修飾；檢查抗原序列原因2：可能有融合蛋白解決辦法：查看表達序列原因3：蛋白形成二聚體或多聚體解決辦法：加強變性條件二、條帶比較模糊原因
2023
10-16

引物的純化方法有哪些？
你知道引物的純化方法有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！一、脫鹽寡核苷酸合成后，為了純化寡核苷酸成為天然的DNA結(jié)構(gòu)，首先必須去除保護基團。通過濃氨水處理，合成的寡核苷酸從固相載體上分離，2-氰乙氧基--磷酸二脂鍵的保護基團，以及堿基的保護基團基（苯甲?；彤惗』┍蝗コ?，從而形成了天然的DNA結(jié)構(gòu)。然而，必要的去保護步驟完成后，寡核苷酸混合物還包含幾種必須被去除的小分子有機化合物。所有非必須有機化合物被移除的過程通常叫做脫鹽。脫鹽純化可以借助反向硅膠柱進行。盡管脫鹽純化可以移除所有的非必須有機雜質(zhì)，
2023
10-13

培養(yǎng)基制備的注意事項有什么？
培養(yǎng)基的作用是為微生物提供生長和繁殖所需的營養(yǎng)物質(zhì)和環(huán)境條件。培養(yǎng)基的質(zhì)量直接關(guān)系到檢驗結(jié)果的準確性和可靠性，因此對于微生物檢驗而言，培養(yǎng)基的質(zhì)量控制尤為重要。那么培養(yǎng)基制備的注意事項有什么呢？讓我們一起來看看吧！一、配制要求正確按要求制備培養(yǎng)基是做好微生物檢驗的基礎(chǔ)。實驗人員使用商品化脫水合成培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基時，要嚴格按照產(chǎn)品說明進行配制，并做好配制記錄。在配制過程中，實驗人員需要嚴格遵守相關(guān)操作標準，佩戴口罩進行操作，避免吸入含有有毒物質(zhì)的培養(yǎng)基粉末，稱量、溶解應(yīng)使用專門的角匙，不使用金屬制
2023
10-13

PCR反應(yīng)污染的處理方法有哪些？
PCR反應(yīng)的特點是具有較大擴增能力與靈敏性，但令人頭痛的問題是易污染，極其微量的污染即可造成假陽性的產(chǎn)生。那么你知道PCR反應(yīng)污染的處理方法有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！一、環(huán)境污染1.稀酸處理法：對可疑器具用1mol/L鹽酸擦拭或浸泡，使殘余DNA脫嘌呤。2.紫外照射（UV）法：紫外波長（nm）一般選擇254/300nm,照射30min即可。需要注意的是，選擇UV作為消除殘留PCR產(chǎn)物污染時，要考慮PCR產(chǎn)物的長度與產(chǎn)物序列中堿基的分布，UV照射僅對500bp以上長片段有效，對短片段效果不大。
2023
10-12

離心柱法提取DNA的實驗步驟與注意事項有哪些？
離心柱上有硅膠濾膜，在高鹽低pH條件下，核酸能結(jié)合到硅膠膜上，而蛋白質(zhì)和其他代謝產(chǎn)物被洗脫；后續(xù)改變反應(yīng)條件到低鹽高pH來洗脫純化DNA。用離心柱法來提取DNA，得到的DNA質(zhì)量好，純度和濃度較高。那么離心柱法提取DNA的實驗步驟與注意事項有哪些呢？讓我們一起來看看吧！一、實驗步驟1.平衡液預(yù)處理取一個新的吸附柱放在收集管中，懸空加入100μL的平衡液至離心柱中，12000rpm離心1min，倒掉收集管中的廢液，將離心柱放回收集管中，備用。2.處理材料（1）如提取材料為血液，可直接使用200μL
2023
10-12

如何制備蛋白質(zhì)電泳凝膠？
你知道該如何制備蛋白質(zhì)電泳凝膠嗎？讓我們一起來看看吧！一、制備方法1.根據(jù)垂直電泳槽說明書安裝玻璃板，確定需配制分離膠的濃度和體積，配制所需分離膠；2.迅速將分離膠注入兩玻璃板間隙中，留出灌注積層膠所需空間（梳子的齒長再加1cm，用滴管小心地在分離膠上覆蓋一層0.1%SDS（當丙烯酰胺濃度≤8%時）或異丁醇或水（當丙烯酰胺濃度≥10%時），覆蓋層可防止氧擴散進入凝膠而抑制聚合反應(yīng)。將凝膠垂直置于室溫下；3.分離膠聚合wan全后，倒出覆蓋層液體，用去離子水洗滌凝膠頂部數(shù)次以除去未聚合的丙烯酰胺，盡
2023
10-11

PCR純化回收的步驟與注意事項有哪些？
聚合酶鏈式反應(yīng)產(chǎn)物中通常會含有過量的引物、dNTP、酶等，這些會對后續(xù)核酸序列測定、酶切、載體構(gòu)建等產(chǎn)生影響，通過PCR純化回收可獲取純的DNA擴增產(chǎn)物。那么PCR純化回收的步驟與注意事項有哪些呢？讓我們一起來看看吧！一、步驟1.在紫外投射儀或凝膠成像儀上，用刀片切取包含目的條帶的瓊脂糖凝膠并稱重；2.一般以0.1g膠加入100μl溶膠液的比例（具體根據(jù)試劑盒說明添加），按凝膠實際重量加入溶膠液，水浴鍋中55℃溶膠（期間可緩慢震動Ep管，將膠溶解wan全）；3.回收試劑盒中會配有回收柱和廢液管，
2023
10-10

Trizol法提取RNA的原理與步驟是什么？
RNA是一種核酸分子，在生物學中扮演著重要的角色。在細胞內(nèi)，RNA不僅具有轉(zhuǎn)錄和翻譯的功能，而且在調(diào)控基因表達、細胞信號傳導以及病理機制等方面也發(fā)揮著重要的作用。Trizol法是目前普遍使用的RNA提取方法，那么Trizol法提取RNA的原理與步驟是什么？讓我們一起來看看吧！一、Trizol法的實驗原理TRIZOL試劑是直接從細胞或組織中提取總RNA的試劑，它在破碎和溶解細胞時能保持RNA的完整性。試劑主要成分為異硫氰酸和苯酚，其中異硫氰酸肌可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，
2023
10-10

Trizol法提取RNA的注意事項與常見問題有哪些？
Trizol法是目前普遍使用的RNA提取方法，那么Trizol法提取RNA有哪些注意事項和常見問題呢？讓我們一起來看看吧！一、Trizol法提取RNA的注意事項在使用TRIZOL的時候要帶手套和眼罩，避免接觸到皮膚和衣服，使用化學通風櫥，防止蒸汽吸入。從少量樣品（1-10mg組織或102-104細胞）中提取RNA時可加入少許糖原以促進RNA沉淀。例如加800mlTRIzol勻漿樣品，沉淀RNA前加5-10μgRNase-free糖原。糖原會與RNA一同沉淀出來，糖原濃度不高于4mg/ml是不影響

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