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2016
05-06

MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性步驟及原理
要知道MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性步驟先要知道MTT是什么？MTTMTT是一種粉末狀化學(xué)試劑，全稱為3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide，漢語(yǔ)化學(xué)名為3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽，商品名：噻唑藍(lán)。是一種黃顏色的染料。MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性原理檢測(cè)原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚（Formazan）并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無(wú)此功能。二甲基亞砜（D
2016
05-04

瓊脂糖凝膠電泳常見(jiàn)問(wèn)題
瓊脂糖凝膠電泳是用瓊脂或瓊脂糖作支持介質(zhì)的一種電泳方法。對(duì)于分子量較大的樣品，如大分子核酸、病毒等，一般可采用孔徑較大的瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳分離。瓊脂糖凝膠電泳常見(jiàn)為題都有哪些？、一、DNA帶模糊、1、DNA降解：瓊脂糖凝膠電泳試驗(yàn)中要避免核酸酶污染2、電泳緩沖液陳舊：電泳緩沖液多系使用后，離子強(qiáng)度降解，PH值上升，緩沖能力減弱，從而影響電泳實(shí)驗(yàn)，建議經(jīng)常更換電泳緩沖液。3、所用電泳條件不合適：電泳時(shí)電壓不應(yīng)超過(guò)20V/cm，溫度4、DNA上揚(yáng)量過(guò)多：應(yīng)減少凝膠中DNA上樣量。5、DNA樣含鹽量過(guò)
2016
05-04

瓊脂糖凝膠電泳條件
瓊脂糖凝膠電泳是用瓊脂糖作支持介質(zhì)的一種電泳方法.其分析原理與其他支持物電泳的主要區(qū)別是：它兼有“分子篩”和“電泳”的雙重作用。瓊脂糖凝膠具有網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，物質(zhì)分子通過(guò)時(shí)會(huì)受到阻力，大分子物質(zhì)在涌動(dòng)時(shí)受到的阻力大，因此在凝膠電泳中，帶電顆粒的分離不僅取決于凈電荷的性質(zhì)和數(shù)量，而且還取決于分子大小，這就大大提高了分辨能力。但由于其孔徑相當(dāng)大，對(duì)大多數(shù)蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)其分子篩效應(yīng)微不足道，現(xiàn)廣泛應(yīng)用于核酸的研究中。瓊脂糖凝膠電泳條件電泳緩沖液的pH在6~9之間，離子強(qiáng)度0.02~0.05為適。瓊脂糖凝膠約可區(qū)
2016
05-04

瓊脂糖凝膠電泳緩沖液配制
瓊脂糖凝膠具有網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，物質(zhì)分子通過(guò)時(shí)會(huì)受到阻力，大分子物質(zhì)在涌動(dòng)時(shí)受到的阻力大，因此在凝膠電泳中，帶電顆粒的分離不僅取決于凈電荷的性質(zhì)和數(shù)量，而且還取決于分子大小，這就大大提高了分辨能力。在瓊脂糖凝膠電泳緩沖液又幾種適用于天然雙鏈DNA的電泳。瓊脂糖凝膠電泳緩沖液配置常見(jiàn)瓊脂糖凝膠電泳緩沖液配制（如圖）TBE通常作為5×或10×的貯存液配制和貯存。這種濃的貯存液pH應(yīng)為8.3左右，它在應(yīng)用前稀釋，并用同一種貯存液制備凝膠溶液和瓊脂糖凝膠電泳緩沖液。上述三種電泳緩沖液都比較好用，三者中TAE的緩
2016
05-04

聚丙烯酰胺凝膠電泳原理以及注意事項(xiàng)
聚丙烯酰胺凝膠電泳簡(jiǎn)稱為PAGE（Polyacrylamide?gel?electrophoresis）聚丙烯酰氨凝膠電泳，是以聚丙烯酰胺凝膠作為支持介質(zhì)的一種常用電泳技術(shù)。聚丙烯酰胺凝膠由單體丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺聚合而成，聚合過(guò)程由自由基催化完成。聚丙烯酰胺凝膠電泳作用：用于分離蛋白質(zhì)和寡核苷酸。聚丙烯酰胺凝膠電泳原理：常用的催化聚合方法有兩種：化學(xué)聚合和光聚合。化學(xué)聚合通常是加入催化劑過(guò)硫酸銨（AP）以及加速劑四甲基乙二胺（TEMED），四甲基乙二胺催化過(guò)硫酸銨產(chǎn)生自由基。溶液的pH對(duì)聚
2016
05-04

MRS培養(yǎng)基的配制方法及原理
MRS培養(yǎng)基常用于食品中乳酸菌總數(shù)測(cè)定，自然pH通常是6.2—6.4，在做乳酸菌分離的時(shí)候直接使用自然pH就可以了，如果是做純培養(yǎng)，希望得到交好的菌落，或者是做液體培養(yǎng)，希望得到較多菌體的話，就把pH跳到6.7左右為佳。MRS培養(yǎng)基的原理蛋白胨、牛肉浸粉、酵母浸粉提供氮源、維生素、生長(zhǎng)因子；葡萄糖為可發(fā)酵糖類(lèi)；磷酸氫二鉀為酸堿緩沖劑；檸檬酸氫二銨、硫酸鎂、硫酸錳、吐溫-80和乙酸鈉為培養(yǎng)各種乳酸菌提供生長(zhǎng)因子，其成分還能抑制某些雜菌；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。MRS培養(yǎng)基的配制蛋白胨10.0g牛肉膏
2016
05-04

MRS培養(yǎng)基成分
MRS培養(yǎng)基成分蛋白陳10.0g牛肉粉5.0g酵母粉4.0g葡萄糖20.0g吐溫801.0mL磷酸氫二鉀2.0g乙酸鈉5.0g檸檬酸三銨2.0g硫酸鎂0.2g硫酸錳0.05g瓊脂粉15.0g蒸餾水1000mL改良MRS培養(yǎng)基成分：胰蛋白胨10g磷酸氫二鉀2g葡萄糖20g無(wú)水醋酸鈉3g牛肉浸膏10g檸檬酸三銨2g酵母浸膏5g七水硫酸鎂0.2gX-Gal0.06mg吐溫-801mlL-半胱氨酸0.5g水或MJH水提液1000ml備注：培養(yǎng)基消后用5NNa0H調(diào)pH6.8；MRS培養(yǎng)基配制方法將上述成
2016
05-04

MS培養(yǎng)基成分
MS培養(yǎng)基是目前使用普遍的培養(yǎng)基，用于植物組織培養(yǎng)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基。其具有較高的無(wú)機(jī)鹽濃度，能夠保證組織生長(zhǎng)所需的礦質(zhì)營(yíng)養(yǎng)還能加速愈傷組織的生長(zhǎng)。ME培養(yǎng)基的成分MS培養(yǎng)基的無(wú)機(jī)養(yǎng)分的數(shù)量和比例比較合適，足以滿足植物細(xì)胞在營(yíng)養(yǎng)上和生理上的需要。因此，一般情況下，不用再添加氨基酸、酪蛋白水解物、酵母提取物及椰子汁等有機(jī)附加成分。和其它培養(yǎng)基的基本成分相比，MS培養(yǎng)基中的硝酸鹽、鉀和銨的含量高，這是它的顯著特點(diǎn)。
2016
05-03

MS培養(yǎng)基與微生物培養(yǎng)基的區(qū)別有哪些
MS培養(yǎng)基是其特點(diǎn)是無(wú)機(jī)鹽和離子濃度較高，是較穩(wěn)定的離子平衡溶液，它的硝酸鹽含量高，其養(yǎng)分的數(shù)量和比例合適，能滿足植物細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)和生理需要，因而適用范圍比較廣，多數(shù)植物組織培養(yǎng)快速繁殖用它作為培養(yǎng)基的基本培養(yǎng)基，也是目前使用普遍的植物組織培養(yǎng)基。MS培養(yǎng)基具有較高的無(wú)機(jī)鹽濃度，能夠保證組織生長(zhǎng)所需的礦質(zhì)營(yíng)養(yǎng)還能加速愈傷組織的生長(zhǎng)。由于配方中的離子濃度高，在配制、貯存和消毒等過(guò)程中，即使有些成分略有出入，也不會(huì)影響離子間的平衡。由于植物的多樣性和生長(zhǎng)環(huán)境MS培養(yǎng)基的配制植物組織培養(yǎng)基的復(fù)雜性和多變
2016
05-03

RNA酶的用途及破碎細(xì)胞和滅活RNA酶同步進(jìn)行的方法
RNA酶又名核糖核酸酶，為白色凍干粉末，可以殺滅許多腫瘤細(xì)胞系，可以抑制導(dǎo)致艾滋病的HIV-1病毒在細(xì)胞中的復(fù)制，可以治療乙肝。RNA酶用途說(shuō)明：生化研究，測(cè)定核酸的結(jié)構(gòu)RNase保護(hù)檢測(cè)去除非特異結(jié)合的RNA分析RNA序列水解蛋白樣品中的RNA純化DNA此外，它具有顯著的細(xì)胞毒性，可以殺滅許多腫瘤細(xì)胞系，可以抑制導(dǎo)致艾滋病的HIV-1病毒在細(xì)胞中的復(fù)制，可以治療乙肝。破碎細(xì)胞和滅活RNA酶同步進(jìn)行的方法用強(qiáng)烈變性如鹽酸胍或硫氰酸胍溶液能迅速溶解蛋白質(zhì)，導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)構(gòu)破碎，核蛋白由于其二級(jí)結(jié)構(gòu)的破
2016
05-03

常見(jiàn)的RNA酶抑制劑
RNA酶抑制劑具有廣譜的RNA酶抑制作用，包括中性的真核生物的RNA的抑制作用。?分子量是50kDa的蛋白質(zhì)通過(guò)非共價(jià)鍵與RNA酶以1：1的比例結(jié)合發(fā)揮它的抑制作用。RNA酶抑制劑與RNA酶結(jié)合的有效濃度時(shí)10-14M。而且，RNA酶抑制劑的動(dòng)力學(xué)結(jié)合是非常迅速的，確保與RNA酶的迅速絡(luò)合，并對(duì)其產(chǎn)生迅速的抑制作用。常見(jiàn)的RNA酶抑制劑1、焦碳酸二乙酯（DEPC）：是一種強(qiáng)烈但不*的RNA酶抑制劑，他通過(guò)和RNA酶的活性基因團(tuán)組氨酸的咪唑環(huán)結(jié)合使蛋白質(zhì)變性，從而抑制酶的活性。2、異硫氰酸胍：目前
2016
05-03

如何避免RNA酶的污染
RNA的化學(xué)性質(zhì)比DNA活躍得多。RNA分子上緊鄰磷酸二脂鍵的2′羥基基團(tuán)能直接被RNA酶利用來(lái)作為活性因子，從而使得RNA酶無(wú)需金屬離子就能發(fā)揮活性。由于RNA酶在環(huán)境中廣泛存在，特別是RNaseA，結(jié)構(gòu)極其穩(wěn)定，不能通過(guò)高溫高壓滅菌失活，因而極難消除，對(duì)保持RNA樣品的完整性構(gòu)成極大的威脅。由于RNaseA類(lèi)酶依賴于活性位點(diǎn)處的組氨酸殘基起催化作用，因此能被組氨酸烷化劑DEPC所抑制。避免RNA酶的污染的方法：1．塑料制品：盡可能使用無(wú)菌、一次性塑料制品。已標(biāo)明RNase-free的塑料制品
2016
04-27

福林酚法測(cè)蛋白含量步驟
福林酚法測(cè)蛋白含量早是由Lowry確定的測(cè)定蛋白質(zhì)濃度的基本方法。以后在生物化學(xué)領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用。此法的顯色原理與雙縮脲方法是相同的，只是加入了第二種試劑，即Folin—酚試劑，以增加顯色量，從而提高了檢測(cè)蛋白質(zhì)的靈敏度。福林酚法測(cè)蛋白含量原理：蛋白質(zhì)與福林酚試劑反應(yīng),生成深藍(lán)色復(fù)合物.藍(lán)色的深淺與蛋白質(zhì)含量成正比.可用分光光度計(jì)于500nm波長(zhǎng)下進(jìn)行測(cè)定.與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)照,而確定蛋白質(zhì)含量.福林酚法測(cè)蛋白含量所需試劑Folin—酚試劑：1.試劑甲1)4%碳酸鈉溶液2)0.2mol/L氫氧化鈉溶
2016
04-27

IPTG誘導(dǎo)蛋白表達(dá)步驟說(shuō)明
異丙基硫代半乳糖苷（IPTG）是一種作用*的誘導(dǎo)劑，不被細(xì)菌代謝而十分穩(wěn)定，因此被實(shí)驗(yàn)室廣泛應(yīng)用。當(dāng)有乳糖存在時(shí)，lac操縱子（元）即可被誘導(dǎo)。在這個(gè)操縱子（元）體系中，真正的誘導(dǎo)劑并非乳糖本身。乳糖進(jìn)入細(xì)胞，經(jīng)b－半乳糖苷酶催化，轉(zhuǎn)變?yōu)榘肴樘?。后者作為一種誘導(dǎo)劑分子結(jié)合阻遏蛋白，使蛋白構(gòu)象變化，導(dǎo)致阻遏蛋白與O序列解離、發(fā)生轉(zhuǎn)錄。材料1、誘導(dǎo)表達(dá)材料(1)LB（Luria—Bertani）)培養(yǎng)基酵母膏(Yeastextract)5g蛋白胨(Peptone)10gNaCl10g瓊脂(Agar)
2016
04-27

IPTG誘導(dǎo)原理
異丙基-β-D-硫代半乳糖苷,英文名稱IPTG。為安慰性誘導(dǎo)物，X-gal為生色底物，二者共同用于藍(lán)白斑篩選。IPTG可誘導(dǎo)載體lac操縱子DNA區(qū)段合成β-半乳糖苷酶氨基端片段，該片段可與宿主細(xì)胞編碼的缺陷型β-半乳糖苷酶實(shí)現(xiàn)基因內(nèi)互補(bǔ)(α互補(bǔ))。IPTG誘導(dǎo)原理先E.coli的乳糖操縱子（元）含Z、Y及A三個(gè)結(jié)構(gòu)基因，分別編碼半乳糖苷酶、透酶和乙?；D(zhuǎn)移酶，此外還有一個(gè)操縱序列O、一個(gè)啟動(dòng)序列P及一個(gè)調(diào)節(jié)?基因I。I基因編碼一種阻遏蛋白，后者與O序列結(jié)合，使操縱子（元）受阻遏而處于關(guān)閉狀態(tài)。
2016
04-26

關(guān)于CCK8實(shí)驗(yàn)步驟的敘述
CCK-8為細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒，細(xì)胞增殖是生物體的重要生命特征，細(xì)胞以分裂的方式進(jìn)行增殖。必須強(qiáng)調(diào)指出，通過(guò)細(xì)胞分裂，可以將復(fù)制的遺傳物質(zhì)，平均地分配到兩個(gè)子細(xì)胞中去。可見(jiàn)，細(xì)胞增殖是生物體生長(zhǎng)、發(fā)育、繁殖和遺傳的基礎(chǔ)。CCK8實(shí)驗(yàn)步驟如下。CCK-8實(shí)驗(yàn)步驟1、在96孔板中配置100μl的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時(shí)（37℃，5%CO2）。2、向培養(yǎng)板加入10μl不同濃度的待測(cè)物質(zhì)。3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間（例如：6、12、24或48小時(shí)）。4、向每孔加入10μlCC
2016
04-26

CCK-8實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)及相關(guān)問(wèn)題
CellCountingKit-8簡(jiǎn)稱CCK-8試劑盒，為MTT法的替代方法，是一種基于WST（水溶性四唑鹽，化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測(cè)試劑盒。可用于藥物篩選、細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定、腫瘤藥敏等試驗(yàn)?；盍τ?jì)算：.細(xì)胞活力（％）=[A(加藥)－A(空白)]／[A(0加藥)－A(空白)]×100A（加藥）：具有細(xì)胞、CCK-8溶液和藥物溶液的孔的吸光度A（空白）：具有培養(yǎng)
2016
04-26

IPTG配制的方法及使用說(shuō)明
IPTG是一種作用*的誘導(dǎo)劑，不被細(xì)菌代謝而十分穩(wěn)定，因此被實(shí)驗(yàn)室廣泛應(yīng)用。IPTG溶液的配制很簡(jiǎn)單：在8ml蒸餾水中溶解2gIPTG后，用蒸餾水定容10ml，用0.22μm濾器過(guò)濾除菌，分裝成1ml小份貯存于-20℃。IPTG的使用方法：先把IPTG配制成24mg/ml（100mM）的水溶液，并進(jìn)行過(guò)濾除菌后保存。然后在100ml的瓊脂培養(yǎng)基中，加入100μl的上述溶液、200μl的X-Gal（20?mg/ml的二甲基甲酰胺（DMF）溶液）和100μl的Amp（100mg/ml），制作成IPT
2016
04-25

結(jié)晶紫染液的配制方法
結(jié)晶紫染色液(CrystalVioletStainingSolution)是一種組織或細(xì)胞染色時(shí)常用的可以把細(xì)胞核染成深紫色的染色液。結(jié)晶紫是一種堿性染料，可以和細(xì)胞核中的DNA結(jié)合，從而產(chǎn)生細(xì)胞核染色。結(jié)晶紫染液的配制方法如下：結(jié)晶紫染液的配制結(jié)晶紫(crystalviolet)液：結(jié)晶紫乙醇飽和液(結(jié)晶紫2g溶于20mL95%乙醇中)20mL，1%草酸銨水溶液80mL將兩液混勻置24h后過(guò)濾即成。結(jié)晶紫染液使用方法1.樣品處理a)對(duì)于石蠟切片：二甲苯中脫蠟5-10分鐘。換用新鮮的二甲苯，再脫
2016
04-25

結(jié)晶紫指示劑變色范圍是多少
結(jié)晶紫（又叫甲基紫，俗名紫藥水）pH0.5(綠)～2.0(藍(lán))。以冰醋酸作溶劑，用酸滴定液滴定堿時(shí)，常用的指示劑為結(jié)晶紫，還有α－萘酚苯甲醇（0.2％冰醋酸溶液，其堿式色為黃色，酸式色為綠色）和喹哪啶紅（0.1％甲醇液，其堿式色為紅色，酸式色為無(wú)色）結(jié)晶紫性狀:具有金屬光澤的暗綠色結(jié)晶形粉末。熔點(diǎn)為215℃（分解）。溶于水、乙醇和三氯甲烷,溶液呈紫色。不熔于，濃酸中呈黃色，當(dāng)pH值增大時(shí)其顏色變化是黃→綠→藍(lán)→紫.與Sn4＋、Tl3＋、Au3＋和Sb3＋的鹵絡(luò)陰離子及MoO、ReO等形成締合物,

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