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2013
06-13

酶聯(lián)方法的標(biāo)本收集與實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
臨床檢驗(yàn)常見的標(biāo)本一般包括血液（指血，靜脈血），尿，糞便，腦脊液，胸腹水，前列腺液，精液，陰道分泌物等，這些標(biāo)本收集的時間、方法和保存都有一定的要求。（一）臨床標(biāo)本的收集A、血液標(biāo)本有些生理因素，如吸煙、進(jìn)食、運(yùn)動、情緒波動、妊娠、體位等均可影響血液中某些成分的變化，有些甚至還有晝夜變化。因此血液標(biāo)本的采集應(yīng)盡量避免生理因素干擾，以條件一致為宜，如無法避免，應(yīng)在標(biāo)本上注明該因素。1．外周血一般選取左手無名指內(nèi)側(cè)采血，該部位應(yīng)無凍瘡，炎癥，水腫，破損。如該部位不符合要求，以其他手指部位代替。對燒傷
2013
06-13

ELISA 方法的實(shí)驗(yàn)原理和操作過程.
ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定（Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay）的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。此項(xiàng)技術(shù)自70年代初問世以來，發(fā)展十分迅速，目前已被廣泛用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)的許多領(lǐng)域。（一）原理ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，
2013
06-13

動植物樣品的采集及DNA樣品的提取
動物樣品的采集及處理方法遺傳學(xué)數(shù)據(jù)在野生動物和圈養(yǎng)動物的保護(hù)和管理中變得日益重要。在本文中，我們總結(jié)了一些能簡便而有效地獲得樣品及數(shù)據(jù)的方法。我們在采集樣品之前，對將要進(jìn)行的遺傳學(xué)分析有所了解。然而，采集者并非都是研究者，當(dāng)采集地與實(shí)驗(yàn)室有相當(dāng)距離時，采集者常常要保存好樣品直到有合適的接受者或存放地，這就要求采集者應(yīng)具備一定的經(jīng)驗(yàn)。首先，所有樣品均應(yīng)以個體序號進(jìn)行標(biāo)注，并且應(yīng)寫上種名、性別、采樣者姓名以及采集日期，越詳盡越好，以便同一個體的不同類數(shù)據(jù)可以相互引用，另外，地理來源的標(biāo)注也很重要，需
2013
06-13

實(shí)驗(yàn)室常用細(xì)胞目錄名詞大全
3T3swissSwiss小鼠胚胎成纖維細(xì)胞A549人肺癌細(xì)胞（能產(chǎn)生Keratin）CHOdhfr二氫葉酸缺陷型中國倉鼠卵巢細(xì)胞CHO-K1中國倉鼠卵巢細(xì)胞Cyc-tAg小鼠T淋巴細(xì)胞瘤（SV40T抗原轉(zhuǎn)染）DU145人前列腺癌細(xì)胞FDC-P1小鼠正常骨髓細(xì)胞GH3大鼠垂體瘤細(xì)胞GT1.1人垂體瘤細(xì)胞（分泌促生長激素分泌激素）HEK-293人胚腎細(xì)胞Hela人宮頸癌細(xì)胞MC3T3-E1小鼠胚胎成骨細(xì)胞MCF7人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-435s人乳腺癌細(xì)胞MDA-
2013
06-13

質(zhì)粒提取簡介及問題分析
一、導(dǎo)論質(zhì)粒提取的原理:轉(zhuǎn)自復(fù)旦大學(xué)一位老師的帖子，后面是方法介紹堿裂解法從大腸桿菌制備質(zhì)粒，是從事分子生物學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)室每天都要用的常規(guī)技術(shù)?？墒俏沂昭芯可畮啄炅耍瑤缀鹾翢o例外的是我那些給人感覺什么都知道的學(xué)生卻對堿法質(zhì)粒抽提的原理知之甚少。追其原因，我想大概是因?yàn)椤斗肿涌寺　防锩嬷恢v實(shí)驗(yàn)操作步驟，而沒有對原理進(jìn)行詳細(xì)的論述。這是導(dǎo)致我的學(xué)生誤入歧途的主要原因。后來我發(fā)現(xiàn)其實(shí)是整個中國的相關(guān)領(lǐng)域的研究生水平都差不多，甚至有很多“老師”也是這個狀態(tài)。這就不得不讓人感到悲哀了。我想這恐怕和我們的
2013
06-13

常用熒光染料的激發(fā)和發(fā)射波長
FluorescentDye（熒光染料）Excitation（激發(fā)波長，nm）Emission（發(fā)射波長，nm）Cy2489506GFP（RedShifted）488507YO-PRO-1491509YOYO-1491509Calcein494517FITC494518FluorX494519Alexa488490520Rhodamine110496520ABI,5-FAM494522OregonGreen?500503522OregonGreen?488496524RlboGreen?5005
2013
06-13

DEAE-Sephadex A-50柱層析純化免疫球蛋白
（一）原理DEAE-SephadexA-50（二乙基氨基乙基-葡聚糖A-50）為弱堿性陰離子交換劑。用NaOH將CL-型轉(zhuǎn)變?yōu)镺H-型后，可吸附酸性蛋白。血清中的γ球蛋白屬于中性蛋白（等電點(diǎn)為PH6.85～7.5），其余均屬酸性蛋白。在PH7.2～7.4的環(huán)境中，酸性蛋白均被DEAE-SephadexA-50吸附，只有γ球蛋白不被吸附。因此，通過柱層析γ球蛋白便可在洗脫中先流出,而其他蛋白則被吸附在柱上,從而便可分離獲得純化的IgG。DEAE-sephadexA-50柱層析是離子交換層析的一種。
2013
06-13

淋巴細(xì)胞雜交瘤單克隆抗體技術(shù)
1975年，Kohler和Milstein發(fā)現(xiàn)將小鼠骨髓瘤細(xì)胞和綿羊紅細(xì)胞免疫的小鼠脾細(xì)胞進(jìn)行融合，形成的雜交細(xì)胞既可產(chǎn)生抗體，又可無限增殖，從而創(chuàng)立了單克隆抗體雜交瘤技術(shù)。這一技術(shù)上的突破不僅為醫(yī)學(xué)與生物學(xué)基礎(chǔ)研究開創(chuàng)了新紀(jì)元，也為臨床疾病的診、防、治提供了新的工具。制備單克隆抗體包括動物免疫、細(xì)胞融合、選擇雜交瘤、檢測抗體、雜交瘤細(xì)胞的克隆化、凍存以及單克隆抗體的大量生產(chǎn)，要經(jīng)過幾個月的一系列實(shí)驗(yàn)步驟，下面按照制備單克隆抗體的流程順序，逐一介紹其實(shí)驗(yàn)方法。細(xì)胞融合前準(zhǔn)備細(xì)胞融合，選擇雜交瘤抗
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06-13

免疫血清的制備
撰稿李恩善免疫血清的制備是一項(xiàng)常用的免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)。價、高特異性的免疫血清可作為免疫學(xué)診斷的試劑（如用于制備免疫標(biāo)記抗體等），也可供特異性免疫治療用。免疫血清的效價高低取決于實(shí)驗(yàn)動物的免疫反應(yīng)性及抗原的免疫原性。如以免疫原性強(qiáng)的抗原刺激高應(yīng)答性的機(jī)體，?？色@得價的免疫血清。而使用免疫原性弱的抗原免疫時，則需同時加用佐劑以增強(qiáng)抗原的免疫原性。免疫血清的特異性主要取決于免疫用抗原的純度。因此，如欲獲得高特異性的免疫血清，必須予先純化抗原。此外，抗原的劑量、免疫途徑及注射抗原的時間間隔等，也是影響免疫
2013
06-13

薄基底膜腎?、粜湍z原α鏈分布的免疫組化研究
薄基底膜腎?、粜湍z原α鏈分布的免疫組化研究張承英朱世樂章友康鄭欣鄂潔侯平薄基底膜腎?。═BMN）是以持續(xù)性鏡下血尿?yàn)橹饕憩F(xiàn)的一種遺傳性腎病，腎小球基底膜（GBM）彌漫性變薄為該病惟一重要的病理學(xué)特征。既往關(guān)于Alport綜合征（Alportsyndrome,AS），另外一種以持續(xù)性鏡下血尿,GBM變薄增厚、撕裂、分層為特征的遺傳性腎病，Ⅳ型膠原α鏈分布的免疫組化研究較多，眾多研究表明,AS患者腎小球基底膜Ⅳ型膠原α3、α4、α5鏈表達(dá)缺陷［1］,而關(guān)于薄基底膜腎?、粜湍z原α鏈分布的研究甚少。本
2013
06-13

聯(lián)合檢測血清和腹水IL-6、IL-2、TNF-α對肝硬化合并SBP的診斷價值
趙彩彥劉金星王淑琴甄真周俊英采用ABS-ELISA法（藥盒由比利時Innogentics公司提供）和雙抗體夾心ELISA法（藥盒由法國Immunotech公司或軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院提供）對46例肝炎肝硬化進(jìn)行了血清和腹水中IL-6、IL-2、TNF-α的測定。與正常對照組比較，肝炎肝硬化患者血清和腹水IL-6、TNF-α水平明顯升高，IL-2水平明顯降低。合并自發(fā)性腹膜炎（SBP）患者血清IL-6、TNF-α水平為（33.19±12.31）ng/L,（11.73±4.21）μg/L,腹水為（1420±
2013
06-13

白細(xì)胞介素-2的研究進(jìn)展及應(yīng)用
隨著分子生物學(xué)、免疫學(xué)理論和技術(shù)的發(fā)展，運(yùn)用重組表達(dá)技術(shù)來生產(chǎn)預(yù)防和治療疾病的制品已成為近幾年研究的熱點(diǎn)。白細(xì)胞介素-2是一種具有廣泛生物學(xué)活性的細(xì)胞因子，它能夠有效地提高免疫功能，醫(yī)學(xué)上已用于預(yù)防和治療一些常規(guī)方法難以治療的疾病，如腫瘤等；在獸醫(yī)方面因其能提高疫苗的免疫效果，尤其是在基因工程亞單位苗的免疫效果而倍受重視，展現(xiàn)出廣闊的應(yīng)用前景。一、白細(xì)胞介素-2的受體及其生物學(xué)功能：白細(xì)胞介素-2（IL-2）是一種zui早發(fā)現(xiàn)的具有廣泛生物活性的細(xì)胞因子，在1979年第二屆淋巴因子會議上正式命名
2013
06-13

先天愚型產(chǎn)前篩查的原理？
經(jīng)過近20年的產(chǎn)前診斷經(jīng)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)染色體異常的胎兒檢出率并不理想，如羊水細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果只有2-3%，孕早期的絨毛細(xì)胞檢查發(fā)現(xiàn)異常率為7.5-10%左右。這說明原有高危人群的定義范圍還有待改進(jìn)。例如目前產(chǎn)前診斷適應(yīng)仍以高齡孕婦占絕大多數(shù)，國外為80-90%，國內(nèi)高齡者較少，但在產(chǎn)前診斷中也占1/3左右。而先天愚型兒中只有20%是由高齡孕婦所生。因此如何從普通人群中，特別是年紀(jì)小于35歲的人群中篩選出高危者的問題已經(jīng)引起許多學(xué)者的關(guān)注，并進(jìn)行了有關(guān)研究。近年來已有不少國家采用在孕中期（懷孕15-20周）
2013
06-13

為什么選擇ELISPOT?
ELISPOT斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫分析使細(xì)胞因子分泌過程更加形象。因?yàn)榧?xì)胞因子圍繞在細(xì)胞周圍，在被上清液稀釋之前，會和鄰近細(xì)胞表面的受體結(jié)合，或者降解。細(xì)胞因子和GranzemyBELISPOT實(shí)驗(yàn)是zui有效的體外監(jiān)控CD4或CD8T細(xì)胞抗原的方法。通過測定單個細(xì)胞因子信號及其頻率，可以建立具有不同集落大小的特殊T細(xì)胞庫。ELISPOT實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞因子的*優(yōu)勢☆從1到10，000，000，可以測量體外細(xì)胞因子的分泌頻率，和ELISA以及四聚體染色、細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色相比，具有靈敏度高、特異性好的特點(diǎn)。
2013
06-13

Tumor M2-PK 丙酮酸激酶PK盒子
ELISA檢測試劑盒操作說明書簡介：丙酮酸激酶PK是糖酵解途徑的一個關(guān)鍵酶，目前研究表明，幾乎所有不同組織來源的腫瘤均伴有丙酮酸激酶的異構(gòu)重整體M2-PK的過度表達(dá),故稱為腫瘤型M2-PK（TumorM2-PK，TuM2-PK）。在正常細(xì)胞中，M2-PK主要以三聚體的形式存在，而在腫瘤細(xì)胞中，M2-PK大量表達(dá)并轉(zhuǎn)變?yōu)橹饕远垠w的形式存在。三聚體的M2-PK與磷酸烯醇丙酮酸PEP親和力很高，而二聚體的M2-PK與PEP的親和力則低的多，后者因此導(dǎo)致磷酸烯醇類物質(zhì)的堆積，這有利于腫瘤細(xì)胞進(jìn)行無氧
2013
06-13

流式細(xì)胞術(shù)檢測血小板功能及其臨床應(yīng)用?
血小板功能的檢測包括測定血小板粘附、聚集和活化的能力。然而，在血小板相關(guān)疾病的診斷中，檢測血小板功能的方法常常是有爭議的。這通常是由于方法本身的原因造成的［1］，譬如，靜脈阻滯、抗凝劑選擇、離心，甚至標(biāo)本處理不當(dāng)?shù)纫蛩?，都可?dǎo)致醫(yī)源性血小板激活，影響臨床診斷的價值。這就要求建立一種靈敏、、快速、簡便，可用于臨床常規(guī)檢測血小板功能測定方法。由于血小板的活化程度可由血小板膜糖蛋白表達(dá)水平的高低來判斷，近年來，文獻(xiàn)報道利用流式細(xì)胞術(shù)，特別是全血法流式細(xì)胞術(shù)，檢測血小板膜糖蛋白的表達(dá)［2］。該技術(shù)能靈敏
2013
06-13

天皰瘡（pemphigus）是一類重癥的皮膚病概述?
天皰瘡（pemphigus）是一類重癥的皮膚病。特征為薄壁、易于破裂的大皰，組織病理為棘刺松解所致的表皮內(nèi)水皰，有特征性的免疫學(xué)所見.【病因】天皰瘡是一種自身免疫性疾病。在各型天皰瘡患者血循環(huán)中均存在有抗角朊細(xì)胞間物質(zhì)抗體，而且抗體滴度與病情輕重平行。在表皮器官培養(yǎng)中加入天皰瘡患者血清，48一72小時后可在基底細(xì)胞上部出現(xiàn)棘刺松解現(xiàn)象。棘刺松解的發(fā)生可能與抗原抗體結(jié)合后產(chǎn)生的蛋白酶有關(guān)，已證實(shí)天皰瘡抗體與角朊細(xì)胞結(jié)合后，可使表皮細(xì)胞釋放纖維蛋白溶酶原激活物，后者使纖維蛋白酶系統(tǒng)激活而導(dǎo)致棘刺松解

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