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						上海撫生實(shí)業(yè)有限公司
            初級(jí)會(huì)員 | 第8年
            
					
            
				
            
			
            
		
            
	
            
	
	
            
		
            
			
		
            
	
            

            

	
            
		
            
			
			
            
							
            
					
            實(shí)驗(yàn)室樣品收集及培養(yǎng)基滅菌使用2024/07/01
            
					
            
				樣品的采集及檢測(cè):一、保證采樣器具的無(wú)菌性1.玻璃器皿：采用干熱滅菌方式進(jìn)行滅菌，保證恒溫、時(shí)間足夠（但不可時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，導(dǎo)致玻璃器皿易裂紋而報(bào)廢）。2.取樣筐：使用前要用75%酒精進(jìn)行噴灑消毒3.取樣勺、濃奶取樣提子：要保證其清潔消毒，清潔后用75%酒精進(jìn)行擦拭消毒。4.取樣袋：可現(xiàn)用酒精進(jìn)行擦拭消毒，再在超凈臺(tái)用紫外燈照射消毒，（包裝車間要在傳遞窗用紫外燈照射消毒）。5.電子稱表面用75%酒精消毒。二、人員操作1.保證手部的清洗、消毒：取樣前及做樣前都要先洗手再消毒。2.取樣要具有代表性（隨機(jī)樣
					
            
				
            
								
            
					
            多克隆抗體和單克隆抗體的作用用途2024/06/24
            
					
            
				單克隆抗體的定義:單克隆抗體是僅與目標(biāo)蛋白某一特定表位結(jié)合的單一抗體。單克隆抗體的制備：簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)就是將免疫原注射到宿主動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生免疫反應(yīng)，之后把B細(xì)胞從脾臟中移出，單種B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合為B細(xì)胞雜交瘤，成為一個(gè)永生化胞株。這樣一來(lái)，雜交瘤的B細(xì)胞就會(huì)一直產(chǎn)出只識(shí)別單一表位的單克隆抗體，通常這個(gè)胞株會(huì)有一個(gè)特定的克隆號(hào)（clonenumber），用來(lái)與其他胞株區(qū)分。雜交瘤接下來(lái)可以被注射到小鼠的腹腔中大量，雜交瘤分泌富含抗體的一種液體，被稱作腹水，用注射器抽取純化，就可獲得大量的單克隆抗體。
					
            
				
            
								
            
					
            PCR反應(yīng)引物條件優(yōu)化2024/06/12
            
					
            
				PCR（Polymerasechainreaction，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）是模擬體內(nèi)DNA復(fù)制過(guò)程，對(duì)特定DNA序列進(jìn)行大量擴(kuò)增的一種技術(shù)。PCR反應(yīng)是以4種dNTP為底物，引物引導(dǎo)，DNA聚合酶催化作用下，在單鏈DNA模板3’末端開(kāi)始進(jìn)行互補(bǔ)鏈的延伸，多次反復(fù)的擴(kuò)增使特定DNA序列以指數(shù)增加。PCR反應(yīng)體系參與PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要為包括：引物、酶、dNTP、Buffer、模板和Mg2+。引物是兩段與待擴(kuò)增靶DNA序列互補(bǔ)的寡核苷酸片段，兩引物間距離決定擴(kuò)增片段的長(zhǎng)度，兩引物的5’端決定擴(kuò)增產(chǎn)物的
					
            
				
            
								
            
					
            實(shí)際篩選血清方式推送2024/06/03
            
					
            
				細(xì)胞培養(yǎng)液中添加的血清有牛血清、馬血清、人血清等，其中牛血清是常用的血清，分為胎牛血清和新生小牛血清。胎牛血清是從母牛破腹取出的胎牛中分離出的血清，價(jià)格昂貴。新生小牛血清是從剛出生的尚未哺乳的小牛中分離出來(lái)的血清，如廠家能做到這一點(diǎn)，新生小牛血清的質(zhì)量與胎牛血清的質(zhì)量相差不大。如小牛出生后已哺乳，從這種小牛中取出的血清中可能含有較多的生物活性物質(zhì)，其質(zhì)量明顯不如前兩種。血清，指血液凝固后，在血漿中除去纖維蛋白原及某些凝血因子后分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白原已被除去的血漿。細(xì)胞培養(yǎng)中血清的主
					
            
				
            
								
            
					
            貼壁細(xì)胞與懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)有有哪些方面區(qū)別2024/05/27
            
					
            
				貼壁細(xì)胞:概念：貼壁細(xì)胞是指那些在體外培養(yǎng)時(shí)需要附著在固體表面(如玻璃、塑料)上才能生長(zhǎng)和分裂的細(xì)胞。這類細(xì)胞在自然狀態(tài)下，通常存在于實(shí)體組織中，如皮膚、肌肉、器官等。形態(tài)特征：貼壁細(xì)胞通常會(huì)附著在培養(yǎng)瓶底部，可能會(huì)形成緊密的細(xì)胞間連接，如緊密形成單層或多層的細(xì)胞層。它們的形狀多樣，可以是扁平的，長(zhǎng)方形的，或者是多邊形的等。貼壁細(xì)胞通常會(huì)有明顯的核和細(xì)胞質(zhì)，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)各種細(xì)胞器。細(xì)胞之間連接、間隙連接等。生長(zhǎng)特性：貼壁細(xì)胞的生長(zhǎng)通常需要一定的時(shí)間，因?yàn)樗鼈冃枰雀街谂囵B(yǎng)瓶底部，然后才能開(kāi)始分
					
            
				
            
								
            
					
            胎牛血清白蛋白（BSA）獲取途徑及其用途2024/05/20
            
					
            
				胎牛血清白蛋白，英文名稱BovineSerumAlbumin（BSA），也稱CohnFractionV，是牛血清中的一種白蛋白，包含583個(gè)氨基酸殘基，分子量為66.430kDa，等電點(diǎn)為4.7。牛血清白蛋白在生化實(shí)驗(yàn)中有廣泛的應(yīng)用，例如在westernblot中作為Blockingagent;在酶切反應(yīng)緩沖液中加入BSA，通過(guò)提高溶液中蛋白質(zhì)的濃度，對(duì)酶起保護(hù)作用。防止酶的分解和非特異性吸附，能減輕有些酶的變性，能減輕有些不利環(huán)境因素如加熱，表面張力及化學(xué)因素引起的變性。是胎牛血清中的一種球蛋
					
            
				
            
								
            
					
            ELISA實(shí)驗(yàn)顯色淡詳細(xì)解讀2024/05/13
            
					
            
				ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）是一種用于檢測(cè)抗原或抗體濃度的免疫學(xué)試驗(yàn)。如果ELISA實(shí)驗(yàn)的顯色淡或靈敏度低，可能有多種原因。ELISA實(shí)驗(yàn)顯色淡的原因及解決方案：原因一：試劑盒在運(yùn)輸途中時(shí)間太長(zhǎng)，溫度太高。解決方案：盡量縮短運(yùn)輸時(shí)間，夏季應(yīng)放冰塊降溫。原因二：試劑盒未充分平衡。解決方案：試劑盒從2～8℃冰箱取出后打開(kāi)盒蓋，于室溫平衡至少20分鐘，確保所有試劑已平衡至室溫（約25℃）。原因三：培養(yǎng)箱溫度不足37℃。解決方案：注意培養(yǎng)箱溫度，放入反應(yīng)板后盡量減少開(kāi)啟次數(shù)以免影響溫度恒定，非隔水式培
					
            
				
            
								
            
					
            從不同方面比較原代細(xì)胞和傳代細(xì)胞培養(yǎng)2024/05/13
            
					
            
				原代細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，一般認(rèn)為，原代細(xì)胞培養(yǎng)的第1代和傳代到第10代以內(nèi)統(tǒng)稱為原代培養(yǎng)。原代培養(yǎng)的細(xì)胞一般傳至10代左右就不容易傳下去了，細(xì)胞的生長(zhǎng)會(huì)出現(xiàn)停滯，大部分細(xì)胞衰老死亡。但是有極少數(shù)的細(xì)胞能夠度過(guò)“危機(jī)”而繼續(xù)傳下去，這些存活的細(xì)胞一般能夠傳到40-50代，這種傳代細(xì)胞叫做細(xì)胞株。當(dāng)細(xì)胞傳至50代以后又會(huì)出現(xiàn)“危機(jī)”，這時(shí)有部分細(xì)胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變且?guī)в邪┳兊奶攸c(diǎn)，從而可能無(wú)限制地傳代下去，這種傳代細(xì)胞稱為細(xì)胞系。一、定義方面：1、原代培養(yǎng)是指由體內(nèi)取出組織或細(xì)胞進(jìn)行的第1次培養(yǎng)，也叫
					
            
				
            
								
            
					
            抗體具有穩(wěn)定性好特點(diǎn)原因詳解2024/05/06
            
					
            
				抗體（antibody，Ab）是機(jī)體在體內(nèi)存在的外來(lái)分子、微生物等抗原物質(zhì)刺激下，由B淋巴細(xì)胞或記憶細(xì)胞增殖分化成的漿細(xì)胞所產(chǎn)生的、可與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合的免疫球蛋白（immunoglobulins，Ig），主要分布在血清中，也分布于組織液及外分泌液中。抗體在室溫、37℃保存與-20℃保存具有一樣的活性與穩(wěn)定性。穩(wěn)定性好的抗體具有的特點(diǎn)：1.抗體純度高純度的抗體產(chǎn)品，去除了包括各種蛋白酶在內(nèi)的雜質(zhì)，保證了抗體的穩(wěn)定性。采用先進(jìn)的抗體純化技術(shù)，確?？贵w產(chǎn)品的高純度，保障其抗體產(chǎn)品的穩(wěn)定性。2.
					
            
				
            
								
            
					
            免疫組化染色實(shí)驗(yàn)著色問(wèn)題探究2024/04/28
            
					
            
				良好的免疫組化染色切片是正確判斷染色結(jié)果的基礎(chǔ)和前提。由于免疫組化染色過(guò)程中存在很多步驟或環(huán)節(jié)，每一個(gè)步驟或環(huán)節(jié)都可能影響到染色的最終結(jié)果，因此，要做好一張高質(zhì)量的免疫組化切片并不是一件非常容易的事。從染色的結(jié)果看，一般可分為兩類：無(wú)色片（即無(wú)陽(yáng)性信號(hào)）和“雜音”染色片（有陽(yáng)性信號(hào)）。一、無(wú)色片染色結(jié)束后，切片中見(jiàn)不到任何陽(yáng)性信號(hào)。這是常規(guī)工作中比較常見(jiàn)的現(xiàn)象，出現(xiàn)這種現(xiàn)象，有兩種可能：1、真陰性結(jié)果：整個(gè)染色過(guò)程沒(méi)有出現(xiàn)問(wèn)題，組織或細(xì)胞確實(shí)不表達(dá)與抗體相關(guān)的抗原。2、假陰性結(jié)果：即此陰性結(jié)果不
					
            
				
            
								
            
					
            挑選適合實(shí)驗(yàn)生化試劑盒鑒別方法2024/04/22
            
					
            
				生化試劑盒通?？煞譃橐后w單試劑和液體雙試劑，前者特別適用于半自動(dòng)生化分析儀和小型自動(dòng)生化分析儀，使用方便，缺點(diǎn)是穩(wěn)定性較差。與單試劑相比，雙試劑提高了抗干擾能力，具有穩(wěn)定性能較好，可消除樣品自身空白等特點(diǎn)。此外還有多項(xiàng)同測(cè)組合試劑、濃縮試劑等。對(duì)新的試劑盒，我們首先要查看其資質(zhì)是否齊全，是否為合法有效試劑，是否有相關(guān)的臨床試驗(yàn)驗(yàn)證等。其次，在本實(shí)驗(yàn)室，可做以下工作來(lái)進(jìn)行驗(yàn)證是否適合使用。一、試劑空白吸光度用蒸餾水做空白，用最定的空白液加入試劑作為樣品測(cè)試，在測(cè)試主波長(zhǎng)下，記錄測(cè)試啟動(dòng)時(shí)的吸光度(
					
            
				
            
								
            
					
            逆轉(zhuǎn)錄PCR反應(yīng)條件選擇指南2024/04/16
            
					
            
				逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction，RT-PCR)的原理是：提取組織或細(xì)胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用Oligo（dT）或隨機(jī)引物利用逆轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄成cDNA。再以cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，而獲得目的基因或檢測(cè)基因表達(dá)。RT-PCR使RNA檢測(cè)的靈敏性提高了幾個(gè)數(shù)量級(jí)，使一些極為微量RNA樣品分析成為可能。該技術(shù)主要用于：分析基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物、獲取目的基因、合成cDNA探針、構(gòu)建RNA高效轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)。一、
					
            
				
            
								
            
					
            免疫學(xué)工具WB與ELISA各方面比較2024/04/08
            
					
            
				免疫學(xué)檢測(cè)是應(yīng)用免疫學(xué)理論設(shè)計(jì)的一系列測(cè)定抗原、抗體、免疫細(xì)胞及其分泌的細(xì)胞因子的實(shí)驗(yàn)手段，用途非常廣泛，既可用于基礎(chǔ)理論和應(yīng)用研究，因此免疫學(xué)研究一直都是生命科學(xué)領(lǐng)域?qū)W術(shù)前沿。免疫印跡WB（WesternBlot）、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA），是免疫學(xué)常用工具，應(yīng)用于目的蛋白的定位、定性和定量。WB只能半定量,但是可以檢測(cè)細(xì)胞膜蛋白,這點(diǎn)ELISA做不到。ELISA可用定量方法檢測(cè)蛋白,也就是說(shuō)你可以觀察不同濃度刺激物對(duì)目的蛋白的影響。WB是目前一種結(jié)合內(nèi)參對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行半定量的方法，Eli
					
            
				
            
								
            
					
            標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)相關(guān)干貨分享2024/04/01
            
					
            
				標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定義：為了保證分析測(cè)試結(jié)果具有一定的準(zhǔn)確度，并具有可比性和一致性，常常需要一種用來(lái)校準(zhǔn)儀器、標(biāo)定溶液濃度和評(píng)價(jià)分析方法的物質(zhì)。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)已經(jīng)確定了具有一個(gè)或多個(gè)足夠均勻的特性值的物質(zhì)或材料，作為分析測(cè)量行業(yè)中的“量具"，在校準(zhǔn)測(cè)量?jī)x器和裝置、評(píng)價(jià)測(cè)量分析方法、測(cè)量物質(zhì)或材料特性值和考核分析人員的操作技術(shù)水平，以及在過(guò)程中產(chǎn)品的質(zhì)量控制等領(lǐng)域起著重要的作用。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的特性，通常把標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)分為一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。1.一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：主要用于標(biāo)定比它低一級(jí)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、校準(zhǔn)高準(zhǔn)確度的計(jì)量
					
            
				
            
								
            
					
            ELISA檢測(cè)法結(jié)果判斷方法詮釋2024/03/25
            
					
            
				ELISA定性測(cè)定的結(jié)果判斷是對(duì)受檢標(biāo)本中是否含有待測(cè)抗原或抗體作出"有"或"無(wú)"的簡(jiǎn)單回答，分別用"陽(yáng)性"、"陰性"表示。"陽(yáng)性"表示該標(biāo)本在該測(cè)定系統(tǒng)中有反應(yīng)。"陰性"則為無(wú)反應(yīng)。用定性判斷法也可得到半定量結(jié)果，即用滴度來(lái)表示反應(yīng)的強(qiáng)度，其實(shí)質(zhì)仍是一個(gè)定性試驗(yàn)。在這種半定量測(cè)定中，將標(biāo)本作一系列稀釋后進(jìn)行試驗(yàn)，呈陽(yáng)性反應(yīng)的稀釋度即為滴度。根據(jù)滴度的高低，可以判斷標(biāo)本反應(yīng)性的強(qiáng)弱，這比觀察不稀釋標(biāo)本呈色的深淺判斷為強(qiáng)陽(yáng)性、弱陽(yáng)性具定量意義。在間接法和夾心法ELSIA中，陽(yáng)性孔呈色深于陰性孔。在
					
            
				
            
								
            
					
            血清的儲(chǔ)存與應(yīng)用探究2024/03/18
            
					
            
				血清是由血漿去除纖維蛋白原而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件不同而異。血清是血漿中不含纖維蛋白原的膠狀液體,具有維持血液的正常粘度、酸堿度、滲透壓等作用。實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)確的應(yīng)用及保存血清，才能使血清施展應(yīng)有的效果。一、血清儲(chǔ)存：1.應(yīng)用前處理:大部分血清在應(yīng)用前必需滅活處置，即560C30分鐘。滅活的目標(biāo)是去除血清中的補(bǔ)體身分，防止補(bǔ)體對(duì)細(xì)胞發(fā)生毒性同化。血清顛末滅活也會(huì)喪失一些對(duì)細(xì)胞無(wú)利的成分，如發(fā)展
					
            
				
            
								
            
					
            ELISA定性測(cè)定結(jié)果判斷方法介紹2024/03/11
            
					
            
				ELISA定性測(cè)定的結(jié)果判斷是對(duì)受檢標(biāo)本中是否含有待測(cè)抗原或抗體作出"有"或"無(wú)"的簡(jiǎn)單回答，分別用"陽(yáng)性"、"陰性"表示。"陽(yáng)性"表示該標(biāo)本在該測(cè)定系統(tǒng)中有反應(yīng)。"陰性"則為無(wú)反應(yīng)。用定性判斷法也可得到半定量結(jié)果，即用滴度來(lái)表示反應(yīng)的強(qiáng)度，其實(shí)質(zhì)仍是一個(gè)定性試驗(yàn)。在這種半定量測(cè)定中，將標(biāo)本作一系列稀釋后進(jìn)行試驗(yàn)，呈陽(yáng)性反應(yīng)的稀釋度即為滴度。根據(jù)滴度的高低，可以判斷標(biāo)本反應(yīng)性的強(qiáng)弱，這比觀察不稀釋標(biāo)本呈色的深淺判斷為強(qiáng)陽(yáng)性、弱陽(yáng)性具定量意義。在間接法和夾心法ELSIA中，陽(yáng)性孔呈色深于陰性孔。在
					
            
				
            
								
            
					
            適合實(shí)驗(yàn)的ELISA試劑盒選擇參照原則2024/03/04
            
					
            
				目前市場(chǎng)上的ELISA試劑盒質(zhì)量參差不齊，試劑盒數(shù)以千計(jì)，供應(yīng)商的科研實(shí)力也相差懸殊，試劑盒的質(zhì)量好壞會(huì)嚴(yán)重影響到檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此如何去挑選適合自己的試劑盒就顯得特別重要。以下為歸納ELISA試劑盒選擇需考慮的要素，供參考。1、基于研究物種選擇如果樣品來(lái)自經(jīng)典模型，如人、小鼠和大鼠，則可以相對(duì)輕松地找到經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的ELISA試劑盒。但如果樣品來(lái)自猴子等非經(jīng)典模型，則可獲得的商品ELISA試劑盒數(shù)量有限。如果要檢測(cè)這些物種的指標(biāo)，最好要對(duì)待檢物(如有種屬差異性)進(jìn)行同源性分析以及試劑盒的種屬交
					
            
				
            
								
            
					
            細(xì)胞因子的生物學(xué)活性及種類介紹2024/02/26
            
					
            
				細(xì)胞因子是由免疫原、絲裂原或其他刺激劑誘導(dǎo)多種細(xì)胞合成并分泌的具有廣泛生物學(xué)活性的低分子質(zhì)量蛋白或多肽，參與細(xì)胞間信號(hào)傳導(dǎo)和相互作用。人體內(nèi)的許多類型的細(xì)胞都能產(chǎn)生細(xì)胞因子，而且細(xì)胞因子的產(chǎn)生通常是由抗原刺激的。細(xì)胞因子將信號(hào)從一個(gè)細(xì)胞傳遞到另一個(gè)細(xì)胞，以各種方式改變細(xì)胞行為，調(diào)節(jié)機(jī)體對(duì)潛在威脅的免疫反應(yīng)，這些威脅可能是病原體，如病毒、細(xì)菌、寄生蟲或毒素。研究表明，單個(gè)細(xì)胞因子可以影響幾種不同類型的細(xì)胞，并且可以發(fā)揮一種功能，而幾種不同的細(xì)胞因子可以發(fā)揮相同的功能，不同類型的細(xì)胞對(duì)同一種細(xì)胞因子
					
            
				
            
								
            
					
            PCR反應(yīng)擴(kuò)增產(chǎn)物出現(xiàn)問(wèn)題分析2024/02/18
            
					
            
				聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)是在體外進(jìn)行的由引物介導(dǎo)的酶促DNA擴(kuò)增反應(yīng)。PCR的原理是在模板DNA、PCR引物、四種脫氧核糖核苷酸(dNTP)及適當(dāng)濃度的Mg2+存在的條件下，依賴于DNA聚合酶的體外酶促合成反應(yīng)。兩個(gè)引物分別位于靶序列兩端，同兩條模板的3’端互補(bǔ)，由此限定擴(kuò)增片段。PCR反應(yīng)由一系列的變性→退火→延伸反復(fù)循環(huán)構(gòu)成，即在高溫下模板雙鏈DNA變性解鏈，然后在較低溫度下同過(guò)量引物退火，再在適中溫度下由DNA聚合酶催化進(jìn)行延伸。理論上，經(jīng)過(guò)N次循環(huán)可使特定片段擴(kuò)增到2n-1，考慮到擴(kuò)增
					
            
				
            
							
				
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