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						上海源葉生物科技有限公司
            中級會員 | 第15年
            
					
            
				
            
			
            
		
            
	
            
	
	
            
		
            
			
		
            
	
            

            

	
            
		
            
			
			
            
							
            
					
            裂谷熱的臨床特征2011/06/15
            
					
            
				RVFV能感染很多動物，包括綿羊、山羊、牛、駱駝和亞洲水牛。該病對綿羊、山羊、牛較為嚴(yán)重，可引起懷孕動物的流產(chǎn)和新生畜的高度死亡。大齡非懷孕動物也較易感，但臨床抗病性較強(qiáng)，動物的易感性與其本身的遺傳差異有關(guān)，來自非洲以外及RVF非流行地區(qū)的動物對本病較易感，大齡動物及某些品種動物通常不表現(xiàn)臨床癥狀。動物中的疾病表現(xiàn)是相似的，包括發(fā)熱、肝炎和嚴(yán)重的流產(chǎn)，該病的潛伏期較短，羔羊?yàn)?2—36h，可產(chǎn)生高達(dá)41℃的雙相熱，羔羊發(fā)病后于36h內(nèi)死亡。兩周齡以上的動物可能表現(xiàn)zui急性死亡、急性死亡或隱性感
					
            
				
            
								
            
					
            皮張?zhí)烤页恋矸磻?yīng)操作技術(shù)2011/06/11
            
					
            
				①器械與藥品準(zhǔn)備a．設(shè)備器材。大型高壓滅菌器，自動揀皮器、半自動揀皮器或手工揀皮器，反應(yīng)管木架與盤，20ml容量瓶與盤，過濾漏斗，各種量杯，各種容瓶，抗原與血清加注器，帶乳頭的毛細(xì)管，中性濾紙（中性石棉），大恒溫箱等。b．藥品與反應(yīng)成分。0．85％生理鹽水。浸皮液：氯化銨0．85g（鹽皮不加氯化鈉）6。0—8．0。苯酚0．3—0．5g，蒸餾水100ml，pH6.0-8.0炭疽菌粉標(biāo)準(zhǔn)抗原、炭疽沉淀素血清、陰性血清，均由獸醫(yī)生物藥品廠供應(yīng)。②檢樣a．被檢皮張，應(yīng)存放在庫或的地方，須與檢疫合格的皮張
					
            
				
            
								
            
					
            炭疽的實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)診斷技術(shù)2011/06/11
            
					
            
				①檢驗(yàn)材料的采取疑為因炭疽死亡的動物尸體，通常不做剖檢，應(yīng)先自末梢血管采血涂片鏡檢，作初步診斷。不進(jìn)行剖檢的尸體可作局部解剖，采取小塊脾臟，然后將切口用浸透了濃漂白粉液的棉花或紗布堵塞，脾臟妥為包裝后送檢。②鏡檢取病畜瀕死時或剛死亡動物的血液作涂片標(biāo)本，用瑞氏染色法或姬姆薩染色法染色，牛羊炭疽經(jīng)常見到數(shù)量很多的有莢膜炭疽桿菌單個或成對存在，偶有短鏈，菌端平切，莢膜呈深紅紫色。豬炭疽要采取病變部淋巴結(jié)或滲出液涂片檢查。③培養(yǎng)檢查無菌采取病畜瀕死期或剛死動物的病理材料，直接接種于普通瓊脂平板及肉湯培
					
            
				
            
								
            
					
            炭疽流式細(xì)胞分析技術(shù)2011/06/08
            
					
            
				流式細(xì)胞術(shù)（flowcytometry，F(xiàn)CM）是一種可以對細(xì)胞或亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)進(jìn)行快速測量的新型分析技術(shù)和分選技術(shù)。其特點(diǎn)是：①測量速度快，zui快可在1s內(nèi)計測數(shù)萬個細(xì)胞；②可進(jìn)行多參數(shù)測量，可以對同一個細(xì)胞做有關(guān)物理特性、化學(xué)特性的多參數(shù)測量，并具有明顯的統(tǒng)計學(xué)意義；③是一門綜合性的高科技方法，它綜合了激光技術(shù)、計算機(jī)技術(shù)、流體力學(xué)、細(xì)胞化學(xué)、圖像技術(shù)等眾多領(lǐng)域的知識和成果；④既是細(xì)胞分析技術(shù)，又是的分選技術(shù)。FCM的數(shù)據(jù)顯示方式包括單參數(shù)直方圖（his-togram）、二維點(diǎn)圖（dot-pl
					
            
				
            
								
            
					
            炭疽免疫熒光檢測法2011/06/08
            
					
            
				免疫熒光試驗(yàn)（1F）用于炭疽與蠟樣芽孢桿菌繁殖體的鑒別表明：對于吸附反應(yīng)能否*消除交叉反應(yīng)，目前報道不一。IF與其他血清學(xué)診斷方法相比優(yōu)勢在于，能檢測菌群抗原異質(zhì)性。遺憾的是，人工微量流式記數(shù)速度太慢，敏感性也隨之下降。為提高其敏感性，采用流式細(xì)胞記數(shù)儀進(jìn)行記數(shù)。另外，熒光與偶聯(lián)物的穩(wěn)定性、IgG分子內(nèi)聚集可能影響試驗(yàn)的性。結(jié)果表明，炭疽與蠟樣芽孢桿菌芽孢較難區(qū)分，用帶有蠟樣芽孢桿菌芽孢偶聯(lián)物進(jìn)行吸附可大大減少炭疽和蠟樣的交叉反應(yīng)，此時蠟樣芽孢桿菌芽孢的熒光強(qiáng)度不超過炭疽芽孢桿菌芽孢對照的14％
					
            
				
            
								
            
					
            結(jié)核分枝桿菌的確定2011/06/03
            
					
            
				取病變的淋巴結(jié)作成抹片，用萋爾-納爾遜抗酸性染色法進(jìn)行細(xì)菌檢查。其操作方法：1．染液的配制（1）苯酚-品紅染色液堿性晶紅飽和乙醇溶液（每100m1的95％酒精約加3g堿性品紅）10m15％苯酚水溶液90m1二者混合后過濾即配成。（2）3％鹽酸酒精濃鹽酸3ml95％酒精97ml二者混合即配成。（3）駱氏美藍(lán)染色液甲液：美藍(lán)0.3g95％酒精30ml乙液：0．01％氫氧化鉀溶液甲液與乙液相混合即成。2．染色方法涂片在火焰上固定后，滴苯酚-品紅染色液于涂片上，以滴滿為度。在涂片下用火焰加熱至發(fā)生蒸氣，
					
            
				
            
								
            
					
            結(jié)核病的病理變化2011/06/03
            
					
            
				結(jié)核病由于牲畜種類和感染途徑不同，其病變發(fā)生部位和表現(xiàn)形式也有差異，分述如下。（1）豬結(jié)核病宰后檢驗(yàn)時比較常見的是頭頸部淋巴結(jié)結(jié)核，尤以頜下淋巴結(jié)和咽后淋巴結(jié)zui為常見；其次是腸系膜淋巴結(jié)和支氣管淋巴結(jié)結(jié)核?；疾×馨徒Y(jié)呈不同程度的腫大、堅實(shí)、切面有粟粒大小至高梁米粒大結(jié)節(jié)，中心干酪化或鈣化。因病變表現(xiàn)略有不同，所以常見有：結(jié)核性干酪性淋巴結(jié)炎（因淋巴組織除殘存固有的小粱外，都發(fā)生干酪樣壞死，故切面見干酪樣壞死呈放射狀，此時，整個淋巴結(jié)表現(xiàn)高度腫大），彌漫性、增生性、結(jié)核性淋巴結(jié)炎（淋巴結(jié)腫大、
					
            
				
            
								
            
					
            結(jié)核病的免疫學(xué)診斷2011/05/28
            
					
            
				十幾年來國內(nèi)外學(xué)者一直從MT培養(yǎng)濾液中提純蛋白質(zhì)抗原，由于該方法制備蛋白抗原較煩瑣、費(fèi)時。因此，近年來，筆者研究室應(yīng)用基因工程技術(shù)克隆、表達(dá)MT基因，簡便地獲得了大量MT單一的蛋白抗原（如CFPl0、ESAT6、MPT63、MPT64、Ag8、Ag85B、KatG、16ku、3Sku、65ku等蛋白），研究其診斷應(yīng)用價值。（1）血清學(xué)診斷20世紀(jì)70年代應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）法檢測患者血清中結(jié)核特異性抗體，成為結(jié)核病常用的輔助診斷手段之一，尤其是近十幾年來金標(biāo)免疫斑點(diǎn)法檢測抗原抗體反
					
            
				
            
								
            
					
            結(jié)核分子藥敏試驗(yàn)與NAT2基因型分析2011/05/28
            
					
            
				目前已闡明了部分MT耐藥的分子機(jī)制，發(fā)現(xiàn)耐利福平（RFP）是由于其靶分子RNA聚合酶p亞單位的編碼基因rpoB突變所致；耐異煙肼（1NH）與過氧化物酶的編碼基因katG或烯?；€原酶編碼基因inhA操縱子或烷基過氧化氫酶編碼基因ahpC操縱子或9-?；；d體蛋白合成酶編碼基因kasA改變有關(guān)；耐吡嗪酰胺（PZA）是由于其吡嗪酰胺酶編碼基因pncA突變所致；耐乙胺丁醇（EMB）與阿拉伯糖基轉(zhuǎn)移酶的編碼基因embABC操縱子突變有關(guān)；耐鏈霉素（SM）是由于其核糖體蛋白S12編碼基因rpsL和16
					
            
				
            
								
            
					
            確診布氏桿菌病的免疫學(xué)方法2011/05/25
            
					
            
				1．試管凝集試驗(yàn)采集臨床血清，預(yù)先稀釋，取每份預(yù)先稀釋好的4個不同稀釋度的受檢血清分別加入4個凝集試驗(yàn)管內(nèi)，每管o．5ml，加0．5ml20倍稀釋的抗原于受檢血清各試管內(nèi)，并振搖均勻：置3；一40℃溫箱24h，取出檢查并記錄結(jié)果。牛、馬、鹿和駱駝1：100血清稀釋度，鍺、山羊、綿羊和狗1：50血清稀釋度出現(xiàn)“++”以上凝集現(xiàn)象時，受檢血清判定為陽性；牛、馬、鹿、駱駝1；50血清稀釋度，豬、山羊、綿羊、狗1：25血清稀釋度出現(xiàn)“++”以上凝集現(xiàn)象時．受檢血清判定為可疑反應(yīng)。經(jīng)3-4周后重檢，如果仍
					
            
				
            
								
            
					
            現(xiàn)場或牧區(qū)大群檢疫布氏桿菌病的免疫學(xué)方法2011/05/25
            
					
            
				1．虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBT）虎紅平板凝集試驗(yàn)是血清凝集試驗(yàn)（SAT）中較常用的一種方法。我國于1980年開始應(yīng)用，目前應(yīng)用廣泛。其抗原為虎紅染色抗原。將每份血清樣品取25～30uL放在白搪瓷板、塑料板或WHO血凝反應(yīng)板上，在每份血清滴的旁邊加等量抗原，在zui后一滴抗原加上以后立即混合血清和抗原，使其形成直徑約2cra的區(qū)域，室溫下輕微搖晃4min，凡出現(xiàn)可見凝集反應(yīng)者均判為陽性，反之判為陰性。RBT試驗(yàn)敏感，然而，與其他血清學(xué)試驗(yàn)一樣，由于S19疫苗免疫或假陽性反應(yīng)（FPSR）而出現(xiàn)陽性結(jié)果
					
            
				
            
								
            
					
            布氏桿菌病膠體金快速診斷試驗(yàn)2011/05/21
            
					
            
				膠體金快速診斷試驗(yàn)是近年來迅猛發(fā)展的一種診斷新方法。該方法可于15min內(nèi)得出檢測結(jié)果，尤其利于在田間應(yīng)用，可定性檢測血清、血漿或全血樣品中布氏桿菌IgG抗體。該方法利用免疫層析的原理，在硝酸纖維素（NC）膜上進(jìn)行。當(dāng)血清流過NC膜時，蛋白A-膠體金結(jié)合物和血清中的IgG抗體形成復(fù)合物，該復(fù)合物在膜上繼續(xù)向前移動，到達(dá)檢測區(qū)時被包被在NC膜上的布氏桿菌抗原固定，在檢測區(qū)形成一紅色條帶，證明為陽性結(jié)果，反之則為陰性結(jié)果。其試驗(yàn)程序?yàn)樵跇悠烦刂屑尤胙?、血漿或全血，然后加入數(shù)滴沖洗液，15min后觀
					
            
				
            
								
            
					
            布氏桿菌素皮膚試驗(yàn)2011/05/21
            
					
            
				該方法又稱變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)，主要檢測機(jī)體變態(tài)反應(yīng)水平的高低。因?yàn)樽儜B(tài)反應(yīng)一般在感染后20～25天出現(xiàn)，因此不宜做早期診斷。本方法主要用于動物的大群檢疫。用游標(biāo)卡尺測量注射部位皮膚厚度，然后0．1ml布氏桿菌素，在尾褶、肋腹部或頸側(cè)部進(jìn)行皮內(nèi)注射，48～72h后用游標(biāo)卡尺重新測量，局部腫脹變硬為陽性反應(yīng)，但可疑反應(yīng)要小心解釋。皮膚增加厚度為1．5～2mm或以上時應(yīng)判為陽性。本試驗(yàn)具有*的特異性，這樣布氏桿菌素陽性而血清學(xué)陰性的動物可視作感染動物。另外，本試驗(yàn)結(jié)果有助于解釋在無布氏桿菌病的地區(qū)感染有交叉
					
            
				
            
								
            
					
            大腸桿菌病病原學(xué)2011/05/18
            
					
            
				大腸桿菌（Escherchiacoli）為革蘭陰性、中等大小的桿菌，無明顯莢膜，有芽孢，有鞭毛能運(yùn)動，但也有無鞭毛、不運(yùn)動的變異株。對人和動物致病的大腸桿菌不同菌株及其與腸道中正常寄生的非致病性大腸桿菌間，在形態(tài)特征、染色反應(yīng)、培養(yǎng)特性和生化反應(yīng)等方面沒有差別，但近年來的研究表明，它們在抗原結(jié)構(gòu)、質(zhì)粒編碼等方面似乎有一定區(qū)別。大腸桿菌的抗原結(jié)構(gòu)較復(fù)雜，由菌體（O）抗原、表面（K）抗原、鞭毛（H）抗原以及菌毛抗原（F）組成。到目前為止至少有O抗原173種、K抗原1O3種、H抗原6O種、F抗原也正陸
					
            
				
            
								
            
					
            豬丹毒分子生物學(xué)診斷技術(shù)2011/05/18
            
					
            
				日本Okayama大學(xué)的研究者們建立了檢測豬丹毒的PCR方法（1999）。常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)檢測豬丹毒至少要3天，鑒定血清型大約要lo天，而這種PCR法可在5h內(nèi)完成。它使用兩步擴(kuò)增法，先用高度特異性引物組M0101-M0102進(jìn)行初步擴(kuò)增之后，再添加4種特異性寡核苷酸引物組對4種不同血清型豬丹毒的16SrRNA序列進(jìn)行擴(kuò)增。rRNA基因簇包括16SrRNA、23SrRNA、5SrRNA、下游非編碼區(qū)。對該簇編碼的DNA序列進(jìn)行測定，以設(shè)計種特異性PCR檢測系統(tǒng)的引物。豬紅斑丹毒絲菌2型、3型、18型
					
            
				
            
								
            
					
            乳膠顆粒凝集試驗(yàn)（LPAT）檢測與鑒定熱不穩(wěn)定腸毒素2011/05/14
            
					
            
				由Finkelstein等建立，方法如下。①乳膠敏化取lOlL羊抗人源LT-I血清與19OμlpH8、2甘氨酸緩沖鹽水混勻，再加等體積乳膠制劑，混勻，37℃水浴孵育2h，每15min振搖1次，然后加入用上述緩沖液稀釋的O．1％牛血清白蛋白600uL，3Orain而后即可使用。②待檢菌液制備從MacC或EMB或；HE等瓊脂上挑取待檢菌落，在裝有3Ortl的20000U／ml多黏菌素B的Tris-NaCl緩沖液的指形管內(nèi)制成菌懸液，37℃水浴溫育5～3Omin（視菌液濃度而定），離心沉淀細(xì)胞，上清液
					
            
				
            
								
            
					
            夾心紅細(xì)胞免疫試驗(yàn)檢測與鑒定熱不穩(wěn)定腸毒素（LT）2011/05/14
            
					
            
				此法由Germant等（1987）報道，其檢測試劑為CTIgG致敏的綿羊紅細(xì)胞，故反應(yīng)結(jié)果可肉眼直觀。方法是以兔抗CTIgG包被V形聚乙烯板，每孔1OOμL，37□，4h后移至4℃，18h棄去末結(jié)合的抗體，用含O．1％tween-2O的PBS（PBS-T）洗3次，晾干后；加入15Oul熱滅活胎牛血清（5％），37℃作用兒，以封閉未結(jié)合鍵，棄封閉液，再以PBS-T洗滌3次，加入1OOml待檢菌培養(yǎng)物離心上清的濾液（O．22μL），28℃濕盒內(nèi)作用1h，洗滌后加入CT抗體致敏綿羊細(xì)胞（戊二醛法），室
					
            
				
            
								
            
					
            基于特異性抗體的沙門菌病免疫學(xué)檢測方法2011/05/11
            
					
            
				隨著抗體制備技術(shù)的不斷進(jìn)步，特別淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)的出現(xiàn)，使得研究人員能夠制備出高品質(zhì)的抗沙門菌菌體或鞭毛抗原的屬特異性抗體，用以建立一些快速的檢測方法。已建立的沙門菌免疫學(xué)檢測方法有許多種，大致可分為以酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、免疫熒光試驗(yàn)、放射免疫試驗(yàn)為基礎(chǔ)的方法及其他多種以抗體為基礎(chǔ)，利用乳膠凝集、免疫傳感器、免疫擴(kuò)散及免疫色譜技術(shù)的方法。（1）免疫酶技術(shù)在實(shí)踐中，ELISA作為一種沙門菌檢測的高敏感性檢測技術(shù)，由于其安全性、簡便性等方面的優(yōu)點(diǎn)，使其在臨床檢驗(yàn)以及科研中被廣泛應(yīng)用。文其乙等應(yīng)用王志
					
            
				
            
								
            
					
            沙門菌病診斷技術(shù)2011/05/11
            
					
            
				根據(jù)流行病學(xué)、臨床癥狀，只能做出初步診斷，確診需采集發(fā)病動物的血液、內(nèi)臟器官、糞便或采取流產(chǎn)胎兒胃內(nèi)容物、肝、脾組織，做沙門菌的分離和鑒定。病原學(xué)檢測，傳統(tǒng)方法、分子生物學(xué)方法、免疫學(xué)方法等。血清學(xué)檢測：對血清中抗體的檢測（瓊擴(kuò)、ELISA、免疫熒光等）。1．細(xì)菌的分離及鑒定用于沙門菌分析的傳統(tǒng)方法總體可分四個不同階段或步驟。*步是增菌，將樣品加到一種高營養(yǎng)、無選擇性的培養(yǎng)基中，溫度37~C，使沙門菌復(fù)蘇及使所有微生物生長。第二步是選擇性增菌步驟，它使沙門菌生長而使肉湯中同時存在的微生物數(shù)量減少
					
            
				
            
								
            
					
            金葡菌特異性鑒別基因2011/05/07
            
					
            
				在金葡菌的檢測方面，近年來很多學(xué)者逐漸探索了一些有很強(qiáng)特異性的鑒別基因，主要包括如下幾種。a．耐熱核酸酶基因（heatstablenuelease，nuc）。耐熱核酸酶（thermostablenuclease，TNase）是金葡菌的特異性酶，通過檢測TNase酶活性以鑒定金葡菌通常有較好的專一性和準(zhǔn)確性，但也存在一些非金葡菌株可檢測到該酶活性的例子，其原因尚不清楚，可能是由于其可產(chǎn)生與TNase活性相似的酶。編碼酶蛋白的nuc基因已全部定序。通過nuc基因的特異擴(kuò)增來檢測金葡菌已被證實(shí)具有非常
					
            
				
            
							
				
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