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染色質免疫共沉淀（ChIP）2021/08/11

染色質免疫沉淀（chromatinimmunoprecipitationassay,ChIP）是目前研究體內DNA與蛋白質相互作用的方法。它的基本原理是在活細胞狀態(tài)下固定蛋白質－DNA復合物，并將其隨機切斷為一定長度范圍內的染色質小片段，然后通過免疫學方法沉淀此復合體，特異性地富集目的蛋白結合的DNA片段，通過對目的片斷的純化與檢測，從而獲得蛋白質與DNA相互作用的信息。ChIP不僅可以檢測體內反式因子與DNA的動態(tài)作用，還可以用來研究組蛋白的各種共價修飾與基因表達的關系。而且，ChIP與其他方

細胞周期的分析2021/08/11

細胞周期（cellcycle）是指細胞從一次分裂完成開始到下一次分裂結束所經歷的全過程，分為間期與分裂期兩個階段。間期又分為三期、即DNA合成前期（G1期）、DNA合成期（S期）與DNA合成后期（G2期）。細胞分裂期又稱M期。細胞通過M期一分為二，有的可繼續(xù)分裂進行周期循環(huán)，有的轉入G0期。G0期是脫離細胞周期暫時停止分裂的一個階段。但在一定適宜刺激下，又可進入周期（圖1），合成DNA與分裂。G0期的特點為：在未受刺激的G0細胞，DNA合成與細胞分裂的潛力仍然存在；當G0細胞受到刺激而增殖時，又

細胞凋亡檢測2021/08/11

細胞凋亡（apoptosis）指為維持內環(huán)境穩(wěn)定，由基因控制的細胞自主的有序的死亡。細胞凋亡與細胞壞死不同，細胞凋亡不是一件被動的過程，而是主動過程，它涉及一系列基因的激活、表達以及調控等的作用，它并不是病理條件下，自體損傷的一種現象，而是為更好地適應生存環(huán)境而主動爭取的一種死亡過程。下面介紹幾種常用的檢測細胞凋亡的方法。一、TUNEL法脫氧核糖核苷酸衍生物digoxin在TdT酶的作用下，可以摻入到凋亡細胞雙鏈或單鏈DNA的3-OH末端，與dATP形成異多聚體，并可與連接了報告酶（過氧化物酶或

蛋白磷酸化檢測的注意事項2021/08/02

1、樣本準備過程中防止蛋白質降解和保留翻譯后修飾樣本準備過程中，細胞會釋放蛋白酶和/或去磷酸化酶，為了減少這些酶的活性，處理樣本的過程應在冰上進行，并預先冷卻所有緩沖液，并且建議用含蛋白酶和磷酸酶抑制劑的裂解緩沖液。2、磷酸化特異性抗體的選擇選擇磷酸化特異性抗體時，選擇所要檢測位點的磷酸化抗體至關重要。磷酸化都會使蛋白質的分子量增加80Da，檢查抗體是否檢測到磷酸化靶蛋白的分子量正確的條帶也很重要。3、誘導磷酸化課題設計可能需要在收獲前刺激細胞，以確保蛋白質被磷酸化。例如，在特定細胞信號傳導途徑

Western blot之蛋白轉印二三事2021/08/02

蛋白轉印的方法蛋白轉印可選擇傳統(tǒng)濕轉、半干轉或快速半干轉方法。濕轉系統(tǒng)：適用于大多數各種分子量的常規(guī)蛋白轉印。轉印過程中凝膠和膜被浸入充滿轉印緩沖液的槽中。半干轉系統(tǒng)：凝膠和膜被夾在預先潤濕緩沖液的濾紙之間，濾紙與平板電極直接接觸。半干轉系統(tǒng)的安裝使用比濕轉簡單。快速轉印系統(tǒng)：快速轉印系統(tǒng)是最近發(fā)展出來的技術，使用專用設備、專用濾紙及專用緩沖液來快速有效地轉印蛋白。通常濾紙和濕潤的膜預先放在一次性包裝中，簡化了轉印“三明治”的組裝。轉印緩沖液轉印緩沖液包含強導電性化學緩沖試劑（例如Tris，CA

實驗室里的不明瓶瓶罐罐不要隨意洗?。。?/a>2021/07/30

中山大學藥學院于7月27日發(fā)布通報，該院2021年7月27日發(fā)生一起實驗安全事故，實驗=室在清理通風柜時發(fā)現之前畢業(yè)生遺留在燒瓶內的未知白色固體，一博士研究生用水沖洗時發(fā)生炸裂，炸裂產生的玻璃碎片刺破該生手臂動脈血管，送醫(yī)救治傷情得到控制，無生命危險。與實驗室負責老師溝通分析，導致炸裂的未知白色固體中可能含有氫化鈉或氫化鈣，遇水發(fā)生劇烈反應而炸裂。實驗室的瓶瓶罐罐清洗是科研工作者最日常的工作，但是，如果你并不確定瓶內裝的是什么東西，千萬不要隨意就拿去清洗！有些化學品遇水會發(fā)生爆炸，有些化學品遇水

吃東西是為了饑餓還是為了享樂？原來它們的腦回路并不相同2021/07/30

研究人員發(fā)現，盡管大腦通過中腦產生5-羥色胺的神經元來調節(jié)快感和饑餓感的進食，但每種進食方式都是由自己獨立的電路連接的，不影響其他類型的進食方式。美國疾病控制與預防中心(CentersforDiseaseControlａndPrevention)的數據顯示，無論是由饑餓還是愉悅引起的暴飲暴食，通常都會導致肥胖。美國約42%的成年人都患有肥胖癥。一個由貝勒醫(yī)學院(BaylorCollegeofMedicine)的研究人員領導的國際研究小組在動物模型上研究了大腦是如何調節(jié)饑餓或其他因素引發(fā)的進食的，

重組DNA的構建（載體構建）2021/07/29

基本原理：外源目的DNA與載體分子的連接稱為DNA重組，重組的DNA稱為重組體或重組子。研究中需要克隆或表達的基因為外源DNA，載體是指能夠攜帶外源基因進入受體細胞，并在其中進行擴增或誘導外源基因表達的工具，其中質粒載體最為常用。質粒是獨立于細菌染色體外具有自我復制的DNA分子。所有的質粒都有復制子、選擇性標志和多克隆位點3個共同的特性。質粒載體的選擇包括載體的大小、載體拷貝數、多接頭以及篩選插入片段的能力，pcDNA3.1（+/-）是比較常用的真核表達載體?；静襟E：1、目的DNA片段的獲得。

CCK8法測定細胞增殖注意事項2021/07/29

CCK8全稱CellCountingKit-8，是一種基于WST-8（化學名為2-（2-甲氧基-4-硝基苯）-3-（4-硝基苯）-5-（2,4-二磺基苯）-2H-四唑單鈉鹽）的應用于細胞增殖和細胞毒性的快速、高靈敏度檢測試劑盒。其工作原理類似于MTT，在電子耦合試劑存在的情況下，WST-8可以被線粒體內的脫氧酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產物（formazan）。顏色的深淺與細胞的數量有關。CCK8法在藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性實驗、腫瘤藥敏試驗以及生物因子的活性檢測等方面應用廣泛。注

細胞凍存注意事項2021/07/28

基本原理細胞凍存時保存細胞的最基本方法，當不加保護劑直接凍存細胞時，細胞內和外環(huán)境中的水會形成冰晶，從而引起細胞死亡。因此，正常情況下凍存細胞，通常會向培養(yǎng)液中加入保護劑，使用逐步降低溫度的方法，以減少凍存過程中細胞內冰晶形成、保護細胞。注意事項1、凍存細胞選擇細胞增殖旺盛、情況穩(wěn)定、無污染、處于對數生長期的細胞。2、實驗操作過程必須遵循無菌操作。3、細胞凍存液的配方應根據細胞的類型進行調整，摸索對應細胞最適的配方。4、細胞凍存過程，降溫速率要小，遵循慢凍原則，可借助程序降溫盒來完成。5、凍存細

干貨分享--WB實驗問題總結與處理方案（三）2021/07/27

41、跑電泳的時候配的膠總是“縮”是什么原因呢？是有的成分不對嗎？答：沒什么問題，就是你膠里的水分被蒸發(fā)了。過夜時拿保鮮膜包起來，在里面加點水保持濕度就可以了；也可能母液（30%聚丙酰胺）有問題，你可以重新配制一份觀察；能夠替換的試劑，盡量換一下，選用好的試劑。42、蛋白質的分子量跨度很大，如要分離小21KD，中至66KD，大至170KD，可以一次做好嗎？答：這么廣的分布不好轉移，一般建議：21kd和66kd可以一起轉，12％SDS-PAGE，濕轉120mA，45-60min就可以了，可以根據你

干貨分享--WB實驗問題總結與處理方案（二）2021/07/27

Westernblot實驗過程中常見問題匯總及處理方案。21、想分離的蛋白是分子量200kd的，SDS-PAGE電泳的分離膠濃度多大合適？濃縮膠的濃度又該用多少？這么大分子量的蛋白容易作WesternBlot嗎？答：分離膠用7％，濃縮膠3.5％，200kd的蛋白不好做。22、如果上樣量超載，要用什么方法來增加上樣量？答：可以濃縮樣品，也可以根據你的目標分子量透析掉一部分小分子蛋白。一般地，超載30％是不會有問題的。如果已經超了不少了，而且小分子量的也要，可以考慮加大膠的厚度，可以試試1.5mm的

干貨分享--WB實驗問題總結與處理方案（一）2021/07/27

Westernblot實驗過程中常見問題匯總及處理方案。1、westernblot的優(yōu)點及缺點答：優(yōu)點：靈敏，特異性高，常規(guī)可達ng級，Ecl顯色法理論上可達pg級。缺點：通量有限。2、為什么我的細胞提取液中沒有目標蛋白？答：原因有很多：首先排除WB過程是不是抗體的問題，重新實驗、更換抗體；其次排除蛋白是否降解，提取的時候需要加入蛋白酶抑制劑，a)你的細胞中不表達這種蛋白質，換一種細胞；最后考慮此種細胞是否表達該蛋白，表達量高低。3、提取液有的有沉淀，有的很清亮，為什么呢？答：a)有沉淀可能因為

分子生物學常用數據庫匯總及推薦2021/07/27

分子生物學主要研究具體生物大分子在某一生物學行為過程中的表達變化、功能和作用方式；主要涉及基因的表達調控、蛋白相互作用、信號分子間的交互對話等。分子生物學實驗常需要我們在具體實驗前對所關注的基因的一些基本信息、可能受哪些因素調控、與哪些分子可能存在潛在的相互作用，可能參與哪些生物學行為等進行一些初步的判斷，然后根據這些信息，提出合理的實驗設計，并通過生物學實驗加以驗證。那么，如何獲得上面的這些信息，除了根據實驗結果提供的線索和深入研究相關文獻以外，還會用到一些分子生物學數據庫，尤其一些在線預測工

逆轉錄PCR2021/07/26

RT-PCR，逆轉錄PCR或稱反轉錄PCR（ReverseTranscriptionPCR），是聚合酶鏈式反應的一種廣泛應用的變形。在RT-PCR中，RNA在逆轉錄酶的作用下被逆轉錄成為互補DNA（complementaryDNA，cDNA），再以此為模板通過PCR進行DNA擴增?；驹恚河媚孓D錄酶以RNA為模板合成與其互補的DNA（cDNA）的過程。因為mRNA末端存在PolyA，所以用OligodT作為通用引物與其互補。商品化的反轉錄試劑盒里通常除了OligodT之外，還可以用隨機引物，但

實驗室純水等級分類及應用2021/07/23

通常我們會將實驗室的純水分為四個不同的等級，按照級別分為：純水、去離子水、實驗室Ⅱ級純水以及超純水。這四類不同的純水通常根據電導率來進行區(qū)分和檢測。1、純水純水也叫純化水，它的電導率會在1-50μs/cm之間，它可經由單一弱堿性陰離子交換樹脂、反滲透或單次蒸餾制成。一般應有在玻璃器皿清洗、清洗劑用水、恒溫恒濕實驗室和高壓滅菌器之間。2、去離子水去離子水的電導率通常都在1.0-0.1μs/cm之間，通過采用含強陰離子交換樹脂的混床離子交換制成。它們能夠滿足各種制備試劑、稀釋樣品、制備分析標準樣的需

你會正確使用移液器嗎？2021/07/22

移液器的基本構造：移液器的使用：1、設定容量值：根據所需取液量選擇相應的移液器，可調式移液器應在允許的范圍內調節(jié)。在調整旋鈕時，不要用力過猛，并應注意使移液器顯示的數值不超過其可調范圍，各品牌移液器的量程設置略有不同。2、吸液：根據所選擇的移液器選擇合適的吸頭安放在移液器的套筒上，稍加扭轉壓緊吸頭使之與套筒間無空氣間隙。把按鈕壓住第一停點，垂直握住移液器，使吸頭浸入液面下2-3毫米處然后緩緩平穩(wěn)的松開按鈕吸入液體，等一秒鐘，然后將吸頭提離液面，貼壁停留2-3秒使管尖外側的液滴滑落。3、放液：將吸

真空冷凍干燥，您了解多少？2021/07/22

什么是真空冷凍干燥？真空冷凍干燥又稱升華干燥，是將含水物料冷凍到冰點以下，使水轉變?yōu)楸缓笤谳^高真空下將冰轉變?yōu)檎魵舛サ母稍锓椒?。物料可先在冷凍裝置內冷凍，再進行干燥。但也可直接在干燥室內經迅速抽成真空而冷凍。升華生成的水蒸氣借冷凝器除去。升華過程中所需的汽化熱量，一般用熱輻射供給。干燥后的物料保持原來的化學組成和物理性質（如多孔結構、膠體性質等），易于長期保存，復水性好，加水后能恢復到凍干前的形態(tài)，并且能保持其原有的生化特性。因此，冷凍干燥技術在化學工業(yè)、生物制品、食品等領域都得到廣泛應

實驗室如何滅菌？2021/07/21

實驗室如何滅菌?消毒和滅菌是微生物實驗技術中最基本的操作技術，因此從事藥品生產、檢驗的人員均應了解消毒和滅菌的基本概念、兩者的關系，各自的應用方法及其意義，操作時應嚴格執(zhí)行相關的操作規(guī)程，一方面確保生產與檢驗工作的效果，另一方面也是對自身安全的保護。消毒和滅菌的概念：1、消毒：指對病原微生物的繁殖體的致死作用，但不能殺死芽孢等全部微生物，因此消毒是不*的，不能代替滅菌。凡用于消毒的化學藥品稱為消毒劑，因此人們也常稱消毒劑為化學消毒劑。2、滅菌：殺滅物體中所有活的微生物（含芽孢）的作用，滅菌是采用

實時熒光定量PCR（realtime PCR）2021/07/21

實時熒光定量PCR定量PCR已經從基于凝膠的低通量分析發(fā)展到高通量的熒光分析技術，即實時定量PCR。實時熒光定量PCR技術于1996年推出，由于該技術不僅實現了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點。實時定量PCR(real-timequantitativePCR)是指在PCR指數擴增期間通過連續(xù)監(jiān)測熒光信號強弱的變化來即時測定特異性產物的量，并據此推斷目的基因的初始量，不需要取出PCR產物進行分離。目前實時定量PCR作為一個