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            東曹(上海)生物科技有限公司

            10
            • 2016

              05-31

              液相色譜柱的日常維護(hù)

              液相色譜柱的日常維護(hù):(1)每次開機(jī)時(shí),流速和柱壓要逐漸增加,突然迅速增加,會(huì)使柱床受到?jīng)_擊,引起紊亂,產(chǎn)生空隙(2)在進(jìn)樣前使色譜系統(tǒng)充分平衡,是否平衡可由基線加以判斷(3)在進(jìn)樣前,檢查色譜系統(tǒng)的各個(gè)接頭,通常由此能發(fā)現(xiàn)是否有漏液現(xiàn)象。如有漏液,空氣會(huì)從漏縫進(jìn)入系統(tǒng)引起基線漂移,影響峰高和峰面積的重復(fù)性(4)不要把柱接頭上得太緊,否則易損壞接頭螺紋,引起滲漏(5)不要把柱子放在有氣流的地方或直接放到陽(yáng)光下,氣流和陽(yáng)光都會(huì)使柱子產(chǎn)生溫度梯度造成基線漂移;如果懷疑基線漂移是由溫度梯度引起的,可以
            • 2016

              05-30

              TSKgel色譜柱在單抗藥物研發(fā)中的應(yīng)用實(shí)例

              與傳統(tǒng)小分子藥不同,單抗類蛋白藥是非均一性的結(jié)構(gòu)復(fù)雜的大分子,因此使這類原研藥或仿制藥的研發(fā)與質(zhì)控工作難度增大。通過(guò)液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(LC/MS),結(jié)合蛋白分子量的測(cè)定、異構(gòu)體、氨基酸修飾、糖基化修飾以及聚集情況分析等多種檢測(cè)手段,可對(duì)單抗類藥物進(jìn)行全面的結(jié)構(gòu)表征。利用尺寸排阻色譜法(SEC)的分子空間結(jié)構(gòu)不同的原理可對(duì)抗體的多聚體、抗體片段以及PEG蛋白等進(jìn)行有效分析。在該文獻(xiàn)中,對(duì)原研和仿制藥樣品的非均一性分析(抗體聚集情況分析)時(shí)使用了TSKgelG3000SL色譜柱。硼酸鹽親和色譜
            • 2016

              05-27

              如何保證良好的柱性能與柱壽命

              ◆認(rèn)證閱讀色譜柱使用說(shuō)明書;◆使用填充良好的色譜柱;◆盡量減少壓力波動(dòng),避免機(jī)械及熱沖擊;◆使用保護(hù)柱及在線過(guò)濾器;◆經(jīng)常以強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱;◆充分過(guò)濾樣品及流動(dòng)相,盡量避免雜質(zhì)微粒與強(qiáng)保留成分;◆用穩(wěn)定的固定相(C18zui穩(wěn)定);◆在中等PH值操作(6~8),用有機(jī)緩沖溶液;◆色譜柱使用溫度小于40℃;◆硅膠基質(zhì)的的色譜柱,應(yīng)保持流動(dòng)相的PH值范圍在3.0~8.0;◆在水流動(dòng)相與緩沖溶液中加200ppm的疊氮鈉;◆流動(dòng)相中含有緩沖溶液,應(yīng)注意應(yīng)95∶5的水及有機(jī)溶劑過(guò)渡,有機(jī)溶劑不能低于5%
            • 2016

              05-25

              與傳統(tǒng)HPLC相比,UPLC具有哪些優(yōu)勢(shì)?

              與傳統(tǒng)的液相色譜(HPLC)相比,UPLC具有以下優(yōu)勢(shì):1.高分離度(ultraresolution)根據(jù)液相色譜分離的解析度方程,解析度正比于柱效能的平方根而根據(jù)范迪姆特(VanDeemter)色譜理論,柱效反比于系統(tǒng)固定相粒度大小。UPLC系統(tǒng)運(yùn)用的固定相粒度能達(dá)到1.7μm,根據(jù)上述方程,該系統(tǒng)達(dá)到的效能將比5μm粒度系統(tǒng)高70%,而比3.5μm高40%。2.高速度(ultraspeed)在保證得到同樣質(zhì)量數(shù)據(jù)的前提下,UPLC能提供單位時(shí)間內(nèi)更多的信息量。在不影響解析度的的情況下,小粒度
            • 2016

              05-23

              探討正相色譜柱與反相色譜柱的安裝保存和檢測(cè)

              色譜柱的安裝:1、首先應(yīng)確認(rèn)柱和儀器的接頭以及管路是否匹配。為減少死體積,進(jìn)樣閥、柱子、檢測(cè)器之間的連接管路內(nèi)徑盡可能使用內(nèi)徑較小的管線,同時(shí)控制進(jìn)樣器、色譜柱和檢測(cè)器之間連接管線的長(zhǎng)度。安裝色譜柱之前,確認(rèn)流路系統(tǒng)中的溶劑是否正常。對(duì)分析較復(fù)雜的樣品建議安裝保護(hù)柱。2、為了使色譜柱與儀器系統(tǒng)達(dá)*的連接效果,應(yīng)盡量使用與色譜柱接口相匹配的螺帽和錐形接頭,如原來(lái)的接頭長(zhǎng)期匹配其他類型的色譜柱,建議在連接新色譜柱前應(yīng)檢查匹配情況,避免造成色譜柱的損壞或因色譜柱不匹配造成的漏液。3、使用PEEK材料的
            • 2016

              05-18

              離子色譜儀常見故障解析

              在環(huán)境監(jiān)測(cè)分析室中,離子色譜儀承擔(dān)著降水、地下水和清潔地表水中陰離子的測(cè)定。離子色譜儀在投入運(yùn)行的幾年中,儀器運(yùn)行良好,但也出現(xiàn)了一些問(wèn)題,如系統(tǒng)壓力升高、壓力降低或無(wú)壓力、色譜峰的保留時(shí)間延長(zhǎng)或縮短等。為了確保儀器的正常運(yùn)行,應(yīng)進(jìn)行仔細(xì)排查,確定故障原因,及時(shí)排除故障使得儀器能夠正常運(yùn)行。1、電導(dǎo)檢測(cè)器常見故障電導(dǎo)檢測(cè)器常見故障是檢測(cè)池被污染。故障原因:污染物主要來(lái)源于沒(méi)有經(jīng)過(guò)適當(dāng)前處理的樣品,如濃度過(guò)高、復(fù)雜的樣品基體等。故障現(xiàn)象:基線噪聲變大,靈敏度降低。處理方法:(1)用3mol/LHN
            • 2016

              05-11

              TSKgel丁基疏水色譜柱特點(diǎn)介紹

              疏水色譜柱采用具有適度疏水性的填料,以含鹽水溶液作流動(dòng)相,借助于溶質(zhì)與固定相間的疏水相互作用實(shí)現(xiàn)分離的色譜方法。其保留機(jī)理與反相色譜基本相同,所不同的是其固定相的疏水性不如反相固定相強(qiáng),多為低密度分布的甲基、乙基、丙基、丁基和苯基等。疏水作用色譜主要用于蛋白質(zhì)的分離與純化。TSKgelButyle-NPR丁基疏水色譜柱是一款以粒徑為2.5um的,丁基鍵合無(wú)孔型親水性聚合物基質(zhì)為填充劑的疏水作用色譜柱。適用于蛋白質(zhì)、單抗、酶等生物大分子的分離分析。由于和藥物安全以及生產(chǎn)成本息息相關(guān),對(duì)于重組蛋白藥
            • 2016

              05-09

              凝膠色譜法的凝膠種類及性質(zhì)

              (一)聚丙烯酰胺凝膠聚丙烯酰胺凝膠是一種人工合成凝膠,是以丙烯酰胺為單位,由甲叉雙丙烯酰胺交聯(lián)成的,經(jīng)干燥粉碎或加工成形制成粒狀,控制交聯(lián)劑的用量可制成各種型號(hào)的凝膠。交聯(lián)劑越多,孔隙越小。聚丙烯酰胺凝膠的商品為生物膠-P(Bio-GelP),由日本tosoh的TSKGEL的pw系列,適合蛋白和多糖的純化。即丙烯酰胺和少量交聯(lián)劑甲叉雙丙烯酰胺,在催化劑過(guò)硫酸銨作用下聚合形成凝膠。聚丙烯酰胺(PAM,polyacrylamide)聚丙烯酰胺簡(jiǎn)稱PAM,分子量100~500萬(wàn)。聚丙烯酰胺主要有兩種商
            • 2016

              05-04

              反相色譜柱的平衡方法

              反相色譜柱的平衡方法聚合物基質(zhì)的反相色譜柱采用了聚甲基丙烯酸酯聚合物,制備而成具有不同孔徑和粒徑大小的各種規(guī)格的產(chǎn)品。TSKgel聚合物基質(zhì)反相色譜柱適用于較寬的pH范圍,即使在高pH下也具有很好的重復(fù)性。這類色譜柱在pH2-12下表現(xiàn)出極其穩(wěn)定的化學(xué)特性。因此,在硅膠基質(zhì)色譜柱適用受限的堿性pH下仍然可以使用。反相色譜柱載經(jīng)過(guò)出廠測(cè)試后是保存在乙腈-水中的;由于色譜柱在儲(chǔ)存或運(yùn)輸過(guò)程中固定相可能會(huì)干擾,這會(huì)引起鍵合相的空間結(jié)構(gòu)發(fā)生變化,因此,新的色譜柱在用來(lái)分析樣品之前,請(qǐng)一定要充分平衡色譜柱
            • 2016

              05-04

              陰離子交換色譜柱的清洗方法

              對(duì)于陰離子色譜,通用有三種清洗方式,分別用于清洗酸溶性、堿溶性或有機(jī)污染物,在清洗過(guò)程中必須要確保嚴(yán)格按照清洗過(guò)程進(jìn)行,否則會(huì)引起色譜柱的局部高壓而損壞色譜柱。對(duì)于有機(jī)溶劑清洗色譜柱,需要逐步減少有機(jī)溶劑的量以避免由于混合的流動(dòng)相黏度的變化。(一)選擇合適的清洗溶劑1對(duì)低價(jià)親水污染物:用10倍的淋洗液;2對(duì)高價(jià)親水污染物:用1~3mol/l的鹽酸做淋洗液;3對(duì)金屬污染物:會(huì)引起色譜峰不對(duì)稱性,可采用絡(luò)合劑酸類,如0.2mol/l草酸;4有機(jī)污染物:有機(jī)污染物會(huì)引起色譜柱效降低,可以采用兼容的有機(jī)
            • 2016

              04-25

              反相色譜柱的使用與維護(hù)

              反相柱填料主要以硅膠為基質(zhì),在其表面鍵合非極性的十八烷基官能團(tuán)(ODS)稱為C18柱,其它常用的反相柱還有C8,C4,C2和苯基柱等。另外還有離子交換柱,GPC柱,聚合物填料柱等。一、反相色譜柱的選擇1.柱子的PH值使用范圍反相柱優(yōu)點(diǎn)是固定相穩(wěn)定,應(yīng)用廣泛,可使用多種溶劑。但硅膠為基質(zhì)的填料,使用時(shí)一定要注意流動(dòng)相的PH范圍。一般的C18柱PH值范圍都在2-8,流動(dòng)相的PH值小于2時(shí),會(huì)導(dǎo)致鍵合相的水解;當(dāng)PH值大于7時(shí)硅膠易溶解;經(jīng)常使用緩沖液固定相要降解。一旦發(fā)生上述情況,色譜柱人口處會(huì)塌陷
            • 2016

              04-22

              介紹色譜柱樣品制備和保存相關(guān)知識(shí)

              首先介紹色譜柱的安裝:1、首先應(yīng)確認(rèn)柱和儀器的接頭以及管路是否匹配。為減少死體積,進(jìn)樣閥、柱子、檢測(cè)器之間的連接管路內(nèi)徑盡可能使用內(nèi)徑較小的管線,同時(shí)控制進(jìn)樣器、色譜柱和檢測(cè)器之間連接管線的長(zhǎng)度。安裝色譜柱之前,確認(rèn)流路系統(tǒng)中的溶劑是否正常。對(duì)分析較復(fù)雜的樣品建議安裝保護(hù)柱。2、為了使色譜柱與儀器系統(tǒng)達(dá)*的連接效果,應(yīng)盡量使用與色譜柱接口相匹配的螺帽和錐形接頭,如原來(lái)的接頭長(zhǎng)期匹配其他類型的色譜柱,建議在連接新色譜柱前應(yīng)檢查匹配情況,避免造成色譜柱的損壞或因色譜柱不匹配造成的漏液。3、使用PEE
            • 2016

              04-22

              分享色譜柱的日常維護(hù)方法

              一、色譜柱流動(dòng)相的pH應(yīng)在使用范圍內(nèi)以硅膠為基質(zhì)的反相色譜柱的pH范圍為2——9,流動(dòng)相超過(guò)其pH范圍將會(huì)導(dǎo)致硅膠基質(zhì)流失和鍵合相碳鏈斷裂,使柱效下降,壽命變短。二、去除樣品和流動(dòng)相匯總的固體顆粒樣品和流動(dòng)相中含有固體顆粒物質(zhì)會(huì)堵塞色譜柱篩板,不僅會(huì)引起柱壓的升高,而且也會(huì)引起柱效下降。因此,建議使用超純水和色譜純?cè)噭?,在分析前?duì)樣品進(jìn)行針筒過(guò)濾,流動(dòng)相過(guò)0.45um濾膜。三、使用保護(hù)柱或在線過(guò)濾器保護(hù)柱和在線過(guò)濾器上都有篩板,其孔徑與色譜柱篩板孔徑相同,因此可以阻止固體顆粒物質(zhì)到達(dá)色譜柱,有效
            • 2016

              03-17

              如何延長(zhǎng)液相色譜柱的使用壽命

              1.使用”保護(hù)柱”,能夠延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命。簡(jiǎn)單的說(shuō),”保護(hù)柱”即是很短的色譜柱,填裝和所使用液相色譜柱相同的填料。正確使用裝在液相色譜柱前面的”保護(hù)柱”,可以阻攔一些容易損壞液相色譜柱的物質(zhì)。而達(dá)到延長(zhǎng)柱子壽命的效果。如果使用”保護(hù)柱”不當(dāng)。會(huì)造成反效果。因?yàn)樵诒Wo(hù)柱使用過(guò)程中。如污染達(dá)到一定程度而沒(méi)有及時(shí)更換,累積的雜物很可能會(huì)沖入色譜柱中,反而會(huì)造成色譜柱損壞。因此。使用”保護(hù)柱”時(shí),zui重要的是要知道什幺時(shí)候該換保護(hù)柱。該換的時(shí)候就必須要立即更換。2.選擇高品質(zhì)的柱子,并注意使用方法
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