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						上海源葉生物科技有限公司
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            血漿酶炎癥介質(zhì)2012/04/14
            
					
            
				炎癥是針對各種刺激物如感染和組織損傷的一種生理性應(yīng)答。有三個(gè)重要作用：①把效應(yīng)分子和效應(yīng)細(xì)胞輸送到感染部位，增強(qiáng)防御*線M甲對入侵病原體的殺傷；②提供一個(gè)生理屏障，防止感染擴(kuò)散（抗感染炎癥屏障）；③加快損傷組織的修復(fù)。參與炎癥反應(yīng)的介質(zhì)主要包括趨化因子、細(xì)胞因子、血漿酶介質(zhì)和脂類炎癥介質(zhì)。血漿酶介質(zhì)血漿中有四個(gè)酶系統(tǒng)，在一旦出現(xiàn)組織損傷時(shí)可被激活而形成相互作用的網(wǎng)絡(luò)，產(chǎn)生大量炎癥介質(zhì)。血漿酶介質(zhì)及其在炎癥反應(yīng)中的作用（1）激肽系統(tǒng)：組織損傷首先激活血漿酶原Hageman因子（又稱凝血因子Ⅻ），引
					
            
				
            
								
            
					
            基于細(xì)胞物理性狀的免疫細(xì)胞分離方法2012/04/07
            
					
            
				1、根據(jù)各種細(xì)胞比重的差異（1）自然沉降法（2）密度梯度離心法①Ficoll-Hypaque密度梯度離心法：人外周血單個(gè)核細(xì)胞（peripheralbloodmononuclearcell,PBMC）包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞，其體積、形狀和比重與其他細(xì)胞不同，紅細(xì)胞和多核白細(xì)胞比重較大，為1.092左右，而淋巴細(xì)胞和單個(gè)核細(xì)胞比重為1.075左右。利用密度在1.077±0.001g/L之間近于等滲的Ficoll-Hypaque混合溶液（稱為淋巴細(xì)胞分層液）作密度梯度離心時(shí),各種血液成分將按密度梯
					
            
				
            
								
            
					
            MTT比色法檢測IL-2的生物活性2012/03/10
            
					
            
				【基本原理】IL-2的生物活性檢測法是檢測IL-2對靶細(xì)胞（或反應(yīng)細(xì)胞）的促增殖作用的能力。IL-2反應(yīng)細(xì)胞增殖程度可以增殖細(xì)胞中DNA合成或酶活性為指示系統(tǒng)，通過測定3H-TdRDNA摻入量或MTT比色法OD值，并通過與標(biāo)準(zhǔn)品對照，間接測定IL-2的生物活性單位。以下三類細(xì)胞可作為IL-2的檢測細(xì)胞：①IL-2依賴細(xì)胞株，如CTLL，CTLL-2，尤以后者zui常用；②有絲分裂原活化的T淋巴母細(xì)胞；③小鼠胸腺細(xì)胞。下面主要介紹以CTLL-2細(xì)胞作為反應(yīng)細(xì)胞檢測IL-2的生物學(xué)活性，又包括MTT
					
            
				
            
								
            
					
            3H-TdR摻入法檢測IL-2的生物活性2012/03/10
            
					
            
				【材料和試劑】（1）反應(yīng)細(xì)胞：CTLL-2，存活率應(yīng)＞95%。（2）IL-2標(biāo)準(zhǔn)品：倍比稀釋為不同濃度。（3）待測樣品：倍比稀釋為不同濃度。（4）10%Fcs-RPMI-1640*培養(yǎng)液（5）3H-TdR（6）96孔培養(yǎng)板，刻度吸管，毛細(xì)吸管，刻度離心管，離心機(jī)，加樣器（頭），細(xì)胞計(jì)數(shù)板，倒置顯微鏡，超凈工作臺，CO2培養(yǎng)箱，微量細(xì)胞收集儀，玻璃纖維濾紙，?液閃計(jì)數(shù)儀?！静僮鞑襟E】（1）用10%FCS-RPMI-1640培養(yǎng)液洗滌CTLL-2細(xì)胞2次，1000r/min離心5min，以去除原生長
					
            
				
            
								
            
					
            基本術(shù)語和常用測量參數(shù)2012/03/03
            
					
            
				（一）像素與灰度1．像素是構(gòu)成顯示器圖像的zui基本單元，按行和列（X和Y）方向排列成矩列。任何一矩列均對應(yīng)一個(gè)點(diǎn)，這些點(diǎn)稱為像素。單位面積屏幕上像素愈多則圖像愈清晰，即分辨率愈高，顯示的圖像也越細(xì)膩和真實(shí)。數(shù)字圖像的像素越多，灰度量化等級也越多，圖像分析儀分析出的結(jié)果越準(zhǔn)確。但是。當(dāng)像素達(dá)到一定量時(shí)，由于圖像分析儀計(jì)算機(jī)的存儲量和計(jì)算量呈幾何級數(shù)增大，從而減慢了計(jì)算機(jī)的處理速度。2．灰度系指圖像每一像素的明暗（深淺）程度，即該像素的圖像由黑到白變化的量化等級。顯微圖像分析系統(tǒng)的灰度量化等級均為
					
            
				
            
								
            
					
            流式細(xì)胞術(shù)的常用樣品制備方法2012/02/25
            
					
            
				流式細(xì)胞術(shù)的實(shí)驗(yàn)檢測對象是單細(xì)胞懸液，因此，在組織化學(xué)和免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)中欲對待測樣品細(xì)胞進(jìn)行分類計(jì)數(shù)，也需把樣品制備成細(xì)胞懸液，并要求被檢細(xì)胞大小為0．2～80pm，每個(gè)樣品中至少有20000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞濃度為105～107個(gè)／ml。制備成的單細(xì)胞懸液經(jīng)熒光或免疫熒光標(biāo)記即可上機(jī)檢測。1．單層培養(yǎng)細(xì)胞單細(xì)胞懸液的制備（1）棄去培養(yǎng)細(xì)胞（對數(shù)生長期）中的舊培養(yǎng)液，加入1～2ml0．25％胰蛋白酶，倒置顯微鏡下觀察，見細(xì)胞稍變圓時(shí)，停止胰蛋白酶作用。也可直接觀察培養(yǎng)瓶，靜置消化2～3分鐘，待細(xì)胞逐
					
            
				
            
								
            
					
            免疫熒光標(biāo)記樣品2012/02/25
            
					
            
				用于流式細(xì)胞儀檢測的常用熒光素有FITC、TRITC、Cy3、Cy5，PE和PI，在以上各種熒光染料中，PE熒光zui強(qiáng)，適用于弱表達(dá)抗原；FITC*，適用于強(qiáng)表達(dá)抗原，適用范圍廣。1．直接免疫熒光標(biāo)記法取一定量的細(xì)胞懸液（濃度約l×l06個(gè)／m1），直接加入熒光素標(biāo)記抗體進(jìn)行免疫反應(yīng)（如做雙重標(biāo)記或多重標(biāo)記染色，可把幾種標(biāo)記有不同熒光素的抗體同時(shí)加入）。4℃孵育15～30分鐘后，用l／15mol／LPBS（pH7．2～7．4）洗l～2次，加入緩沖液重懸，上機(jī)檢測。本方法操作簡便，結(jié)果準(zhǔn)確，易于
					
            
				
            
								
            
					
            抗神經(jīng)元細(xì)胞核抗體自身抗原2012/02/18
            
					
            
				ANNA—l靶抗原是一組特異地表達(dá)于神經(jīng)元和相關(guān)腫瘤上的35—40kD堿性蛋白。分子克隆研究提示，這組蛋白抗原由三種*的基因：HuD、HuC／ple21和Hel—N1編碼。其中HuD基因位于lp34，HuC／ple21和Hel-N1分別位于19和9號染色體上。ANNA-2靶抗原分別為55k．D和80kD的兩種神經(jīng)元蛋白。Hu抗原是果蠅基因Elav的一種同源基因產(chǎn)物，Elav與果蠅神經(jīng)元分化密切相關(guān)。Elav表達(dá)于神經(jīng)母細(xì)胞的細(xì)胞周期末期，其突變會導(dǎo)致神經(jīng)元分化的停滯和神經(jīng)母細(xì)胞無限制增殖。由于H
					
            
				
            
								
            
					
            抗神經(jīng)元細(xì)胞核抗體自身抗體2012/02/18
            
					
            
				副瘤性腦脊髓炎(Paraneoplasticencephalomyetitis)及感覺神經(jīng)元疾病是與小細(xì)胞肺癌相關(guān)的罕見的神經(jīng)系統(tǒng)疾病。雖然這些疾病少見，但其確診提示肺部腫瘤存在可能性。機(jī)制可能是肺部腫瘤抗原與正常表達(dá)于中樞或周圍神經(jīng)系統(tǒng)抗原存在交叉反伴有小腦功能紊亂的腫瘤患者，血清中存在高滴度的PCA—1表明小腦功能紊亂是副腫瘤性質(zhì)引起。若患者并不是發(fā)生乳腺癌或卵巢癌，或腫瘤未表達(dá)YO抗原，則需進(jìn)一步進(jìn)行乳腺和婦科腫瘤檢查。在非副瘤性小腦變性患者或健康個(gè)體中，未發(fā)現(xiàn)PCA-1。不伴PCD的卵巢
					
            
				
            
								
            
					
            抗糖脂自身抗體自身抗體2012/02/02
            
					
            
				早在1874年，研究證實(shí)腦組織的主要磷脂成分是糖脂。早期對血型抗原研究(ABH，Lewis，F(xiàn)orssman，P組)證實(shí)糖脂中的碳水化合物成分參與抗原決定簇的形成。在中樞(CNS)和外周神經(jīng)系統(tǒng)(PNS)炎性脫髓鞘疾病如多發(fā)性硬化，運(yùn)動神經(jīng)元疾病和格林—巴利(Guillain-Barre)綜合征中，發(fā)現(xiàn)了抗神經(jīng)元糖脂的自身免疫反應(yīng)。在正常免疫網(wǎng)絡(luò)中存在天然抗糖脂自身抗體，可能在清除細(xì)胞碎片、一線抗微生物的宿主抵御機(jī)制(吞噬和內(nèi)化)、調(diào)節(jié)造血、改進(jìn)糖脂在細(xì)胞信號中的效應(yīng)中起作用。磷脂和糖類成分均可
					
            
				
            
								
            
					
            抗髓磷脂堿性蛋白抗體自身抗體2012/02/02
            
					
            
				致病作用雖然：MS的病因不清楚，但有證據(jù)表明，細(xì)胞和體液免疫應(yīng)答均與脫髓鞘疾病的病因有關(guān)。EAE是一種實(shí)驗(yàn)性脫髓鞘自身免疫性疾病，由MBP特異性CD4*T細(xì)胞介導(dǎo)。過繼轉(zhuǎn)移MBP特異性T細(xì)胞給健康的嚙齒動物(小鼠和大鼠)可有效誘發(fā)EAE?？埂狹BP和抗—LPL自身抗體出現(xiàn)于EAE血清中，具有脫髓鞘活性，但抗：MBP、PLP和MAG的多克隆抗體在培養(yǎng)的CNS組織中不能引起脫髓鞘作用。對EAE動物模型僅進(jìn)行過繼轉(zhuǎn)移’MBP特異性抗體也不能引起發(fā)病。B細(xì)胞作為抗原呈遞細(xì)胞(APC)在·EAE發(fā)病中也起
					
            
				
            
								
            
					
            鈣離子通道自身抗體2011/12/10
            
					
            
				1．致病作用患者血清中L型VGCC抗體的效價(jià)與疾病進(jìn)展有一定的相關(guān)性，提示該抗體可能存在病理作用。采用表達(dá)L、N—和P—型VGCCs的神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)顯示，IgG型VGCC抗體具有介導(dǎo)運(yùn)動神經(jīng)元損傷作用。此外，將ALS患者的免疫球蛋白注人小鼠將產(chǎn)生運(yùn)動神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)的特異性改變，包括細(xì)胞內(nèi)鈣增加和細(xì)胞損傷的跡象。2．檢測方法許多ALS患者血清中存在幾種VGCCs自身抗體，但實(shí)際上只有兩種形式的VGCCs抗原能夠用于生化方法檢測血清中的相應(yīng)的自身抗體。①從兔骨骼肌中分離純化的L型VG
					
            
				
            
								
            
					
            促甲狀腺激素受體抗體自身抗原2011/12/10
            
					
            
				促甲狀腺激素受體（Thyrotropinreceptot，TSHR）抗體在被發(fā)現(xiàn)以前，認(rèn)為是引起Grave疾?。℅D）的原因。1956年，Adams等在研究一例垂體外因素GD患者時(shí)發(fā)現(xiàn)一種被稱作長效甲狀腺刺激物（LATS）的異常甲狀腺刺激物可引起GD。LATS屬IgG免疫球蛋白，具有刺激甲狀腺功能的作用。LATS作用頗似TSH，均可與TSHR相作用刺激甲狀腺功能。通過Grave病患者的IgG對”‘PTSH與TSH受體結(jié)合的競爭抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果，證實(shí)LATS為抗TSHR自身抗體。1．定義經(jīng)過多年研究，
					
            
				
            
								
            
					
            甲狀腺非肽激素自身抗原2011/12/03
            
					
            
				早在1956年發(fā)現(xiàn)了接受131I治療的甲狀腺乳頭狀癌患者血清中的T+可與人γ球蛋白結(jié)合。1967年檢測出6名橋本淋巴細(xì)胞甲狀腺炎患者血清中存在抗甲狀腺激素自身抗體（THAA）。此后有越來越多的甲狀腺疾病、非甲狀腺疾病患者或無明顯疾病的健康人血清中發(fā)現(xiàn)抗T4或抗T3自身抗體。1．定義甲狀腺產(chǎn)生的碘化糖蛋白——甲狀腺球蛋白被水解形成T3和T4釋放人循環(huán)。甲狀腺球蛋白（Tg）是THAA中代表性的自身抗原，未變性和變性（熱、酸或堿）的Tg都具有免疫原性，其分子結(jié)構(gòu)中的碘是抗原活性所必需的。血清中99．9
					
            
				
            
								
            
					
            甲狀腺非肽激素自身抗體2011/12/03
            
					
            
				1．致病作用甲狀腺激素在游離狀態(tài)下沒有免疫原性，但當(dāng)與血清蛋白如白蛋白結(jié)合時(shí)，可作為抗原與抗體反應(yīng)。在動物體內(nèi)尤其當(dāng)注射*福氏佐劑時(shí)，Tg能誘導(dǎo)抗甲狀腺激素抗體的產(chǎn)生。Tg是甲狀腺激素的前身，是富含碘的甲狀腺素大分子，通常不存在于血液中，一旦甲狀腺組織受損被釋放入血，則被視為外來的物質(zhì)誘發(fā)自身免疫病。2．檢測方法THAA的檢測有幾種不同的方法，所有方法都包括THAA與標(biāo)定的放射標(biāo)記的甲狀腺激素（或類似物）共孵育、分離和放射性的測定，更為重要的是去除內(nèi)源性甲狀腺激素，以提高分析的靈敏度和精密度。在
					
            
				
            
								
            
					
            甲狀腺過氧化物酶抗體檢測方法臨床意義2011/11/26
            
					
            
				特異的TPO自身抗體檢測的方法有：IIF法、ELISA法、放射免疫法，結(jié)合TPO的鼠單克隆抗體固相競爭法，TPO包被捕獲自身抗體法，和TPO化學(xué)發(fā)光法，其中IIF法為較為常用的篩查方法，以靈長類動物甲狀腺冷凍切片為抗原基質(zhì)的熒光圖形為腺泡上皮細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)呈斑塊狀著染，核陰性。不僅自身免疫性甲狀腺炎患者存在TPO自身抗體，而且無明顯甲狀腺疾病的患者如出現(xiàn)TPO抗體，預(yù)示將有發(fā)生甲·狀腺疾病的可能。TPO自身抗體的效價(jià)與甲狀腺炎組織病理變化有很好的相關(guān)性。然而由于甲狀腺功能在促甲狀腺激素的作用下有很
					
            
				
            
								
            
					
            抗甲狀腺球蛋白抗體自身抗原2011/11/26
            
					
            
				1．定義甲狀腺球蛋白是甲狀腺濾泡中腺質(zhì)的主要成分，在碘的儲存及碘化甲狀腺激素T3和T4合成中*。Tg為一種660kD蛋白，由兩個(gè)330kD單體聚合組成。人Tg基因位于8號染色體上，其mR—NA由8448bp組成，為2767個(gè)氨基酸片段，其中67個(gè)是酪氨酸（每分子是134個(gè)），當(dāng)經(jīng)碘化后這些酪氨酸就是組成甲狀腺激素的惟一的碘化氨基酸。除了進(jìn)一步糖基化外，Tg還要經(jīng)過翻譯后的修飾，包括磷酸化、硫酸化和碘化。2．特性Tg氨基酸結(jié)構(gòu)含三種結(jié)構(gòu)域。N端含有一段重復(fù)10次的約60個(gè)氨基酸的序列，色氨酸、脯氨
					
            
				
            
								
            
					
            抗甲狀腺球蛋白自身抗體2011/11/16
            
					
            
				1956年Witebsky和Rose以免甲狀腺球蛋白（Thyroglobulin，Tg）免疫其他的兔子時(shí)，發(fā)現(xiàn)被免疫的兔子體內(nèi)可產(chǎn)生與兔Tg反應(yīng)的抗體。隨后的研究發(fā)現(xiàn)橋本甲狀腺炎、甲狀腺癌以及一些與甲狀腺相關(guān)的疾病中存在抗Tg抗體。在自身免疫性甲狀腺病中Tg抗體出現(xiàn)較TPO抗體早，因而Tg抗體是甲狀腺發(fā)生自身免疫損傷的一個(gè)較好的血清標(biāo)志物。Burek于1982年對家族中青少年甲狀腺炎的調(diào)查結(jié)果支持這一觀點(diǎn)，認(rèn)為Tg自身抗體很可能是*個(gè)自身免疫標(biāo)志物，隨后是微粒體抗體。致病作用通過轉(zhuǎn)輸T淋巴細(xì)胞，
					
            
				
            
								
            
					
            抗甲狀腺球蛋白抗體檢測方法臨床意義2011/11/16
            
					
            
				過去用于檢測Tg自身抗體的方法有：沉淀試驗(yàn)、間接免疫熒光（11F）、血凝試驗(yàn)、ELISA和放射定量分析。目前常用IIF法和ELISA法。IIF法熒光圖形為在甲狀腺濾泡腔內(nèi)出現(xiàn)波浪狀著染。在甲狀腺炎患者中抗TPO抗體檢測方法的靈敏度稍遜于抗Tg抗體，但實(shí)際上兩者的檢出率不相上下。用高靈敏度方法檢測Tg，可能會降低與疾病相關(guān)的特異性。一些評估Tg自身抗體特異性的研究表明，甲狀腺功能正常的個(gè)體與自身免疫性甲狀腺炎免疫應(yīng)答之間存有一定的差別。正常人亦可產(chǎn)生能識別相同或具有交叉反應(yīng)性抗原表位的抗體。另一方
					
            
				
            
								
            
					
            抗谷氨酸脫羧酶自身抗體2011/11/05
            
					
            
				1．致病作用目前尚無證據(jù)表明GAD與SMS的發(fā)病·相關(guān)。40％的SMS患者GAD抗體陰性，抗體陽性及陰性的SMS患者癥狀無差異。少數(shù)GAD抗體陰性患者存在抗其他突觸小泡神經(jīng)元抗原的自身抗體。這些患者均為女性，并伴有乳腺腫瘤，表明可能有自身免疫性副癌綜合征。尸檢結(jié)果發(fā)現(xiàn)少數(shù)患者腦干和脊髓組織有炎癥反應(yīng)，但大多數(shù)患者中樞神經(jīng)系統(tǒng)沒有免疫反應(yīng)性。流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)60％GAD抗體陽性的SMS患者伴有1型糖尿病、橋本甲狀腺炎、Grave病等自身免疫性疾?。欢鳪AD抗體陰性的SMS患者中僅少數(shù)與自身免疫性疾
					
            
				
            
							
				
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