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熒光定量PCR實驗操作詳細說明2025/05/07

PCR（PolymeraseChainReaction，聚合酶鏈反應）是一種在體外模擬DNA復制過程的技術。通過設計特異性引物，PCR可以擴增目標DNA片段，使其在短時間內(nèi)達到可檢測的水平。PCR主要包括三個階段：變性、退火和延伸。熒光定量PCR原理：熒光定量PCR在傳統(tǒng)PCR基礎上，引入了熒光標記技術。根據(jù)熒光標記物的不同，熒光定量PCR可分為兩種：染料法和探針法。（1）染料法染料法利用一種能與雙鏈DNA特異性結合的熒光染料，如SYBRGreenI。在PCR反應體系中，染料與雙鏈DNA結合后，

標準曲線測定：標準溶液濃度確定過程2025/04/28

用于測定標準曲線的標準溶液濃度應通過合理的設置和精確的配制方法來確定，以確保實驗數(shù)據(jù)的準確性和可靠性。在化學分析中，標準曲線是一種重要的定量工具，它通過已知濃度的標準物質(zhì)與相應的儀器響應值之間的關系來定量未知樣品。首先，需要考慮所測組分的濃度范圍和檢測器的靈敏度。標準曲線的濃度點必須覆蓋被測量的范圍，并且每個點的濃度要在儀器的靈敏范圍內(nèi)。通常，第一個濃度點應為檢出限的5至10倍，之后按一定順序遞增，最高濃度是zui低濃度的10至20倍為宜。其次，要進行正確的標準溶液配制。常用的方法有直接配制法和

ELISA檢測方法的共同過程盤點2025/04/21

ELISA檢測是一種免疫檢測方法，通常用于測量生物樣品中的抗體或抗原，包括蛋白質(zhì)或糖蛋白。像其他免疫檢測法一樣，它們依靠抗體與目標的結合來促進檢測。通常情況下，ELISA檢測是在96孔板中進行的，這種形式使其適合于一次篩選許多樣品。血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液、細胞裂解液、唾液、組織裂解液和尿液都是用于這些檢測的常見樣品類型，但理論上大多數(shù)液體樣品類型都可以使用。然而，重要的是要考慮到一些樣品類型可能包括抑制性因素，如共享相似抗原表位的緩沖液成分或可能損害目標或檢測成分的蛋白酶等因素，這些因素可能

標準物質(zhì)管理使用說明2025/04/15

標準物質(zhì)一般是指一種確定了具有一個或多個足夠均勻的特性值的物質(zhì)或材料，作為分析測量行業(yè)中的“量具'，在校準測量儀器和裝置、評價測量分析方法、測量物質(zhì)或材料特性值和考核分析人員的操作技術水平，以及在過程中產(chǎn)品的質(zhì)量控制等領域起著*的作用。企業(yè)或實驗室應當建立標準物質(zhì)的科學管理制度，以保證標準物質(zhì)全流程的可追溯性、使信息傳遞正確有效，保證流轉過程數(shù)量和貯存準確、讓使用更規(guī)范與合理。一、標準物質(zhì)來源合法，可追溯對標準物質(zhì)的原材料選擇、制備方法、標定方法、標定結果、定值準確性、量值溯源、穩(wěn)定性等過程進行

植物根系活力檢測試劑盒（TTC法）實驗操作步驟2025/04/01

植物根系是活躍的吸收器官和合成器官，根的生長情況和活力水平直接影響地上部的生長和營養(yǎng)狀況及產(chǎn)量水平。本實驗練習測定根系活力的方法，為植物營養(yǎng)研究提供依據(jù)。氯化三苯基四氮唑（TTC）是標準氧化電位為80mV的氧化還原色素，溶于水中成為無色溶液，但還原后即生成紅色而不溶于水的三苯甲瓚，生成的三苯甲瓚比較穩(wěn)定，不會被空氣中的氧自動氧化，所以TTC被廣泛地用作酶試驗的氫受體，植物根系中脫氫酶所引起的TTC還原量能表示脫氫酶活性并作為根系活力的指標。操作步驟：建議正式實驗前選取2個樣本做預測定，了解本批樣

揭秘細胞污染細節(jié)匯集2025/03/24

細胞污染的種類可分成細菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉?jié){菌。主要的污染原因為無菌操作技術不當、操作室環(huán)境不佳、污染之血清和污染之細胞等。嚴格之無菌操作技術、清潔的環(huán)境、與品質(zhì)良好之細胞來源和培養(yǎng)基配制是減低污染之好方法。細胞受到嚴重污染時，有時即使想盡各種辦法也難以挽回。因此，防止污染，預防是關鍵。只有將預防措施貫穿于整個細胞培養(yǎng)的始終，才能將發(fā)生污染的可能性降到最小程度。一、一般預防細胞污染以下幾方面：1、從物品、用品消毒滅菌著手細胞培養(yǎng)所用物品清洗、消毒要徹di，各種溶液滅菌除菌要仔細，并在取樣檢

蛋白定量BCA法檢測實驗干貨分享2025/03/17

BCA（BicinchoninicAcid）法是一種常用的蛋白定量檢測方法，其原理是利用蛋白質(zhì)與銅離子在堿性溶液中發(fā)生絡合反應，生成穩(wěn)定的紫紅色復合物，再與標準曲線比較，即可求出待測蛋白的濃度。該方法具有靈敏度高、準確度高、操作簡便、抗干擾能力強等優(yōu)點，廣泛應用于生物化學等領域。實驗步驟：1.試劑準備（1）BCA工作液：將BCA試劑A和B按50:1的比例混合，充分搖勻，備用。（2）標準蛋白溶液：取適量的標準蛋白，用PBS或去離子水溶解，配制成濃度為1mg/mL的標準蛋白溶液。2.蛋白樣品制備（1

PCR實驗出現(xiàn)失敗結果探究2025/03/11

聚合酶鏈式反應（polymerasechainreaction，PCR）模擬體內(nèi)DNA復制條件，應用DNA聚合酶反應，體外程序化地特異性擴增某一DNA片段的技術。PCR的最大特點，是能將微量的DNA大幅增加。一、模板質(zhì)量問題：1）模板提取不完整，其中不含你的目的基因，或目的基因含量太低?？梢耘軅€電泳看看提取的DNA，PCR陽性樣品與陰性樣品是否有明顯差別。如果確定是這種問題，可以增加模板量試試，但不一定行得通。2）模板里面殘留某種試劑成份，可能抑制Taq聚合酶的活性，如果是這種情況，可以用試劑盒

化學試劑穩(wěn)定性判斷遵循原則2025/03/04

化學試劑（chemicalreagent）是進行化學研究、成分分析的相對標準物質(zhì)，是科技進步的重要條件，廣泛用于物質(zhì)的合成、分離、定性和定量分析，可以說是化學工作者的眼睛，在工廠、學校、醫(yī)院和研究所的日常工作中，都離不開化學試劑。判斷化學試劑的穩(wěn)定性,可遵循以下幾個原則:1、無機化合物,只要妥善保管,包裝完好無損,可以長期使用。但是,那些容易氧化、容易潮解的物質(zhì),在避光、蔭涼、干燥的條件下,只能短時間(1～5年)內(nèi)保存,具體要看包裝和儲存條件是否合乎規(guī)定。2、有機小分子量化合物一般揮發(fā)性較強,包

血清、血漿及全血的用途作用2025/02/25

血液生化指標的分析及激素等含量的測定對臨床判斷、預測藥物毒性作用及疾病的發(fā)生發(fā)展有著重要的意義。那么，血清、血漿、全血有何區(qū)別，各自的用途是什么呢？1、常見的血液生化指標與激素常見的血液生化指標：血糖（GLU）、谷丙轉氨酶（ALT）、谷草轉氨酶（AST）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、肌酐（Crc）、尿素氮（BUN）、膽固醇（CHO）、堿性磷酸酶（ALP）、總膽紅素（TBIL）、鎂、鈣等。常見的激素：睪酮（T）、孕酮（P）、雌二醇（E2）、三碘甲腺原氨酸（T3）、甲狀腺素（T4）、游離三碘甲

聚合酶鏈式反應(PCR)影響因素介紹2025/02/18

PCR(PolymeraseChainReaction)-聚合酶鏈式反應，可以選擇性擴增一段DNA序列。其基本步驟是，首先將待擴增的模板DNA變性使之成為單鏈，DNA樣品中，特異性的引物能夠與其互補的序列雜交，在dNTPs和Taq酶存在時，就可以合成模板DNA的互補鏈，反應完成后，將反應混合物加熱使DNA雙鏈變性，溫度下降后，過量的引物又可以開始第二輪的合成反應。這種延伸-變性-退火-延伸的循環(huán)可以重復多次，使所需要的DNA片段得到特異性的擴增。1.變性：加熱使模板DNA在高溫下（94℃）變性，

PCR產(chǎn)物常用的直接純化技術方法2025/02/14

PCR產(chǎn)物一般都含有過量的引物、TaqDNA酶及dNTP，這些成分的存在將直接影響到后續(xù)的酶切、雙脫氧PCR測序反應等過程,因此有必要除去。目前核酸純化的方法有很多,商用化試劑盒的出現(xiàn)使得DNA的純化過程變得更加簡便快捷。PCR擴增完成后需要進行瓊脂糖凝膠電泳檢測，在條帶單一無其他雜帶的情況下，可以直接對產(chǎn)物進行純化，常見的純化方法有：一、產(chǎn)物直接純化：1、硅膠層析柱法原理：大多數(shù)離心柱中吸附DNA的是一層硅膠膜，實際上就是一層玻璃纖維，其表面有大量修飾的硅羥基（Si-OH），硅羥基在溶液中解離

ELISA實驗是否需重做判斷指南2025/02/06

ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定(Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay)的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術。在檢測時，受檢標本（測定其中的抗原）與固相載體表面的抗體反應。洗滌后加入酶標記的抗體，通過反應結合在固相載體上。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關，可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。ELISA實驗過程中時常發(fā)生重做的情況，實驗是否需要重新進行，判斷可以根據(jù)評估標準曲線、檢測限、對照反

關于蛋白質(zhì)沉淀鹽析方法探究2025/01/21

蛋白質(zhì)通過鹽析的辦法沉淀的原理是降低蛋白質(zhì)的溶解度，使蛋白質(zhì)凝聚而從溶液中析出。蛋白質(zhì)的沉淀（proteinprecipitation），沉淀是溶液中的溶質(zhì)由液相變成固相析出的過程。蛋白質(zhì)從溶液中析出的現(xiàn)象，稱為蛋白質(zhì)的沉淀。蛋白質(zhì)沉淀常用的方法有鹽析、等電點沉淀、有機溶劑沉淀、生物堿試劑與某些酸沉淀等。在生化制備中，沉淀主要用于濃縮目的，或用于除去留在液相或沉淀在固相中的非必要成分。在生化制備中常用的鹽析法多用于各種蛋白質(zhì)和酶的分離純化。一般來說，所有固體溶質(zhì)都可以在溶液中加入中性鹽而沉淀析出

實時熒光定量PCR 方法原理簡述2025/01/14

目前主流的實時熒光定量PCR（QuantitativeReal-timePCR）方法分為染料法和探針法，染料法以SYBRGreen法為代表，SYBRGreen染料游離時熒光微弱，但一旦與雙鏈DNA結合后，熒光大大增強，反應管中的熒光強度與反應管中雙鏈DNA的數(shù)量成正比例關系，因此可以通過檢測熒光計算反應管中產(chǎn)生的雙鏈DNA（PCR產(chǎn)物）的量，但該方法沒有特異性，非特異性擴增的產(chǎn)物也會被計入。對于探針法來說，反應管中的熒光強度也是檢測PCR產(chǎn)物量的依據(jù)。但其發(fā)光機制卻與染料法全不同。根據(jù)所使用的技

微生物培養(yǎng)基配置指南2025/01/07

培養(yǎng)基(culturemedium)是人工配制的，適合微生物生長、分離鑒別的營養(yǎng)基礎。一般基礎培養(yǎng)基中古有蛋白胨、牛肉浸粉、酵母浸粉、氯化鈉、瓊脂等基本營養(yǎng)物質(zhì)。微生物培養(yǎng)基應用范圍很廣。例如，無菌試驗培養(yǎng)基可檢查藥品、生物制品是否污染細菌，它直接關系到人民用藥安全；在臨床及食品衛(wèi)生檢驗中常用選擇、鑒別培養(yǎng)基，此類培養(yǎng)基中根據(jù)用途不同，需要加入抑菌劑、指示劑、血液、糖等試劑，以利于特定細菌的分離與鑒別，需要使細菌大量生長、繁殖的各類培養(yǎng)基；病毒培養(yǎng)及疫苗中則需用組織細胞培養(yǎng)液，主要成分為多種氨基

抗體的作用功能及局限性介紹2024/12/24

抗體是一種被免疫系統(tǒng)用來鑒別與中和外來物質(zhì)如細菌、病毒等的大型Y形蛋白質(zhì)，是一種免疫球蛋白。它的產(chǎn)生是由于抗原侵入人體后引起各種免疫細胞相互作用，使淋巴細胞中的B細胞增殖分化而形成漿細胞（效應B細胞），漿細胞可產(chǎn)生分泌抗體?？贵w的分類：按作用對象，可將其分為抗毒素、抗菌抗體、抗病毒抗體和親細胞抗體?？贵w的作用機理：(1)、抗體在抗原顆粒和吞噬細胞之間“搭橋”，從而加強了吞噬細胞的吞噬作用。(2)、抗體與相應顆粒性抗原結合后，改變抗原表面電荷，降低吞噬細胞與抗原之間的靜電斥力。(3)、抗體可中和某

ELISA酶標儀的檢測單位和檢測值計算2024/12/17

ELISA酶聯(lián)免疫吸附試驗方法簡稱酶標法，是標記技術中的一種，是從熒光抗體技術，同位素免疫技術發(fā)展而來的一種敏感，特異，快速并且能自動化的現(xiàn)代技術。酶標法的基本原理是將抗原或抗體與酶用膠聯(lián)劑結合為酶標抗原或抗體，此酶標抗原或抗體可與固相載體上或組織內(nèi)相應抗原或抗體發(fā)生特異反應，并牢固地結合形成仍保持活性的免疫復合物。當加入相應底物時，底物被酶催化而呈現(xiàn)出相應反應顏色。顏色深淺與相應抗原或抗體含量成正比。由于此技術是建立在抗原-抗體反應和酶的高效催化作用的基礎上，因此，具有高度的靈敏性和特異性，是

活性氧 (ROS) 含量檢測試劑盒實驗詳細說明2024/12/09

活性氧含量檢測試劑盒通過使用特異性探針或底物與ROS發(fā)生化學反應，從而實現(xiàn)對ROS含量的測定。這種檢測方法基于探針或底物與ROS的特異性反應，通常使用熒光分光光度計或流式細胞術進行測量?；钚匝鹾繖z測試劑盒具有以下幾個優(yōu)勢：1.高選擇性：活性氧含量檢測試劑盒能夠特異性地檢測ROS，避免了其他化學物質(zhì)的干擾，確保測量結果的準確性。2.高靈敏度：活性氧含量檢測試劑盒能夠檢測到極低濃度的ROS，使研究人員能夠對ROS含量進行準確測量，揭示微小變化對細胞功能和疾病發(fā)展的影響。3.快速和簡便：活性氧含量檢

PCR基因擴增儀應用詳細說明2024/12/03

一、原理PCR技術的本質(zhì)是體外核酸擴增，加熱使雙鏈DNA解開螺旋，在退火溫度條件下引物同模板DNA雜交，在TaqDNA聚合酶，dNTPs，Mg2+和合適pH緩沖液存在條件下延伸引物，重復“變性→退火→引物延伸”過程至25～40個循環(huán)，呈指數(shù)級擴大待測樣本中的核酸拷貝數(shù)。二、分類1.普通的PCR儀一次PCR擴增只能運行一個特定退火溫度的PCR儀，又叫傳統(tǒng)的PCR儀。用途：主要是做一些簡單的、對單一退火溫度的目的基因進行擴增。（1）梯度PCR儀：一次PCR擴增可以設置一系列不同的退火溫度條件(溫度梯