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2024
11-07

單雙端測序有什么不同？
單端測序和雙端測序的主要區(qū)別在于測序方式、應(yīng)用場景和測序質(zhì)量上。?一、?單端測序和雙端測序的主要區(qū)別一：測序方式1.?單端測序（Single-Read）?：單端測序是從DNA片段的一端進行測序，只讀取一個方向的序列信息。在測序過程中，DNA樣本被片段化處理成200-500bp的片段，引物序列連接到DNA片段的一端，然后進行測序?。2.?雙端測序（Paired-End）?：雙端測序同時從DNA片段的兩端進行測序，讀取兩個方向的序列信息。在構(gòu)建文庫時，兩端都加上測序引物結(jié)合位點，分別進行兩次測序，然
2024
11-06

一文了解mNGS
繼上文《一文了解tNGS》之后，今天我們講講它的“兄弟”——mNGS吧~一、?mNGS簡介?mNGS（MetagenomicNextGenerationSequencing）?是一種無需培養(yǎng)即可快速鑒定感染病原體的新技術(shù)，即宏基因組學二代測序技術(shù)，正在改變病原微生物檢測的現(xiàn)狀。它通過無需培養(yǎng)樣本的方式，實現(xiàn)高通量、快速鑒定感染病原體，顯著提高了檢測的敏感性和特異性。其原理、優(yōu)點和應(yīng)用場景如下。二、?mNGS原理mNGS通過對臨床樣本的DNA或RNA進行高通量測序，無差別、無選擇性地對樣本中的核酸
2024
11-01

ALZET微型滲透壓泵的灌注與預(yù)浸泡
一、前言為了確保操作準確，必須確保每個泵都充滿藥物溶液。泵體內(nèi)滯留的氣泡或未能將流量調(diào)節(jié)器插入泵中，可能會導致泵送速率波動不可預(yù)測。填充泵時，請確保溶液處于室溫。建議在ALZET泵的填充和處理過程中以及在手術(shù)植入過程中使用無菌技術(shù)。填充過程中溶液或流量調(diào)節(jié)器的意外污染可能會導致可能破壞活性的微生物生長、組織刺激和不穩(wěn)定的結(jié)果。如果您擔心溶液的無菌性，請通過0.22µM注射器端過濾器（例如Millex®-GV）填充泵。在填充和植入過程中，應(yīng)戴上手術(shù)手套處理ALZET泵。如果皮膚油脂積聚在泵表面，可
2024
11-01

一文了解tNGS
一、tNGS技術(shù)原理tNGS是一種基于超多重PCR擴增（或靶向捕獲）與高通量測序兩種技術(shù)結(jié)合的新一代測序技術(shù)。它使用大量針對特定基因序列的引物/探針對待測樣品中抽提出的核酸進行超多重PCR擴增/探針捕獲，獲得大量目標核酸片段，再對這些目標核酸片段進行高通量測序，然后對所得序列進行生物信息學分析，從而實現(xiàn)對待測樣本中的核酸進行高靈敏以及高分辨率的識別。二、tNGS優(yōu)點1.針對性強：tNGS只針對特定基因序列進行測序，因此可以大大減少測序數(shù)據(jù)量，提高檢測效率和準確性。2.高靈敏度：由于tNGS可以對
2024
11-01

DH5 α感受態(tài)細胞和Top⑩感受態(tài)細胞的區(qū)別是什么
一、前言Top⑩感受態(tài)(E.coli)和DH5α感受態(tài)細胞是常用的大腸桿菌細胞系，用于基因克隆、高效表達和蛋白質(zhì)產(chǎn)量增加等研究。雖然它們都是常用的實驗室細胞系，但它們在一些關(guān)鍵方面存在區(qū)別。二、Top⑩感受態(tài)和DH5α感受態(tài)細胞基因型和用途對比1.?DH5α?：基因型為supE44、hsdR17、recA1、endA1、gyrA19、thi-1、relA1、△lacU169(80lacZΔM15)。主要用于分子克隆和質(zhì)粒提取，具有藍白斑篩選功能?。2.?Top⑩：基因型為F-、galU、galK
2024
10-31

大小鼠采血具體操作
1、尾尖采血這是常用且操作簡便的方法之一。首先將小鼠固定并暴露其尾巴，通常將其浸泡在40-50℃的溫水中幾分鐘或用酒精棉球擦拭鼠尾，使血管充盈。然后用無菌手術(shù)刀快速剪去尾尖1-2mm，血液會自然流出。2、摘眼球采血用左手拇指、食指和中指抓取小鼠的頸部頭皮，小指和無名指固定尾巴。輕壓需要摘取的眼部皮膚，使眼球充血突出。用眼科剪剪去小鼠的胡須，防止血從胡須處留下引起溶血。用眼科彎鑷夾取眼球并快速摘取，并使血液從眼眶內(nèi)流入0.5mlEP管中。3、眼眶靜脈叢采血：此方法適用于多次重復(fù)采血，具有成功率高、
2024
10-31

無血清培養(yǎng)基配方、使用方法
一、前言細胞培養(yǎng)技術(shù)在生命科學研究領(lǐng)域是must的。在科研上，細胞培養(yǎng)基（medium）一般都會加入血清（Serum）來補充蛋白質(zhì)（protein）、生長因子（growthfactor）或其他營養(yǎng)物質(zhì)（nutrients）等，大部分細胞培養(yǎng)會選擇使用胎牛血清（fetalbovineserum,FBS）。近年來也陸續(xù)有多樣的血清種類，例如：人類血小板生長因子（platelet-richplasma,PRP）、小牛血清（bovinegrowthserum,BGS）等，中科百抗自研產(chǎn)品：Bestop™
2024
10-30

磁珠法提取核酸的優(yōu)點是什么？
磁珠法提取核酸的優(yōu)點一：?自動化、高通量?磁珠法核酸提取適合于自動化處理，特別是在高通量實驗室中，使用磁珠法核酸提取試劑配合自動核酸提取純化儀可以快速完成大批量樣本的處理，提高工作效率?。?磁珠法提取核酸的優(yōu)點二：?操作簡便?磁珠法通過簡單的震蕩混勻和磁力架磁分離步驟即可完成核酸的捕獲與純化，操作流程簡化，相對于其他方法更為便捷?。?磁珠法提取核酸的優(yōu)點三：?核酸回收率高?磁珠表面功能基團豐富，與核酸的結(jié)合能力強，對核酸的回收率較高，尤其是對于微量樣本或低濃度核酸樣品，磁珠法能有效提高回收效率?
2024
10-30

磁珠法提取DNA的實驗步驟與注意事項有什么？
磁珠法核酸純化技術(shù)采用了納米級磁珠微珠，這種磁珠微珠的表面標記了一種對核酸有吸附作用的特定活性官能團，能同核酸發(fā)生吸附反應(yīng)，從而達到核酸與雜質(zhì)分離的目的，進而獲得純化的核酸。那么磁珠法提取DNA的實驗步驟與注意事項有什么呢？讓我們一起來看看吧！一、步驟1、樣本處理：核酸必須從細胞或其他生物物質(zhì)中釋放出來。（1）植物組織：液氮研磨或在特殊裂解液中電動勻漿；（2）動物組織：液氮研磨或裂解液中手動/電動勻漿；（3）血細胞：應(yīng)用紅細胞裂解液處理；（4）細胞：胰酶處理或蛋白酶K處理。2、DNA純化：磁珠提
2024
10-28

小鼠游離皮質(zhì)培養(yǎng)試劑盒怎么使用？
買到了BrainBits小鼠游離皮質(zhì)培養(yǎng)試劑盒后，該如何使用呢？一、制劑（無菌罩室溫）：1.將80µl臺普蘭藍（SigmaT8154）加入0.5ml試管中進行下面的步驟4。2.12mlNbActiv1™至室溫。3.將2ml分離的初級神經(jīng)元管置于30℃水浴中加熱1分鐘。二、細胞分散（無菌罩室溫）：1.用硅化巴斯德移液管，將整個試管的內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到無菌15ml離心管中。2.旋轉(zhuǎn)1100rpm(200xG)，1分鐘。丟棄上清，留下約50µl含有微球的THRYVE胚胎wanquan液。3.分散細胞顆粒（用
2024
10-28

新生牛血清常用于哺乳動物細胞的培養(yǎng)基中
新生牛血清常用于哺乳動物細胞的培養(yǎng)基中，為細胞提供營養(yǎng)物質(zhì)和生長因子，促進細胞的生長和增殖；可用于生物醫(yī)學研究中的細胞實驗、免疫學實驗、病毒學實驗等，為實驗提供營養(yǎng)物質(zhì)和生物活性物質(zhì)；還可用于某些臨床診斷試劑的研發(fā)和生產(chǎn)，如酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)試劑盒等。新生牛血清的存儲要求：1.儲存條件：應(yīng)儲存在-20°C或更低的溫度下，避免反復(fù)凍融。同時，應(yīng)避免陽光直射和高溫環(huán)境。2.開封前檢查：在使用前，應(yīng)仔細檢查血清瓶是否有明顯的污染或變質(zhì)跡象，如渾濁、異味等。如果發(fā)現(xiàn)異常情況，應(yīng)及時更換新的血
2024
10-25

BrainBits培養(yǎng)基好不好？
BrainBits培養(yǎng)基是一種無血清培養(yǎng)基，由Neurobasal、B27和Glutamax預(yù)混合而成，適用于神經(jīng)元的生長和培養(yǎng)。?BrainBits培養(yǎng)基（NbActiv1）由Neurobasal、B27和Glutamax預(yù)混合而成，這些成分的組合優(yōu)化了神經(jīng)元的生長條件。它特別適用于4天后的神經(jīng)元存活，并且簡化了實驗操作，減少了污染的風險?。一、BrainBits培養(yǎng)基優(yōu)點?無血清培養(yǎng)?：BrainBits培養(yǎng)基是一種無血清培養(yǎng)基，避免了血清批次間差異對實驗結(jié)果的影響，提高了實驗的可重復(fù)性?。
2024
10-25

全蛋白的提取方法和注意事項
一、全蛋白的提取方法主要包括以下幾種?。全蛋白的提取方法一：?細胞準備和清洗?：首先，準備近乎長滿的細胞，例如10cm大皿中的細胞。使用預(yù)冷的PBS清洗細胞1-2次，并棄去PBS。全蛋白的提取方法二：?細胞裂解?：加入適量的裂解液，如RIPA裂解液（強），并加入PMSF以抑制蛋白酶活性。如果需要提取磷酸化蛋白，還需加入磷酸酶抑制劑。裂解液配好后，將細胞在4℃下裂解15分鐘。全蛋白的提取方法三：超聲破碎?：將裂解后的細胞用超聲波破碎儀處理1-2分鐘，功率保持在20-30%，保持4℃。全蛋白的提取方
2024
10-24

怎么提高PCR擴增效率？
在PCR實驗過程中，提高PCR擴增效率是實驗成功的關(guān)鍵，下面我們探究一下如何提高PCR擴增效率~1.引物的設(shè)計引物的設(shè)計是PCR擴增效率的關(guān)鍵。引物長度應(yīng)在18-30堿基之間，通常為20nt。引物序列應(yīng)具有dute性，避免在非目的片段中存在。引物的GC含量應(yīng)在40-60%之間，避免過多的G+C導致非特異條帶?。2.?優(yōu)化反應(yīng)條件??增加循環(huán)數(shù)?：通過增加循環(huán)次數(shù)可以提高擴增效率。?提純模板?：確保模板DNA的純度，去除雜質(zhì)和抑制劑。?使用高質(zhì)量的Taq酶?：選擇活性高、穩(wěn)定性好的Taq酶。?調(diào)整
2024
10-24

原核生物基因表達的特點及調(diào)控機制
一、原核生物基因表達的特點1.只有一種?RNA聚合酶?原核生物只有一種RNA聚合酶，負責所有基因的轉(zhuǎn)錄過程。2.?以?操縱子為基本單位?原核生物的基因表達以操縱子為單位，將功能相關(guān)的基因組織在一起，同時關(guān)閉或開啟基因表達，既經(jīng)濟有效，又保證其生命活動的需要。?3.轉(zhuǎn)錄和翻譯偶聯(lián)進行?原核生物的轉(zhuǎn)錄和翻譯是偶聯(lián)進行的，mRNA合成后立即用于蛋白質(zhì)合成，無需中間存儲。（如需mRNA合成試劑盒可以選擇CELLSCRIPTT7ARCA加帽mRNA合成試劑盒）?4.mRNA翻譯起始部位有特殊的堿基序列——
2024
10-23

常見實驗動物抓拿固定手法
（一）小白鼠(mouse)習慣用右手的同學，建議使用右手抓住小鼠尾部，將其提起并放在鼠籠鐵紗網(wǎng)上或粗糙物上。在小鼠向前掙脫時，用左手的拇指和食指抓住其頸部皮膚，并以左手的小指和掌部夾住其尾部?？粘龅挠沂诌M行后續(xù)實驗，習慣用左手的同學則相反操作。（二）大白鼠(rat)習慣用右手的同學，建議戴上防護手套，用右手抓住大鼠尾巴中部提起，左手按住背部皮膚。可使用手術(shù)臺固定，將大鼠四肢放入手術(shù)臺松緊環(huán)內(nèi)，收緊環(huán)扣以固定?？粘龅挠沂诌M行后續(xù)實驗，習慣用左手的同學則相反操作。（三）豚鼠(cavy)Cavy具有膽
2024
10-23

新生牛血清含有豐富的營養(yǎng)成分
新生牛血清主要來源于剛出生的小牛。在小牛出生后的短時間內(nèi)，通過無菌操作采集其血液，經(jīng)過離心、分離等步驟，提取出血清部分。由于新生牛血清中含有大量的生長因子、細胞因子和其他生物活性物質(zhì)，因此具有較高的營養(yǎng)價值和生物活性。新生牛血清的制備方法：1.采血：在無菌條件下，從小牛頸靜脈或心臟穿刺采血，避免污染。2.離心：將采集到的血液放入離心管中，進行高速離心，使血細胞與血清分層。3.分離：用無菌吸管將上層血清吸出，避免吸取到下層的血細胞。4.過濾：將分離出的血清通過0.22微米的濾膜過濾，去除細菌和病毒
2024
10-22

蛋白電泳條帶大小不合的原因
蛋白電泳條帶大小不合怎么辦，本文為您解答一下。一、蛋白電泳條帶大小不合原因?1.凝膠配制問題?：凝膠配制過程中組分比例不合理、溫度、陽光、雜質(zhì)等外界因素的影響可能導致丙烯酰胺聚合不wanquan，從而影響條帶的分離效果?。?2.電泳條件問題?：電泳時電壓過高、溫度過高、電泳速度過快等條件設(shè)置不當，可能導致條帶大小不合?。?3.樣品處理問題?：樣品未wanquan變性或含有未清除的雜質(zhì)，也可能導致電泳條帶大小不合?。?二、蛋白電泳條帶大小不合解決方法??1.檢查凝膠配制?：確保凝膠配制過程中組分比
2024
10-21

PEG在核酸提取中的具體應(yīng)用
一、PEG是什么？PEG，聚乙二醇是一種高分子聚合物，無刺激性，味微苦，具有良好的水溶性，并與許多有機物組分有良好的相溶性。具有優(yōu)良的潤滑性、保濕性、分散性、粘接性，可作為抗靜電劑及柔軟劑等使用，在化妝品、制藥、化纖、橡膠、塑料、造紙、油漆、電鍍、農(nóng)藥、金屬加工及食品加工等行業(yè)中均有極為廣泛的應(yīng)用。其分子式為HO(CH2CH2O)nH，其中n代表聚合度，決定了PEG的分子量。PEG具有良好的水溶性、無毒性、生物相容性和化學穩(wěn)定性，這些特性使得PEG在生物醫(yī)學領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。二、PEG在核酸提
2024
10-17

qPCR的CT值為何定在15-35之間？
一、擴增曲線擴增曲線是描述PCR動態(tài)進程的曲線，擴增曲線一般以循環(huán)數(shù)(Cyclenumber)為橫坐標,熒光強度(Fluorescenceintensity)或信號量(Signalamount)為縱坐標。典型的擴增曲線可以分成四個時期：基線期、指數(shù)期、線性期和平臺期?；€期：擴增曲線的水平部分，通常在PCR反應(yīng)的前幾個循環(huán)（3-15個循環(huán)）內(nèi)。此階段擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物生成量的變化。儀器軟件會基于這階段的熒光信號計算出基線范圍。指數(shù)期：PCR擴增的指數(shù)增長階段，擴增曲

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