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						上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
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            遠(yuǎn)慕教您如何驗(yàn)證高壓滅菌器滅菌效果！2021/11/16
            
					
            
				微生物實(shí)驗(yàn)室最少不了的實(shí)驗(yàn)儀器之一就是滅菌器，一般實(shí)驗(yàn)室常用的是高壓蒸汽滅菌器。GB4789.1-2016中要求：實(shí)驗(yàn)設(shè)備應(yīng)定期進(jìn)行檢查和/或檢定（加貼標(biāo)志）、維護(hù)和保養(yǎng)，以確保工作性能和操作安全。但你的滅菌器有沒有類似的檢查呢？如果要做類似的驗(yàn)證，又需要怎么做呢？今天就給大家匯總一下高壓蒸汽滅菌器滅菌效果驗(yàn)證的相關(guān)內(nèi)容。高壓蒸汽滅菌器滅菌效果驗(yàn)證一般有化學(xué)指示劑法、留點(diǎn)溫度計(jì)法、自制測(cè)溫管法和生物指示劑法，每種方法的原理都是相似的，主要是通過(guò)驗(yàn)證滅菌時(shí)滅菌器里的溫度能否達(dá)到要求。我們可以根據(jù)自
					
            
				
            
								
            
					
            實(shí)驗(yàn)室環(huán)境和人體表面微生物的檢查2021/11/15
            
					
            
				一、目的要求1．證明實(shí)驗(yàn)室環(huán)境與體表存在微生物。2．比較來(lái)自不同場(chǎng)所與不同條件下細(xì)菌的數(shù)量和類型。3．體會(huì)無(wú)菌操作的重要性。二、基本原理平板培養(yǎng)基含有細(xì)菌生長(zhǎng)所需要的營(yíng)養(yǎng)成分，當(dāng)取自不同來(lái)源的樣品接種于培養(yǎng)基上，在37℃溫度下培養(yǎng)，1-2天內(nèi)每一菌體即能通過(guò)很多次細(xì)胞分裂而進(jìn)行繁殖，形成一個(gè)可見的細(xì)胞群體的集落，稱為菌落。每一種細(xì)菌所形成的菌落都有它自己的特點(diǎn)，例如菌落的大小，表面干燥或濕潤(rùn)、隆起或扁平、粗糙或光滑，邊緣整齊或不整齊，菌落透明或半透明或不透明，顏色以及質(zhì)地疏松或緊密等。因此，可通
					
            
				
            
								
            
					
            培養(yǎng)基及無(wú)菌水的制備，科研人必看！2021/11/15
            
					
            
				一、基本原理培養(yǎng)基的種類很多，不同微生物所需要的培養(yǎng)基不同。培養(yǎng)基制成后的物理狀態(tài)可分為液體、固體、半固體三種類型。目前所用培養(yǎng)基均為已配制好的生物試劑和紙片。二、器材三角瓶、試管、燒杯、玻棒、天平、搪瓷杯、量筒、鋁箔紙、角匙、杜氏小管、硅膠塞、電爐三、培養(yǎng)基的種類營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基、乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基、伊紅美蘭瓊脂培養(yǎng)基、馬鈴薯-葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（附加抗菌素）、平板計(jì)數(shù)瓊脂、月桂基硫酸鹽胰蛋白凍肉湯、煌綠乳糖膽鹽肉湯、EC肉湯、高鹽察氏瓊脂、三糖鐵瓊脂等四、方法步驟1、培養(yǎng)基的制備
					
            
				
            
								
            
					
            微生物分離和純化的基本原理操作2021/11/15
            
					
            
				一、目的要求掌握倒平板的方法和幾種常用的分離純化物的基本操作技術(shù)。二、基本原理1.從混雜的微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過(guò)程稱為微生物的分離與純化。本實(shí)驗(yàn)采用平板分離法：該方法操作簡(jiǎn)便，普遍用于微生物的分離與純化，其包括兩個(gè)方面：（1）選擇適合于待分離微生物的生長(zhǎng)條件等要求或者加入某種抑制劑造成只利于該微生物生長(zhǎng)，而抑制其它微生物生長(zhǎng)的環(huán)境，從而淘汰一些不需要的微生物；（2）微生物在固體培養(yǎng)基生長(zhǎng)形成的單個(gè)菌落可以是一個(gè)細(xì)胞繁殖而成的集合體，因此可通過(guò)挑取單菌落而獲得一種純培養(yǎng)。獲
					
            
				
            
								
            
					
            牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的特點(diǎn)及制作步驟2021/11/15
            
					
            
				由于這種培養(yǎng)基多用于培養(yǎng)細(xì)菌，因此，要用稀酸或稀堿將其pH調(diào)至中性或微堿性，以利于細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方如下：牛肉膏3g蛋白胨10gNaCl5g瓊脂15—20克水1000mlpH7．4—7．6一、器材牛肉膏，蛋白胨，NaCl，瓊脂；1mol/LNaOH，1mol/LHCl；試管，三角燒瓶，燒杯，量筒，玻棒，培養(yǎng)基分裝器，扭力天平，牛角匙，高壓蒸汽滅菌鍋，pH試紙（pH5．5—9．0），棉花，牛皮紙，記號(hào)筆，麻繩，紗布等。二、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的制作步驟1．稱量按培養(yǎng)基配方比例依
					
            
				
            
								
            
					
            細(xì)胞間消毒方式你知道嗎2021/11/12
            
					
            
				細(xì)胞培養(yǎng)對(duì)無(wú)菌環(huán)境的要求較為嚴(yán)格。微生物污染通常是造成細(xì)胞培養(yǎng)失敗的主要原因，細(xì)胞間的殺菌主要涉及空氣的殺菌，其常見方法如下。紫外線消毒:紫外線是一種低能量的電磁輻射，可殺死多種微生物。革蘭陰性菌最為敏感，其次是陽(yáng)性菌，再次為芽孢，真菌孢子的抵抗力*。紫外線的直接作用是通過(guò)破壞微生物的核酸及蛋白質(zhì)等而使其滅活，間接作用是通過(guò)紫外線照射產(chǎn)生的臭氧殺死微生物。直接照射培養(yǎng)室消毒，用法簡(jiǎn)單，效果好。紫外燈的消毒效果同紫外燈的輻射強(qiáng)度和照射劑量呈正相關(guān)，輻射強(qiáng)度隨燈距離增加而降低，照射劑量和照射時(shí)間呈正
					
            
				
            
								
            
					
            做實(shí)驗(yàn)選擇原代細(xì)胞還是細(xì)胞株？2021/11/12
            
					
            
				各種已被命名和經(jīng)過(guò)細(xì)胞生物學(xué)鑒定的細(xì)胞系或細(xì)胞株，都是一些形態(tài)比較均一、生長(zhǎng)增殖比較穩(wěn)定的和生物性狀清楚的細(xì)胞群。因此凡符合上述情況的細(xì)胞群也可給以相應(yīng)的名稱，即文獻(xiàn)中常稱之為已鑒定的細(xì)胞（CertifiedCells）。已鑒定的細(xì)胞可用于各種實(shí)驗(yàn)研究和生產(chǎn)生物制品，當(dāng)前世界上已建的各種細(xì)胞系（株）已難勝數(shù)。體外培養(yǎng)細(xì)胞的種類和命名體外培養(yǎng)細(xì)胞的名稱，隨培養(yǎng)細(xì)胞技術(shù)的發(fā)展和細(xì)胞種類的增多而演變。最早采用的名稱為細(xì)胞株（Cellstrain），以后又出現(xiàn)細(xì)胞系（CellLine）一詞，兩者曾一度混
					
            
				
            
								
            
					
            遠(yuǎn)慕生物：質(zhì)粒純化方案中的關(guān)鍵步驟2021/11/12
            
					
            
				如今質(zhì)粒純化不再是什么難題，那么做了這么次質(zhì)粒抽提的你了解質(zhì)粒純化的原理嗎？你知道哪些步驟對(duì)質(zhì)粒純化的成功起著關(guān)鍵作用嗎？QIAGEN質(zhì)粒抽提簡(jiǎn)單原理：在堿性條件下裂解細(xì)菌之后，將裂解液以zhi定的鹽濃度加入QIAGEN-tip當(dāng)中。質(zhì)粒DNA將發(fā)生選擇性的結(jié)合而從RNA、蛋白質(zhì)及其他細(xì)胞污染物中被分離出來(lái)。1、制備細(xì)胞裂解產(chǎn)物細(xì)胞產(chǎn)率很大程度上依賴于細(xì)胞裂解質(zhì)量。因此制備澄清的細(xì)胞裂解產(chǎn)物是QIAGEN純化方案中的重要一環(huán)，QIAGEN已經(jīng)仔細(xì)針對(duì)*的裂解條件進(jìn)行了相關(guān)的專業(yè)設(shè)計(jì)。對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行
					
            
				
            
								
            
					
            質(zhì)粒的作用機(jī)制、條件及特點(diǎn)了解下2021/11/12
            
					
            
				質(zhì)粒(plasmid)廣泛存在于生物界，從細(xì)菌、放線菌、絲狀真菌、大型真菌、酵母到植物，甚至人類機(jī)體中都含有。從分子組成看，有DNA質(zhì)粒，也有RNA質(zhì)粒;從分子構(gòu)型看，有線型質(zhì)粒、也有環(huán)狀質(zhì)粒:其表型也多種多樣。細(xì)菌質(zhì)粒是基因工程中最chang用的載體。通常，科學(xué)家利用質(zhì)粒在靶細(xì)胞中進(jìn)行基因的過(guò)表達(dá)。質(zhì)粒的靈活性、兼容性、安全性、經(jīng)濟(jì)性等特性促進(jìn)了分子生物學(xué)家將其應(yīng)用于各種用途。一些常用的質(zhì)粒類型包括：克隆質(zhì)粒、表達(dá)質(zhì)粒、基因下調(diào)質(zhì)粒、基因敲除質(zhì)粒、報(bào)告質(zhì)粒、病毒質(zhì)粒等?？寺≠|(zhì)粒：旨在擴(kuò)增目的D
					
            
				
            
								
            
					
            單細(xì)胞核測(cè)序和單細(xì)胞測(cè)序選擇困難咋辦？2021/11/11
            
					
            
				單細(xì)胞測(cè)序（scRNA-seq）對(duì)于制備的細(xì)胞懸液的細(xì)胞活性和細(xì)胞數(shù)目有著較高的要求，而且必須要求新鮮的樣本，但是那些已經(jīng)凍起來(lái)的樣本庫(kù)里面大量的珍貴樣本，比如腦組織，心臟組織，腫瘤組織等都無(wú)法進(jìn)行scRNA-seq，單細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的出現(xiàn)極大的解決了這個(gè)問題。單細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄組測(cè)序（SingleNucleiRNASequencing，snRNA-seq）：通過(guò)提取樣本單細(xì)胞核，然后分離、標(biāo)記細(xì)胞核，在單細(xì)胞水平研究核基因表達(dá)檢測(cè)的技術(shù)。為腦組織、心臟、腎臟等復(fù)雜組織或一些珍xi凍存樣品提供了單細(xì)
					
            
				
            
								
            
					
            單細(xì)胞蛋白質(zhì)組學(xué)：從小樣本中獲得大見解2021/11/11
            
					
            
				以往，大量細(xì)胞分析提供了蛋白質(zhì)、基因或代謝物的平均值。如今，單細(xì)胞分析正在揭示組織內(nèi)各個(gè)細(xì)胞之間的差異。這些信息將有助于人們從細(xì)胞和分子層面上了解因果關(guān)系，也有助于解釋復(fù)雜的疾病狀態(tài)是如何產(chǎn)生并持續(xù)存在的。大量細(xì)胞分析無(wú)法了解不同的細(xì)胞類型及其功能，它只能提供一個(gè)讀數(shù)，代表細(xì)胞的平均反應(yīng)。這種平均值，不僅包括感興趣的特征（比如細(xì)胞表面標(biāo)志物或其他表型），還包括實(shí)驗(yàn)假象和錯(cuò)誤，因此混淆了特定細(xì)胞對(duì)這些事件的貢獻(xiàn)。對(duì)蛋白質(zhì)組學(xué)而言，單細(xì)胞分析的局限性在于樣本太?。▎蝹€(gè)細(xì)胞）以及它們所含的蛋白質(zhì)數(shù)量極
					
            
				
            
								
            
					
            載體的一些基礎(chǔ)知識(shí)以及如何閱讀質(zhì)粒圖譜2021/11/11
            
					
            
				載體主要有bin毒和非病毒兩大類,其中質(zhì)粒DNA是一種新的非病毒轉(zhuǎn)基因載體。這里主要介紹下一個(gè)合格質(zhì)粒的組成要素、載體的一些基本知識(shí)以及如何閱讀質(zhì)粒圖譜。一、一個(gè)合格質(zhì)粒的組成要素復(fù)制起始位點(diǎn)Ori即控制復(fù)制起始的位點(diǎn)。原核生物DNA分子中只有一個(gè)復(fù)制起始點(diǎn)。而真核生物DNA分子有多個(gè)復(fù)制起始位點(diǎn)?？股乜剐曰蚩梢员阌诩右詸z測(cè)，如Amp+,Kan+多克隆位點(diǎn)MCS克隆攜帶外源基因片段P/E啟動(dòng)子/增強(qiáng)子Terms終止信號(hào)加poly(A)信號(hào)可以起到穩(wěn)定mRNA作用。二、如何閱讀質(zhì)粒圖譜第一步：
					
            
				
            
								
            
					
            慢病毒包裝簡(jiǎn)要步驟及注意事項(xiàng)，科研人注意！2021/11/11
            
					
            
				慢病毒包裝簡(jiǎn)要步驟以六孔板中的1孔為例，每個(gè)樣品需要1×106個(gè)293T細(xì)胞。1.取1.5ml滅菌EP管，加入1.5μg包裝混合質(zhì)粒和0.5μg表達(dá)質(zhì)粒以及250μl的無(wú)血清培養(yǎng)基。輕柔混勻，室溫孵育5min。2.取1.5ml滅菌EP管，取9μl脂質(zhì)體2000l溶于250μl無(wú)血清培養(yǎng)基中。輕柔混勻，室溫孵育5min。3.將DNA溶液和脂質(zhì)體溶液輕柔混勻。室溫孵育20min4.用胰酶消化并記數(shù)293T細(xì)胞。用含血清的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。5.在六孔板中每孔，加入1ml含血清的生長(zhǎng)培養(yǎng)基，再加入DNA-
					
            
				
            
								
            
					
            免疫ELISA測(cè)定錯(cuò)誤結(jié)果的原因分析2021/11/10
            
					
            
				ELISA即酶聯(lián)吸附試驗(yàn)，是一種常用的固相酶免疫測(cè)定方法。Engvall和Perlmann于1971年最先應(yīng)用該法進(jìn)行了IgG定量測(cè)定，并命名為"enzymelinkedimmunosorbentassay(ELISA)"。ELISA的基本原理是：①使抗原（或抗體）結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性；②使抗原（或抗體）與某種酶聯(lián)結(jié)成酶標(biāo)抗原（或抗體），而且此酶標(biāo)抗原（或抗體）既保留其免疫活性，又保留其酶活性；③測(cè)定時(shí)將受檢標(biāo)本（抗體或抗原）和酶標(biāo)抗原（或抗體）按不同步驟與固相載體表面的抗原
					
            
				
            
								
            
					
            細(xì)胞凋亡的原理以及過(guò)程2021/11/10
            
					
            
				細(xì)胞凋亡(apoptosis)具有多種生化特征，包括細(xì)胞皺縮、質(zhì)膜起泡、染色體濃縮（固縮）、細(xì)胞核碎裂（核碎裂）、形成DNA條帶以及細(xì)胞最終被吞噬體吞入。相較于細(xì)胞壞死，凋亡細(xì)胞不會(huì)引發(fā)炎癥反應(yīng)，并且體內(nèi)細(xì)胞凋亡僅作用于單個(gè)細(xì)胞。凋亡和壞死代表了細(xì)胞死亡的兩個(gè)ji端，此外還存在其他變異形式。例如，壞死性凋亡或自噬，它們具有與細(xì)胞壞死和細(xì)胞凋亡相通的一些特性。細(xì)胞死亡的途徑很多，因此研究人員需要認(rèn)真觀察其形態(tài)學(xué)和生化特征，在謹(jǐn)慎選擇的時(shí)間節(jié)點(diǎn)檢測(cè)多個(gè)生化標(biāo)記物，確定具體實(shí)驗(yàn)體系內(nèi)的細(xì)胞死亡機(jī)制。1
					
            
				
            
								
            
					
            遠(yuǎn)慕詳解：重組蛋白究竟是什么？2021/11/10
            
					
            
				重組蛋白的產(chǎn)生是應(yīng)用了重組DNA或重組RNA的技術(shù)從而獲得的蛋白質(zhì)。體外重組蛋白的生產(chǎn)主要包括四大系統(tǒng):原核蛋白表達(dá)，哺乳動(dòng)物細(xì)胞蛋白表達(dá)，酵母蛋白表達(dá)及昆蟲細(xì)胞蛋白表達(dá)。重組蛋白獲得途徑：重組蛋白需要使用表達(dá)系統(tǒng)來(lái)對(duì)其進(jìn)行制備，其獲得途徑可以分為體外方法和體內(nèi)方法。兩種方法的前提都是應(yīng)用基因重組技術(shù)，獲得連接有可以翻譯成目的蛋白的基因片段的重組載體，之后將其轉(zhuǎn)入可以表達(dá)目的蛋白的宿主細(xì)胞從而表達(dá)特定的重組蛋白分子。體外重組蛋白的生產(chǎn)主要包括四大系統(tǒng)：原核蛋白表達(dá)（最chang用的大腸桿菌蛋白表
					
            
				
            
								
            
					
            關(guān)于膠回收的一些心得體會(huì)2021/11/10
            
					
            
				1、提高膠回收量的技巧1)增加電泳時(shí)的上樣量。2)電泳緩沖液用新鮮配制的。3)切膠時(shí)盡量只切有條帶的膠，減小切膠體積：含目的片斷很少的膠就不要要了，不然影響回收率。4)把切的兩塊或多塊膠融化后，無(wú)論多大的體積都用一個(gè)管子，轉(zhuǎn)移到同一個(gè)柱子上。5)溶膠時(shí)所加的溶液可多一點(diǎn)，這樣更有利于DNA與膜的結(jié)合，不過(guò)一般不要多余750ul。6)膠回收的關(guān)鍵是通過(guò)柱子的溶液的鹽濃度、酸堿性(電荷)和疏水性使DNA與柱子結(jié)合。因此，若電泳緩沖液的PH偏高，可在溶膠液中加入10ul(PH5.0，3mol/L的Na
					
            
				
            
								
            
					
            遠(yuǎn)慕淺談：細(xì)菌藥敏試驗(yàn)的影響因素2021/11/09
            
					
            
				近年來(lái)，細(xì)菌感染性疾病嚴(yán)重威脅著人類的健康，抗生素的合理使用是治療和控制此類疾病的有效手段。但是世界各國(guó)面臨著感染菌的耐藥性明顯增多的威脅。雖然新型抗菌藥物不斷出現(xiàn)，但是常見感染菌的耐藥性也在增強(qiáng)。有效而合理的抗生素治療依賴于準(zhǔn)確的抗菌藥敏試驗(yàn)。醫(yī)生越來(lái)越重視根據(jù)藥敏試驗(yàn)的結(jié)果來(lái)選擇用藥，以避免用藥不當(dāng)產(chǎn)生耐藥菌株?？股伢w外藥敏試驗(yàn)結(jié)果的正確與否對(duì)抗生素的選擇至關(guān)重要。藥敏試驗(yàn)的結(jié)果受到諸多因素的影響，如培養(yǎng)基、試紙片以及菌液的濃度等。1培養(yǎng)基細(xì)菌藥敏試驗(yàn)所用的培養(yǎng)基種類較多，多數(shù)情況下，采用
					
            
				
            
								
            
					
            常見7種細(xì)菌鑒定生化反應(yīng)了解一下2021/11/09
            
					
            
				(1)、糖(醇)類發(fā)酵試驗(yàn)不同的細(xì)菌含有發(fā)酵不同糖(醇)的酶,因而發(fā)酵糖(醇)的能力各不相同.其產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物亦不相同,如有的產(chǎn)酸產(chǎn)氣,有的產(chǎn)酸不產(chǎn)氣.酸的產(chǎn)生可利用指示劑來(lái)判定.在配制培養(yǎng)基時(shí)預(yù)先加入溟甲酚紫［PHS.2(黃色)一6.8(紫色)],當(dāng)發(fā)酵產(chǎn)酸時(shí),可使培養(yǎng)基由紫色變?yōu)辄S色.氣體產(chǎn)生可由發(fā)酵管中倒置的杜氏小管中有無(wú)氣泡來(lái)證明.例如：甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)。(2)、甲基紅(Methylred)試驗(yàn)(該試驗(yàn)簡(jiǎn)稱MR試驗(yàn))很多細(xì)菌,如大腸桿菌等分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸,丙酮酸再被分解,產(chǎn)生甲酸、乙酸
					
            
				
            
								
            
					
            菌種保藏中心如何進(jìn)行細(xì)菌鑒定？2021/11/09
            
					
            
				傳統(tǒng)方法常規(guī)宏觀菌落形態(tài)學(xué)觀察,主要觀察菌落在其適合的培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)狀況:細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)形態(tài)、大小、顏色是否均勻一致,菌落個(gè)體表面及邊緣的生長(zhǎng)狀況；在液體培養(yǎng)基上的渾濁狀況、沉淀狀況、液面菌膜狀況；半固體上穿刺接種后,觀察細(xì)菌是否沿著接種線生長(zhǎng)以及其生長(zhǎng)狀態(tài)是呈毛刷樣生長(zhǎng)還是均勻生長(zhǎng),上下生長(zhǎng)是否一致.在鑒別培養(yǎng)基上培養(yǎng),觀察結(jié)果是否跟預(yù)期結(jié)果相同。細(xì)菌的個(gè)體形態(tài)學(xué)觀察,即通過(guò)顯微鏡觀察.觀察前細(xì)菌需要著色,要根據(jù)預(yù)先確定的觀察項(xiàng)目選擇與之相對(duì)應(yīng)的染色方法,目前常用的染色方法包括革蘭氏
					
            
				
            
							
				
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