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2017
02-07

膜再生液的配制方法以及注意事項
膜再生液可在不影響抗原蛋白的情況下清除膜上結合的抗體。隨后，可以使用不同的抗體進行下一輪WesternBlot實驗。一般stripping的原理都是利用蛋白變性以及利用beta-mercaptoethanol打開-s-s-，使一抗二抗解聚變性而被洗去，但洗脫的強度是一個關鍵，小了抗體洗不干凈影響re-probe，大了又造成抗原的損失。膜再生液的配制：方法一：需要50℃溫?。㏒trippingBuffer:β-mercaptoethanol342μl；20%SDS5ml；1MTris-ClpH6.
2017
02-07

膜再生液的具體作用有哪些
膜再生液又稱為Western抗體洗脫液，常用于Western中轉移了蛋白的膜的重復利用。適用于Western化學發(fā)光檢測后的蛋白膜的重復利用，尤其適用于PVDF膜，其次為硝酸纖維素膜。那么膜再生液的作用具體有哪些呢？膜再生液的作用：使用strippingbuffer可以去除一抗和二抗，然后可以重新利用膜。使用膜再生液可以對同一張膜進行多次WESTERNBLOT檢測。在室溫條件下，將用過的膜浸泡在膜再生液10-60分鐘，可在不影響抗原蛋白的情況下清除膜上結合的抗體。隨后，可以使用不同的抗體進行下一
2017
02-04

4%多聚甲醛怎么配
多聚甲醛(Paraformalclehyde)又稱固體甲醛，是一類線型短鏈的聚氧甲撐二醇HO(CH2O)nH(式中的n=8--100)混合物，其中還含有少量水份和甲醇。多聚甲醛性狀為甲醛的固體聚合物。白色無定型粉末，有辛辣氣味。其配制方法如下：（1）4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸緩沖液（pH7.3）試劑：多聚甲醛40g0.1mol/L磷酸緩沖液1000ml配制方法：稱取40g多聚甲醛，置于三角燒瓶中，加入500～800ml0.1mol/L磷酸緩沖液（PhosphateBuffer以下簡稱PB
2017
02-03

電極緩沖液中甘氨酸的作用
甘氨酸同Tris（三羥甲基氨基甲烷）一起組成電泳緩沖液中的緩沖對，可以穩(wěn)定電泳過程中的PH值。在SDS-PAGE不連續(xù)電泳中，制膠緩沖液使用的是Tris-HCL緩沖系統，濃縮膠是pH6.7，分離膠pH8.9;而電泳緩沖液使用的Tris-甘氨酸緩沖系統。在濃縮膠中，其pH環(huán)境呈弱酸性，因此甘氨酸解離很少，其在電場的作用下，泳動效率低;而CL離子卻很高，兩者之間形成導電性較低的區(qū)帶，蛋白分子就介于二者之間泳動。由于導電性與電場強度成反比，這一區(qū)帶便形成了較高的電壓梯度，壓著蛋白質分子聚集到一起，濃縮
2017
01-11

Parafilm封口膜怎么使用
Parafilm封口膜具有柔軟性，可塑性，防止水分流失，自動密封性，無味，容易切割，熱塑性塑料，半透明，無色等特點?？梢钥焖儆行У孛芊鈱嶒炂髅?。具有防水防濕的性能，有效阻止樣品發(fā)揮和污染。有效保護無水物質?？梢灾貜驼郫B使用，纏繞在尖銳外形物體上也不會被撕裂。具有良好韌性，21℃時也可拉伸接近兩倍的長度。隨溫度身高，繞韌性和柔軟度相應提升。不耐高溫，68℃時將會軟化具有粘性。物理性質:Parafilm封口膜是半透明的，有柔性的，熱塑性塑料，高性能防水材料，本身為無色，無嗅，無味，厚度僅0.005″
2016
12-22

植物蛋白質提取方法總匯
植物蛋白質提取方法總匯植物蛋白是蛋白質的一種，來源是從植物里提取的，營養(yǎng)與動物蛋白相仿，但是更易于消化。含植物蛋白豐富的是大豆。但在飲食中，植物蛋白和動物蛋白要搭配食用。植物蛋白盡管一般不如動物蛋白好，但仍是人類膳食蛋白質的重要來源。谷類一般含蛋白質6%-10%，不過其中必需氨基酸種或多種含量低（限制氨基酸）。薯類含蛋白質2%-3%。某些堅果類如花生、核桃、杏仁和蓮子等則含有較高的蛋白質（15%-30%）。豆科植物如某些干豆類的蛋白質含量可高達40%左右。特別是大豆在豆類中更為突出。它不僅蛋白質
2016
12-21

轉鐵蛋白應用
轉鐵蛋白（Transferrin）Cas；11096-37-0轉鐵蛋白是血液中一種主要的糖蛋白,負責將肝組織(是鐵貯藏的主要場所)的鐵向其它組織的細胞運輸。沒有結合鐵的轉鐵蛋白稱作脫鐵轉鐵蛋白(apotransferrin),它能夠緊緊結合兩個Fe3,此時稱為鐵結合轉鐵蛋白(ferrotransferrin)。所有生長中的細胞表面都有鐵結合轉鐵蛋白的受體,在中性pH條件下轉鐵蛋白與鐵結合,然后通過內吞作用進入細胞。在細胞內,在內體的酸性環(huán)境下,轉鐵蛋白釋放出鐵,但是仍與膜受體結合在一起,并與受體
2016
12-05

RNAwait（非凍型組織RNA保存液）
RNAwait是一種無毒的可直接使用的樣品儲存液，能使細胞內的RNA與RNA酶分離，可以快速可靠地保存動物組織、細胞內的RNA。組織獲取后立即浸入RNAwait保存液中，在室溫可以保存7天，4℃可以保存4周，-20℃、-80℃標本可以長期保存，RNA穩(wěn)定存在不降解，取出后用各類方法抽提可以獲得高質量的RNA。操作流程：1.根據要保存的各樣本的體積，計算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量應當是組織體積的10倍（如100mg組織約用1mlRNAwait）。2.將RNAwait按需要量分裝
2016
12-02

Tris飽和酚配制及作用
Tris飽和酚是用Tris-HCl（pH8.0）飽和過的重蒸酚，為淺黃色透明液體，有刺激性氣味，上層為Tris鹽酸緩沖液，pH7.8，下層為酚相，內加有抗氧化的8-羥基喹啉。Tris飽和酚用于分離DNA。Tris飽和酚的配置：冰箱取出重蒸酚,室溫放置，之后68度水浴溶化,切勿立即放入68度的水浴中，以防玻璃炸裂，加8－羥基喹啉0.1％和β－巰基乙醇0.2％,（原液14.4MOL/ML），混勻，溶液呈現黃色，倒入分液漏斗中（也可在燒杯中進行）加入等溶劑的1MOL/ML的Tris(PH8.0),反復
2016
11-16

詳解單克隆抗體的制備過程（索萊寶實驗室）
單克隆技術又名雜交瘤技術。由G.K?hler和Milstein1975年創(chuàng)立。主要原理是利用產生抗體的B細胞與腫瘤細胞雜交融合成雜交瘤細胞，生產抗體。單克隆抗體的制備過程主要有以下六個環(huán)節(jié)，具體為抗原指標、免疫動物選擇、免疫程序的確定、免疫、細胞雜交與選擇培養(yǎng)。下面詳細介紹單克隆抗體制備過程每一步的做法。1、抗原制備制備單克隆抗體的免疫抗原，從純度上說雖不要求很高，但高純度的抗原使得到所需單抗的機會增加，同時可以減輕篩選的工作量。因此，免疫抗原是越純越好，應根據所研究的抗原和實驗室的條件來決定。
2016
11-15

Western Blot內參抗體如何選擇
內參抗體種類很多，比如beta-actin、beta-tubunlin、GAPDH、α-tubunlin等，那么針對自己的實驗，我們該如何選擇呢?下面簡單介紹下選擇內參抗體應遵循的原則：一.樣本種屬來源：先要考慮的就是實驗樣本來源于什么物種。1、哺乳動物的組織或者細胞樣本，通常選擇β-actin、β-tubulin、GAPDH、LaminB、HistoneH3、Na,Katpase等。2、植物來源實驗樣本，則可以選擇plantactin、Rubisco等。3、其他來源樣本研究較少，所以就應該參照
2016
11-14

提取植物dna步驟（索萊寶試劑盒）
試劑盒提取植物dna已經獲得廣泛應用。各個生化試劑廠家也都有了dna提取試劑盒產品。索萊寶作為國內生化試劑供應商提供了各類dna提取試劑盒。今天給大家介紹試劑盒提取植物dna步驟。當然是以索萊寶產植物基因組dna提取試劑盒產品為例。使用前先在漂洗液中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶體上的標簽。所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。1、植物組織預處理：取新鮮植物組織（不超過100mg）或干重組織（不超過20mg），于液氮中充分研磨細粉狀，讓液氮自然揮發(fā)。2、將研磨好的植物組織粉末迅速轉移到預先
2016
11-14

提取酵母質粒步驟跟方法
酵母質粒提取可以用試劑盒提取，也可以直接用裂壁酶處理后采用堿裂解法提取質粒。推薦使用索萊寶供應的酵母質粒提取試劑盒，無需使用酚、CCL4等有毒試劑，操作安全。下面我們就用索萊寶酵母質粒提取試劑盒為例講解酵母質粒提取方法和步驟。1.接種單菌落(待檢測酵母細胞)于25mLYNB(補加氨基酸營養(yǎng)物)培養(yǎng)基中，30℃振蕩培養(yǎng)隔夜。2.第二天取一滴菌液于進行顯微鏡下觀察,目鏡用16,物鏡用40倍觀察細胞壁破碎前的狀態(tài),其成桿狀,流動性比較下.3.取10ml的培養(yǎng)酵母菌液,5000g離心3min,棄上清液.
2016
11-14

提取DNA的方法（總結）
dna提取是一項經常要做的實驗，下面我們就總結了四種dna提取方法并做詳細說明和比較。一.濃鹽法提取dna：A.利用RNA和DNA在電解溶液中溶解度不同，將二者分離，常用的方法是用1M氯納提取化鈉抽提,得到的DNP粘液與含有少量辛醇的CCL4一起搖蕩,使乳化,再離心除去蛋白質,此時蛋白質凝膠停留在水相及CCL4相中間，而DNA位于上層水相中,用2倍體積95%乙醇可將DNA鈉鹽沉淀出來.B.也可用0.15MNaCL液反復洗滌細胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脫氧核糖蛋白,再按CCL4---
2016
11-14

生物實驗中瓊脂粉常見問題
問題1：使用瓊脂粉配置的MS培養(yǎng)基顏色明顯變黃？影響實驗？產品批次不一樣，有些批次的瓊脂粉就是顯黃色，不是質量問題，不影響使用。進口產品也有直接指出瓊脂粉是黃色為正?，F象。問題2：凝膠強度？答：凝膠強度（1.5%）≥800g/cm2800-1200g/cm21.5g瓊脂粉溶于100ml水，溶解凝固后要放置20℃恒溫箱中靜置10小時以上，再測定凝膠強度。與溫度，水質等有關。一般瓊脂粉和卡拉膠，夏季使用濃度要比冬季偏高。夏季溫度高，保存時間久，可能會有部分降解，所以要達到同樣凝膠強度的用量就偏高。問
2016
11-14

常用的剛果紅培養(yǎng)基，你知道屬于哪一類培養(yǎng)基嗎？
培養(yǎng)基是供微生物、植物組織和動物組織生長和維持用的人工配制的養(yǎng)料。一般分為天然培養(yǎng)基、組合培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基等，那我們常用的剛果紅培養(yǎng)基屬于哪一類的？剛果紅培養(yǎng)基屬于哪一類培養(yǎng)基：剛果紅培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基,因為后能在培養(yǎng)基上看到因分解纖維素形成的透明圈,在液體培養(yǎng)基中不可能形成透明圈.是鑒定培養(yǎng)基,因為該培養(yǎng)基上也能生長其他微生物,例如有些自養(yǎng)型微生物就能在該培養(yǎng)基上生存；不過只有纖維素分解菌周圍才會形成透明圈,從而將該菌落鑒定出來.也是區(qū)分選擇培養(yǎng)基,例如在配置培養(yǎng)基的時候不添加
2016
11-02

感受態(tài)細胞相關問題
如何選擇合適的宿主菌：1、所選的宿主菌株應對所用質粒的抗生素抗性基因敏感。2、如進行藍/白斑篩選，宿主菌β-半乳糖苷酶的α-肽編碼區(qū)應在染色體或附加體上缺失掉(lacZΔΜ15)。*0和DH5α都能用于藍/白斑篩選。3、要表達重組蛋白，可使用帶有可誘導的T7RNA聚合酶基因的菌株，如BL21(DE3)和BL21(DE3)pLysS。4、使用pGEM載體克隆大片段時(7-8kb)，經轉化的菌株在30℃而不是在37℃生長，更有利于復蘇。作簡單的亞克隆連接實驗，亞克隆轉化效率的感受態(tài)細胞就可滿足克隆需
2016
10-17

凝膠電泳操作注意事項
1.緩沖系統：在沒有離子存在時，電導率小，DNA不遷移，或遷移極慢，在高離子強度的緩沖液中，電導很高并產熱，可能導致DNA變性，因此應注意緩沖液的使用是否正確。長時間高壓電泳時，常更新緩沖液或在兩槽間進行緩沖液的循環(huán)是可取的。2.瓊脂糖：不同廠家、不同批號的瓊脂糖，其雜質含量不同，影響DNA的遷移及熒光背景的強度，應有選擇地使用。3.凝膠的制備：凝膠中所加緩沖液應與電泳槽中的相一致，溶解的凝膠應及時倒入板中，避免倒入前凝固結塊。倒入板中的凝膠應避免出現氣泡，影響電泳結果。如果產生氣泡，可用吸頭或
2016
10-10

實驗室中的化學試劑的防護之十二烷基硫酸鈉
SDS，這是一種常用試劑，全名是十二烷基硫酸鈉，大家經常用到，對于分子研究的科咖們，幾乎每天都會用到。先還是讓我們來看看萊寶百科吧。萊寶百科：十二烷基硫酸鈉（SDS）是一種白色粉末狀物質，易飄飛，是常用的生化試劑，分子式是C12H25NaSO4,CAS號是151-21-3。主要是配置各種溶液，較多用于蛋白質電泳，變性等試驗，也會用于質粒的提取。具有毒性，屬于急性毒性，對呼吸道有刺激作用，容易損傷呼吸道。好了萊寶百科的解釋，我們看完了。知道了的危害，我們來了解一下防護吧！十二烷基硫酸鈉具有容易飄飛
2016
09-23

RNA提取詳解
RNA提取RNA提取試劑盒簡介：RNA是一種重要的遺傳信息分子，因此完整RNA的提取和純化，是進行Northern雜交、RT-PCR、定量PCR等RNA相關研究的重要前提。RNA提取的原理與方法：細胞中的RNA可以分為信使RNA、轉運RNA和核糖體RNA三大類，這三類RNA都存在于細胞質中,因此不同組織總RNA提取的實質就是將細胞裂解，釋放出RNA，并通過不同方式去除蛋白、DNA等雜質，終獲得高純RNA產物的過程。RNA提取流程一、樣品處理從各種不同來源樣品(如細菌、酵母、血液、動物組織、植物組

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