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細胞培養(yǎng)的一般過程科普2023/09/11

細胞培養(yǎng)（cellculture）是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境（無菌、適宜溫度、酸堿度和一定營養(yǎng)條件等），使之生存、生長、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的一種方法。細胞培養(yǎng)也叫細胞克隆技術(shù)，在生物學中的正規(guī)名詞為細胞培養(yǎng)技術(shù)。細胞培養(yǎng)的一般過程如下：一、準備工作準備工作對開展細胞培養(yǎng)異常重要，工作量也較大，應(yīng)給予足夠的重視，推備工作中某一環(huán)節(jié)的疏忽可導致實驗失敗或無法進行。準備工作的內(nèi)容包括器皿的清洗、干燥與消毒，培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌，無菌室或超凈臺的清潔與消毒，培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試。

介紹洗滌ELISA平板的技巧2023/09/08

優(yōu)化ELISA的重點之一在于洗滌。洗滌步驟可降低未結(jié)合抗體所引起的背景信號，從而增加分析的信噪比。每一步之間的洗滌確保只有特異的結(jié)合事件被保留，在最后一步產(chǎn)生信號。而不充分的洗滌會導致差異和高背景，從而帶來不理想的結(jié)果。下面介紹一些利用自動洗板機來洗滌ELISA平板的技巧。1、洗滌參數(shù)：第一個主要的參數(shù)是洗滌量。自動洗板機會分配洗滌液。如果你之前遭遇過高背景，那么不要猶豫，將洗滌量調(diào)為高，最好是比包被體積更高。太少的洗滌液會讓一部分分析表面洗滌不到，從而明顯增加背景。所有反應(yīng)孔的洗滌量必須相同。

標準溶液作為基準物質(zhì)的要求2023/08/28

標準溶液是指已知準確濃度的溶液，它是滴定分析中進行定量計算的依據(jù)之一。不論采用何種滴定方法，都離不開標準溶液。因此，正確地配制標準溶液，確定其準確濃度，妥善地貯存標準溶液，都關(guān)系到滴定分析結(jié)果的準確性。配制標準溶液的直接配制法一般如下：用分析天平準確地稱取一定量的物質(zhì)，溶于適量水后定量轉(zhuǎn)入容量瓶中，稀釋至標線，定容并搖勻。根據(jù)溶質(zhì)的質(zhì)量和容量瓶的體積計算該溶液的準確濃度。能用于直接配制標準溶液的物質(zhì)，稱為基準物質(zhì)或基準試劑，它也是用來確定某一溶液準確濃度的標準物質(zhì)。作為基準物質(zhì)必須符合下列要求：

培養(yǎng)基滅菌效果取決因素解讀2023/08/21

培養(yǎng)基滅菌，影響因素很多，除了培養(yǎng)基內(nèi)雜菌的種類和數(shù)量，滅菌溫度的高低，時間長短外，還取決于：1.營養(yǎng)成分的保持濕熱滅菌時，微生物被殺死的同時，培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分也遭到了一定的破壞，特別是氨基酸和維生素。如在121℃，僅20min，就有59%的賴氨酸和精氨酸及其他堿性氨基酸被破壞，蛋氨酸和色氨酸也有相當數(shù)量被破壞。在熱的作用下某些營養(yǎng)成分還可能因受熱而相互之間發(fā)生反應(yīng)，造成培養(yǎng)基中原有營養(yǎng)成分的數(shù)量變化，因而影響培養(yǎng)基質(zhì)量。2.微生物的耐熱性細菌芽孢的熱阻較大，滅菌所需要的時間取決于把細菌芽孢減少

細胞因子生物學特點及功能2023/08/16

細胞因子（CK）是由活化免疫細胞和非免疫細胞（如某些基質(zhì)細胞）合成分泌的能調(diào)節(jié)細胞生理功能、參與免疫應(yīng)答和介導炎癥反應(yīng)等多種生物學效應(yīng)的小分子多肽或糖蛋白，是不同于免疫球蛋白和補體的又一類免疫分子。根據(jù)來源zui初將活化淋巴細胞產(chǎn)生的細胞因子稱為淋巴因子（LK），將單核-吞噬細胞產(chǎn)生的細胞因子稱為單核因子（MK）。目前根據(jù)功能，細胞因子大致分為以下六類：白細胞介素；干擾素（IFN）；腫瘤壞死因子（TNF）；集落刺激因子（CSF）；生長因子和趨化因子。細胞因子生物學功能：1.介導和調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答2.

熒光定量PCR中各個環(huán)節(jié)的對照2023/08/07

對照的目的是對檢測的各個環(huán)節(jié)進行監(jiān)控，因此我們按照檢測的流程對對照進行梳理。常規(guī)熒光定量PCR的流程是：樣品采集-運輸-樣品處理-核酸提取-反轉(zhuǎn)錄（RNA病毒）-擴增-結(jié)果讀取。下面看看各個環(huán)節(jié)都可以使用哪些對照？1.陽性對照和陰性對照陽性對照和陰性對照是指在相同的處理條件下，比如一份已知的感染樣品和一份已知的未感染樣品，都進行了提取和擴增最終獲得了陽性結(jié)果和陰性結(jié)果。陰陽性對照強調(diào)處理過程與樣品一致，并且有明確的預(yù)期結(jié)果。2.擴增對照我們通常說的陽性對照和陰性對照指的是擴增試劑盒中附帶的不需要

血清使用實驗人必看注意事項2023/08/01

細胞培養(yǎng)液中添加的血清有牛血清、馬血清、人血清等，其中牛血清是zui常用的血清，分為胎牛血清和新生小牛血清。胎牛血清是從母牛破腹取出的胎牛中分離出的血清，價格昂貴。新生小牛血清是從剛出生的尚未哺乳的小牛中分離出來的血清，如廠家能做到這一點，新生小牛血清的質(zhì)量與胎牛血清的質(zhì)量相差不大。如小牛出生后已哺乳，從這種小牛中取出的血清中可能含有較多的生物活性物質(zhì)，其質(zhì)量明顯不如前兩種。血清的質(zhì)量，種類及使用的濃度都有可能影響細胞的生長，而不同批次的血清支持細胞生長的能力也不同，尤其是對克隆細胞的生長，某些

胎牛血清和小牛血清不同表現(xiàn)2023/07/24

小牛血清(或新生牛血清)是從出生2周左右牛齡的小牛中獲得的，是一種經(jīng)濟有效的胎牛血清替代品。血清通常用作細胞生長的添加物，擁有多種功能和用途，如：富含大分子蛋白，低分子量的營養(yǎng)素，作為氨基酸、碳水化合物、維生素的額外來源;提高介質(zhì)的緩沖能力;可結(jié)合或中和有毒成分;減少細胞氧化應(yīng)激，減少細胞凋亡;提供促進生長的因子，有助細胞適應(yīng)培養(yǎng)環(huán)境。小牛血清提供許多與胎牛血清相同的營養(yǎng)物質(zhì)，蛋白質(zhì)和免疫球蛋白水平稍高，但生長因子較少，適合培養(yǎng)容易培養(yǎng)或?qū)ε囵B(yǎng)環(huán)境要求低的細胞。胎牛血清是應(yīng)用廣泛的細胞培養(yǎng)添加物

細胞轉(zhuǎn)染實驗中常見問題探究2023/07/17

細胞轉(zhuǎn)染常見問題一、轉(zhuǎn)染效率低影響轉(zhuǎn)染效率因素很多，主要因素有細胞培養(yǎng)物、血清、載體構(gòu)建、DNA質(zhì)量以及轉(zhuǎn)染技術(shù)等。1.沒有使用優(yōu)化條件：優(yōu)化陽離子脂質(zhì)體試劑和DNA的量。2.DNA-陽離子脂質(zhì)體試劑復合物在存在血清條件下形成。3.存在抑制劑：不要在用于制備DNA-陽離子脂質(zhì)體復合物的培養(yǎng)基中使用抗生素，EDTA，檸檬酸鹽，磷酸鹽，RPMI，硫酸軟骨素。透明質(zhì)酸，硫酸葡聚糖或其他硫酸蛋白多糖。4.不恰當?shù)募毎芏龋恨D(zhuǎn)染時融合度應(yīng)為70%-90%。5.陽離子脂質(zhì)體試劑凍結(jié)：不要使用凍結(jié)的或儲存溫度

關(guān)于?血清熱滅活相關(guān)事項2023/07/10

血清熱滅活的步驟在1970年代就已建立，至今成為很多實驗室的常規(guī)血清前處理步驟；但許多先前認為必須熱滅活的原因，卻早已經(jīng)不再成立。至少70%的研究者對血清的滅活僅僅是因為遵照常規(guī)操作，或者說認為是理所當然的。常規(guī)滅活建議的溫度在45℃到62℃之間，而時間則從15分鐘到60分鐘不等，其中zui常用的手法是56℃熱處理30分鐘。隨著血清采集、處理、加工工藝的提高，許多早先認為是熱滅活的原因已經(jīng)不再成立，只有少數(shù)對血清進行熱滅活的研究者在實驗中證實了這一步驟的有效性和必要性。一、熱敏補體與熱滅活熱滅活

揭秘ELISA顯色淡原因及解決方案2023/07/03

ELISA（enzymelinkedimmunosorbentassay）也就是酶聯(lián)免疫吸附測定，是指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體特異性結(jié)合，進行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測方法。下面揭秘ELISA顯色淡的八大原因及解決方案。原因一：試劑盒在運輸途中時間太長，溫度太高。解決方案：盡量縮短運輸時間，夏季應(yīng)放冰塊降溫。原因二：試劑盒未充分平衡。解決方案：試劑盒從2～8℃冰箱取出后打開盒蓋，于室溫平衡至少20分鐘，確保所有試劑已平衡至室溫（約25℃）。原因三：培養(yǎng)箱溫度不足

影響PCR反應(yīng)結(jié)果的各組分綜述2023/06/27

PCR反應(yīng)體系由反應(yīng)緩沖液（10×PCRBuffer）、脫氧核苷三磷酸底物（dNTPmix）、耐熱DNA聚合酶（Taq酶）、寡聚核苷酸引物（Primer1，Primer2）、靶序列（DNA模板）五部分組成。各個組份都能影響PCR結(jié)果的好壞。1．反應(yīng)緩沖液：一般隨TaqDNA聚合酶供應(yīng)。標準緩沖液含：50mMKCl，10mMTris-HCl（pH8.3室溫），1.5mMMgCl2。Mg2+的濃度對反應(yīng)的特異性及產(chǎn)量有著顯著影響。濃度過高，使反應(yīng)特異性降低；濃度過低，使產(chǎn)物減少。在各種單核苷酸濃度為

化學實驗室安全注意事項匯總2023/06/05

在實驗室做實驗，一定要注意實驗的安全，畢竟化學藥品大多數(shù)都是電郵一定毒性的，一旦出現(xiàn)問題，影響不容小覷，甚至可能會危及生命。一、化學實驗室個人防護措施注意事項：1、眼睛及臉部的防護（1）、全防護眼鏡（眼睛及臉部是實驗室中最易被事故所傷害的部位，因而對他們的保護尤為重要。實驗室內(nèi)，氖實驗人員必須戴安全防護眼鏡（2）、當化學物質(zhì)濺入眼睛后，應(yīng)立即用水徹di沖洗。沖洗時，應(yīng)將眼皮撐開，小心地用自來水沖洗數(shù)分鐘，再用蒸餾水沖，然后去醫(yī)務(wù)室進行治療。（3）、面部防護用具用于保護臉部和喉部。為了防止可能的爆

PCR引物設(shè)計關(guān)鍵事項2023/05/29

PCR引物設(shè)計需要注意：1、引物長度：一般為15～30個堿基，引物太短會降低擴增特異性。引物過長退火溫度會提高，不利于反應(yīng)的發(fā)生。2、引物序列：設(shè)計引物時堿基要隨機分布，避免堿基或核苷酸的重復導致錯誤引發(fā)；引物間和引物自身序列也要盡量避免互補，防止形成引物二聚體或發(fā)夾結(jié)構(gòu)。3、堿基分布：GC含量一般40-60%，含量過高或過低都不利于進行反應(yīng)。其含量過低會使引物不穩(wěn)定；過高會引發(fā)非特異性擴增。4、Tm值：引物的Tm值（解鏈溫度）=4（G+C）+2（A+T），盡可能保證上下游引物的Tm值一致，一般

標準物質(zhì)證書通用包含內(nèi)容闡述2023/05/24

標準物質(zhì)證書的內(nèi)容其實非常多，要詳細看懂標準物質(zhì)證書，也不是太容易，大致來說包括下面17個方面的內(nèi)容。1、定值機構(gòu)的名稱、地址該名稱（常在證書上端以顯著的字體寫出）應(yīng)當是對證書提供的信息負責的團體或組織的名稱，如定值機構(gòu)。除名稱之外，還包括通訊地址、電-話，如果可能的話，也包括電子郵件地址。2、文件（證書）的標題應(yīng)當有清晰明顯的標題，例如，分析證書或測量證書。出具臨時證書的偶然行為會使得同一批次標準物質(zhì)/標準樣品有一個以上的證書，而可能引起混亂，因此不鼓勵。3、標準物質(zhì)/標準樣品的名稱標準物質(zhì)/

描述增加特異性的引物的特點及引物退火溫度2023/05/15

細心地進行引物設(shè)計是PCR中最重要的一步。理想的引物對只同目的序列兩側(cè)的單一序列而非其他序列退火。設(shè)計糟糕的引物可能會同擴增其他的非目的序列。下面的指導描述了一個可以增加特異性的引物所具有的特點：①典型的引物18到24個核苷長。引物需要足夠長，保證序列獨te性，并降低序列存在于非目的序列位點的可能性。但是長度大于24核苷的引物并不意味著更高的特異性。較長的序列可能會與錯誤配對序列雜交，降低了特異性，而且比短序列雜交慢，從而降低了產(chǎn)量。②選擇GC含量為40％到60％或GC含量映像模板GC含量的引物

抗體的分裝與保存闡述2023/05/04

機體在抗原物質(zhì)刺激下，由B細胞分化成的漿細胞所產(chǎn)生的、可與相應(yīng)抗原抗體抗原發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)的免疫球蛋白。免疫球蛋白是結(jié)構(gòu)及化學的概念，而抗體是生物學及功能的概念。可以說，所有抗體都是免疫球蛋白，但并非所有免疫球蛋白都是抗體?？贵w保存得當與否，直接決定了抗體的活性和使用效果。如果抗體保存得當，大部分抗體活性都可以維持數(shù)月甚至數(shù)年。1.收到抗體后請在12000rpm離心1-5min，將附著在管壁或蓋內(nèi)的抗體全部離心下來后再打開管蓋進行分裝和保存！2.對絕大多數(shù)抗體來說，保存在-20℃是wan全足夠

ELISA試劑盒配對抗體技能方法2023/04/26

ELISA試劑盒單克隆抗體制備時很多朋友會遇到這樣的問題，即咱們免疫用的蛋白為原核表達蛋白而意圖蛋白是真核蛋白或病毒等，由于沒有規(guī)范品咱們做出來的抗體沒有辦法用規(guī)范品來驗證是否與其發(fā)作反響，終究導致咱們做出的是無用抗體。以下內(nèi)容為試驗室技能總結(jié)的幾種方法，期望對大家有所協(xié)助。一、若要檢測的抗原為某種新的病毒ELISA試劑盒辦法：1、很多做出該病毒某個蛋白的單克隆抗體；2、很多收集該病毒疑似感染動物或人血液，用PCR的辦法進一步斷定每份血液是否真的有該病毒存在；3、將你做出的很多抗體中的一個做符號

RT-PCR引物的設(shè)計原則把握2023/04/23

1、引物的特異性決定PCR反應(yīng)特異性。因此引物設(shè)計是否合理對于整個實驗有著至關(guān)重要的影響。在引物設(shè)計時要充分考慮到可能存在的同源序列，同種蛋白的不同亞型，不同的mRNA剪切方式以及可能存在的hnRNA對引物的特異性的影響。盡量選擇覆蓋相連兩個內(nèi)含子的引物，或者在目的蛋白表達過程中特異存在而在其他亞型中不存在的內(nèi)含子。2、引物設(shè)計原則的把握包括:1、.引物長度:一般為15～30bp，引物太短會影響PCR的特異性，引物太長PCR的最適延伸溫度會超過Taq酶的最適溫度，也影響反應(yīng)的特異性。2、.堿基分

血清和血漿制備方法2023/04/20

血清和血漿均是不含細胞（包括血小板）等有形成分的血液液體部分，其主要區(qū)別是血清不含凝血因子和血小板，血漿則含有凝血因子，它們的制備方法如下：1、血清的制備：獲得的血液不能抗凝，盛于離心管或可以離心的器皿中，靜置或置37℃環(huán)境中促其凝固，待血液凝固后，將其平衡后離心（一般為3000rpm，離心5～10min），得到的上清液即為血清，可小心將上清吸出（注意切勿吸出細胞成分），分裝備用。2、血漿制備：在盛血的容器中先加人一定比例的抗凝劑（抗凝劑：血液=1：9，將血液加到一定量后顛倒混勻，離心（離心條件