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細菌的純種分離培養(yǎng)和接種技術(shù)2021/11/09

培養(yǎng)基的制備原理培養(yǎng)基是人工地將多種物質(zhì)按各種微生物生長的需要配置而成的一種混和營養(yǎng)基質(zhì)，用以培養(yǎng)或分離各種微生物。因此，營養(yǎng)基質(zhì)應(yīng)當有微生物所能利用的營養(yǎng)成分（包括碳源、氮源、能源、無機鹽、生長因素）和水。根據(jù)微生物的種類和實驗?zāi)康牟煌?，培養(yǎng)基也有不同的種類和配制方法。操作步驟1、計算稱量根據(jù)配方，計算出實驗中各種藥品所需要的量，然后分別稱(量)取。2、溶解一船情況下，幾種藥品可一起倒入燒杯內(nèi)、先加入少于所需要的總體積水進行加熱溶解。加熱溶解時，要不斷攪拌。如有瓊脂在內(nèi)，更應(yīng)注意。待*溶解后，

重組細胞因子分類及應(yīng)用說明2021/11/08

一、細胞因子的概念細胞因子(cytokine)是由機體多種細胞分泌的小分子蛋白質(zhì)，通過結(jié)合細胞表面的相應(yīng)受體發(fā)揮以調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答為主的生物學(xué)作用。細胞因子具有非常廣泛的生物學(xué)活性，包括促進靶細胞的增殖和分化，增強抗感染和細胞殺傷效應(yīng)，促進或抑制其它細胞因子和膜表面分子的表達，促進炎癥過程，影響細胞代謝等。二、細胞因子的命名細胞因子按其來源可分為：由單個核吞噬細胞產(chǎn)生的細胞因子稱為單核因子(monokine)；由淋巴細胞產(chǎn)生的細胞因子稱為淋巴因子(lymphokine)等。按其作用可分為干擾素、集落

如何促進細胞貼壁你知道嗎2021/11/08

1.適度消化細胞：HepG-2、A549、Hela、SGC-7901幾種癌細胞處理時間可適當放長，一般處理5-6min，C2C12、COS-7、NIH-3T3比較容易脫落，2min足矣，P19Cl6和293細胞貼壁不緊，可在PBS漂洗后，直接換新鮮培養(yǎng)基打散。2.hao用塑料瓶培養(yǎng)，如果是玻璃瓶,那么可以用鼠尾膠原包被一下培養(yǎng)瓶，或者用鹽酸對培養(yǎng)瓶進行蝕刻，或者涂Laminin/fibronectin/collagen/BSA，也可以幫助細胞貼附新的培養(yǎng)瓶，細胞不易貼壁，建議加多聚賴氨酸處理。3

支原體污染對細胞培養(yǎng)的危害！2021/11/08

1.支原體污染的普遍性支原體污染是細胞培養(yǎng)領(lǐng)域遇到的性問題，據(jù)文獻報道，綜合美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）、美國模式菌種收集中心(ATCC)等機構(gòu)收到的相關(guān)數(shù)據(jù)，世界各國細胞系支原體污染的平均比例為30-60%。該數(shù)據(jù)未統(tǒng)計中國大陸的數(shù)據(jù)，但可以確定，大陸地區(qū)的支原體污染比例與此相當，或更嚴重。2.支原體污染的危害根據(jù)已發(fā)表的支原體污染研究文獻，支原體污染細胞后，幾乎能影響每一個細胞參數(shù)。1）支原體污染可能導(dǎo)致細胞染色體的異常和損傷，改變細胞的代謝、生長、形狀、附著。2）支原體影響被污染細胞的

為啥你的細胞長得慢？細胞生長緩慢原因2021/11/08

細胞生長緩慢的常見原因:(1)培養(yǎng)基可能缺乏細胞生長所需的某種因子。通常情況下，當小伙伴購買細胞，并沒有按照ATCC或國內(nèi)細胞庫推薦的方法制備培養(yǎng)基，使用實驗室兄弟姐妹使用的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。解決方法一般是按照推薦的方法制備培養(yǎng)基，或直接購買培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)基。(B)細菌、支原體、真菌等污染:雖然培養(yǎng)基中通常添加雙抗體(青霉素和鏈霉素)，但如果無菌操作觀念不強，仍有可能造成污染。處理方法:如果有冷凍細胞，可以丟棄污染細胞。當然，丟棄并不是隨意的，扔進垃圾桶。應(yīng)按照實驗室生物安全規(guī)定進行。然后復(fù)蘇培

貼壁細胞和懸浮細胞免疫熒光染色方法2021/11/05

貼壁細胞和懸浮細胞免疫熒光染色方法步驟（以間接免疫熒光法為例）1細胞準備與固定（1）單層生長細胞：取對數(shù)生長細胞，用0.25％胰蛋白酶消化，制成單細胞懸液。將細胞接種到預(yù)先放置幾張6×22mm蓋玻片的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)1-3天，待細胞接近長成單層，取出蓋玻片，進入PBS（0.01mol/L,pH7.4）洗2次，然后根據(jù)實驗?zāi)康?，選擇適當固定劑固定細胞。常用固定劑有：95％乙醇（固定時間10-30min），丙酮（5－10min）等。（2)懸浮生長細胞：取對數(shù)生長細胞，用PBS離

秦皮中七葉苷、七葉內(nèi)酯的提取、分離和鑒定2021/11/05

秦皮為本樨科白蠟樹屬植物白蠟樹（FraxinusChinensisPoxb）或苦瀝白蠟樹（F.rhynchophyllaHance）或小葉白蠟樹（F.bungeanaDC）的樹皮,味苦，性微寒。具有清熱、燥濕、收澀作用。主治溫熱痢疾、目赤腫瘤等癥。秦皮中含有多種內(nèi)酯類成分及皂苷、鞣質(zhì)等，其中主要有七葉苷、七葉內(nèi)酯、秦皮苷及秦皮素等。多有抗菌消炎的生理活性，七葉內(nèi)酯對細菌性痢疾、急性腸炎有較好治療效果，兼有退熱作用，毒付作用小，幾無苦味。適于小兒服用。秦皮中主要成分的結(jié)構(gòu)及性質(zhì)1．七葉苷（escu

PBS和D-PBS緩沖溶液怎么配制？2021/11/05

磷酸鹽緩沖液(簡稱PBS)的是生物化學(xué)中常用的一種阻礙溶液pH變化的緩沖溶液，這種由鹽溶液中含有氯化鈉，磷酸鹽，磷酸鹽，lv化鉀和磷酸鉀組成。組份濃度：137mM氯化鈉，2.7mMlv化鉀，10mM磷酸二氫鈉，2mM磷酸2氫鉀。本文總結(jié)了PBS和D-PBS溶液的配制方法。1.常規(guī)PBS磷酸鹽緩沖液組成成份：磷酸2氫鉀34g1mol/L氫氧化鈉溶液175ml蒸餾水825mlPH7.2配制：先將磷酸鹽溶解于500mL蒸餾水中，用1mol/L氫氧化鈉溶液校正pH后，再用蒸餾水稀釋至1000mL。稀釋液

葡聚糖凝膠層析操作步驟，了解下！2021/11/05

1.凝膠的預(yù)處理交聯(lián)葡聚糖凝膠的市售商品多為干燥顆粒，使用前必須充分溶脹。方法是將欲使用的干凝膠緩慢地傾倒入5～10倍的去離子水中，參照相關(guān)資料中凝膠溶脹所需時間，進行充分浸泡，然后用傾倒法除去表面懸浮的小顆粒，并減壓抽氣排除凝膠懸液中的氣泡，準備裝柱。在許多情況下，也可采用加熱煮沸方法進行凝膠溶脹，此法不僅能加快溶脹速率，而且能除去凝膠中污染的細菌，同時排除氣泡。2.裝柱層析柱的選擇一般根據(jù)分離樣品的種類和樣品的數(shù)量而定。純化蛋白質(zhì)時，柱床體積應(yīng)為樣品體積的25～100倍。去除鹽及游離熒光素約

微生物實驗室的培養(yǎng)基類型2021/11/04

在實驗室中配制的適合微生物生長繁殖或累積代謝產(chǎn)物的任何營養(yǎng)基質(zhì)，都叫做培養(yǎng)基(Media)。由于各類微生物對營養(yǎng)的要求不同，培養(yǎng)目的和檢測需要不同，因而培養(yǎng)基的種類很多。我們可根據(jù)某種標準，將種類繁多的培養(yǎng)基劃分為若干類型。1、根據(jù)對培養(yǎng)基組成物質(zhì)的化學(xué)成分是否*了解來區(qū)分，可以將培養(yǎng)基分為天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基和半合成培養(yǎng)基。１）天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基是指利用各種動、植物或微生物的原料，其成分難以確切知道。用作這種培養(yǎng)基的主要原料有：牛肉膏、麥芽汁、蛋白胨、酵母膏、玉米粉、麩皮、各種餅粉、馬鈴薯

細胞培養(yǎng)基的種類與基本成分2021/11/04

細胞培養(yǎng)基是人工模擬細胞在體內(nèi)生長的營養(yǎng)環(huán)境，是提供細胞營養(yǎng)和促進細胞生長增殖的物質(zhì)基礎(chǔ)。培養(yǎng)液或培養(yǎng)基的含義幾乎相同，英文都是medium。當它是粉劑時，傾向性地稱為培養(yǎng)基，而將粉劑配成液體后，多稱為培養(yǎng)液。培養(yǎng)液中常常補加血清、抗生素等成分。由于各類微生物對營養(yǎng)的要求不同，培養(yǎng)目的和檢測需要不同，因而培養(yǎng)基的種類很多。我們可根據(jù)某種標準，將種類繁多的培養(yǎng)基劃分為若干類型。一、根據(jù)對培養(yǎng)基組成物質(zhì)的化學(xué)成分是否*了解來區(qū)分，可以將培養(yǎng)基分為：天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基和半合成培養(yǎng)基。1、天然培養(yǎng)基

幾種細胞凋亡檢測方法比較2021/11/04

細胞凋亡與壞死是兩種*不同的細胞凋亡形式，根據(jù)死亡細胞在形態(tài)學(xué)、生物化學(xué)和分子生物學(xué)上的差別，可以將二者區(qū)別開來。細胞凋亡的檢測方法有很多，下面介紹幾種常用的測定方法。第一種細胞凋亡的形態(tài)學(xué)檢測根據(jù)凋亡細胞固有的形態(tài)特征，人們已經(jīng)設(shè)計了許多不同的細胞凋亡形態(tài)學(xué)檢測方法。1光學(xué)顯微鏡和倒置顯微鏡（1）未染色細胞：凋亡細胞的體積變小、變形，細胞膜完整但出現(xiàn)發(fā)泡現(xiàn)象，細胞凋亡晚期可見凋亡小體。貼壁細胞出現(xiàn)皺縮、變圓、脫落。（2）染色細胞：常用姬姆薩染色、瑞氏染色等。凋亡細胞的染色質(zhì)濃縮、邊緣化，核膜裂

實時熒光定量PCR技術(shù)原理和方法介紹2021/11/04

實時熒光定量PCR（RealtimePCR）是在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號累積實現(xiàn)了實時監(jiān)測整個PCR進程，并對起始模板進行定量分析的方法。其涉及領(lǐng)域包括：臨床疾病診斷、動物檢驗檢疫、食品安全和科學(xué)研究等。在xin型guan狀病毒、肝炎、艾zi病、流感、登革熱、感染性腹瀉等的檢測、診斷和治療上發(fā)揮著重要作用。實時熒光定量PCR法可分別為SYBRGreenl熒光染料法和Taqman探針法。日常進行核酸檢測就是運用Taqman探針法，新guan病毒核酸檢測也是利用此項技術(shù)。該法高度特

血清的這些小秘密你知道嗎2021/11/03

牛血清是細胞培養(yǎng)中用量大的天然培養(yǎng)基，含有豐富的細胞生長必須的營養(yǎng)成份，常用于動物細胞的體外培養(yǎng)，具有極為重要的功能。一、血清的成分血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機物等，這些物質(zhì)對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的。二、血清的功能1.提供對維持細胞指數(shù)生長的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少

動物血清的質(zhì)量問題解答！2021/11/03

在細胞培養(yǎng)實驗中，血清通常作為基礎(chǔ)生長培養(yǎng)基的添加劑。而在實驗過程中是否選擇添加血清，主要根據(jù)基礎(chǔ)培養(yǎng)基化學(xué)成分，培養(yǎng)細胞的類型和培養(yǎng)體系而定。血清的質(zhì)量大大的影響到實驗效果，不少客戶在購買時做出疑問：動物血清以何種條件做到質(zhì)量保證的？一、血清的采集在生產(chǎn)過程中，全血使用無菌一次性塑料袋收集，待凝結(jié)后分離，收集和冷凍儲存血清?？刂瞥跏际占强刂?終血清產(chǎn)品質(zhì)量的關(guān)鍵因素。只有初始原料符合我們的規(guī)范時才能允許生產(chǎn)。二、產(chǎn)品原料的選擇在全球市場存在兩個胎牛血清標準：美國農(nóng)業(yè)部標準（USDA）和歐洲標

微生物細胞、植物細胞與動物細胞在培養(yǎng)上的區(qū)別2021/11/03

微生物細胞培養(yǎng)，簡稱微生物培養(yǎng)，包括原核細胞培養(yǎng)（細菌培養(yǎng)）和真核細胞培養(yǎng)（霉菌培養(yǎng)和酵母培養(yǎng)）。這些細胞小、且具有細胞壁，細胞周期非常短，如細菌每20-30min增殖1次。植物細胞培養(yǎng)指原生質(zhì)體培養(yǎng)。未考慮分離出原生質(zhì)體的植物細胞培養(yǎng)，無論是游離的單細胞或組織塊，都稱作植物組織培養(yǎng)。動物組織細胞培養(yǎng)包括接種單細胞懸液進行的培養(yǎng)、接種組織塊進行的培養(yǎng)。傳代細胞如細胞株、細胞系，通常采用接種單細胞懸液進行的培養(yǎng)，是動物細胞培養(yǎng)常見的方式。原代細胞是指來源于動物組織的細胞團塊，往往包含多種細胞類型，

培養(yǎng)基制備的操作要點合集2021/11/03

制作培養(yǎng)基真真是微生物實驗室的家常便飯，培養(yǎng)基配成后一般需測試并調(diào)節(jié)pH，還須進行滅菌，培養(yǎng)基由于富含營養(yǎng)物質(zhì)，易被污染或變質(zhì)，配制過程中有多個注意事項和操作要點需要我們掌握，接下來就一起看看吧。首先，什么是培養(yǎng)基?培養(yǎng)基，是指供給微生物、植物或動物(或組織)生長繁殖的，由不同營養(yǎng)物質(zhì)組合配制而成的營養(yǎng)基質(zhì)。一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機鹽(包括微量元素)、維生素和水等幾大類物質(zhì)。培養(yǎng)基既是提供細胞營養(yǎng)和促使細胞增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)，也是細胞生長和繁殖的生存環(huán)境。其次，培養(yǎng)基的種類。培養(yǎng)基種類很

改善RNA提取質(zhì)量的十個要點！2021/11/02

RNAse的無處不在導(dǎo)致了RNA的脆弱敏感。要改善RNA提取的質(zhì)量，遠慕為你介紹在RNA純化過程中要特別注意的10個問題。在收獲組織及細胞死亡之后，應(yīng)立即滅活內(nèi)源的RNA酶，以防止RNA降解。以下3個方法均可有效使內(nèi)源RNA酶失活：1）用含離液（如胍鹽）的細胞裂解液收獲樣品，并立即勻漿。2）用液氮瞬間凍結(jié)樣品。值得特別注意的是：組織塊必須保證足夠小，在浸入液氮的瞬間就能凍結(jié)，以確保瞬間令RNA酶失活3）立即將樣品置于RNAlater?TissueCollection:RNAStabilizati

微生物學(xué)檢驗實驗室的規(guī)則及注意事項2021/11/02

一、微生物學(xué)及微生物學(xué)檢驗實驗室的規(guī)則在進行微生物學(xué)實驗時，須時刻牢記實驗的對象是病原微生物，任何疏忽都可能導(dǎo)致嚴重的后果，不僅自身有可能招致感染，且有可能將病原微生物傳給他人。因此決不能有絲毫僥幸心理，冒任何不必要的危險。進入實驗室時必須遵守下列規(guī)則。1.進實驗室時必須穿白大衣﹒離室時脫下反折，白大衣要經(jīng)常清洗消毒。2.每次實驗后均要用肥皂洗手，必要時用消du藥水泡手。3.書包、衣物等勿帶入實驗室，必要的文具、實驗指導(dǎo)、筆記等帶入后，放在zhi定的地方。4.每次實驗后均用消du藥水擦洗工作臺面

植物DNA提取中的常見問題解答2021/11/02

提取植物DNA時遇到多糖成分的干擾，DNA質(zhì)量一直不高，如何消除多糖的影響？參考見解：一般來說，SDS法提取的DNA會還有較多的多糖，使DNA成膠凍狀。而CTAB法提取可基本上除去多糖。如果是植物材料本身含糖量比較高，可用以下方法試一試：1、在DNA未溶出之前，先用一些緩沖液洗去多糖。如可用緩沖液：100mmol/LTris-HCl(pH=8.0)、5mmol/LEDTA和0.35mol/LSorbitol洗幾次。2、使DNA提取液中的多糖先沉淀。在提取液中加入0.35倍體積的無水乙醇，迅速混勻