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2015
09-28

組織切片中脫水和透明
脫水和透明所謂脫水就是利用脫水劑將組織內(nèi)的水分置換出來，以利于有機溶劑的滲入，這一過程稱為脫水。脫水是否*，直接關(guān)系到組織是否能充分透明，而脫水過度（原因是組織在純酒精內(nèi)時間過久，發(fā)生組織質(zhì)地發(fā)生變化）容易造成組織發(fā)脆。造成組織發(fā)脆的原因還有加溫（溫度超過35℃）、脫水劑內(nèi)加有丙酮、浸蠟用的石蠟中二甲苯過多等等。ELISA試劑盒一般我們總認為組織發(fā)脆跟高濃度酒精有關(guān)，而忽視了與低濃度的酒精關(guān)系，其實低濃度的酒精具有強大的穿透力，比純酒精更容易滲透到組織塊內(nèi)部使之脫水，組織如果在低濃度酒精里充分脫
2015
09-25

液氮罐的使用維護與注意事項
一、容器的使用維護1、液氮罐只用于盛裝液氮，不允許盛裝其他液體；ELISA試劑盒2、使用前檢查容器內(nèi)部是否清潔干燥；3、充液氮前要用少量液氮預(yù)冷；4、用于長期貯存時，則需要定期補充液氮，補充時機一般應(yīng)在液氮剩余量為總?cè)萘康娜种粸橐耍?、嚴(yán)禁在容器蓋上放置物體和密封頸口；6、放進或取出冷凍物品時，要盡量使罐口打開時間短，以減少液氮消耗，也不要把提筒*提出來；7、嚴(yán)防沖擊和碰撞；8、嚴(yán)禁用硬物清除頸管內(nèi)的凍霜，以免損傷頸管。二、運輸1、液氮罐運輸時只能立放，不能躺放，為了防止翻倒，須用皮帶或其它
2015
09-23

染色體易位與癌癥之間的機制
研究人員發(fā)現(xiàn)了染色體易位與癌癥之間的相互關(guān)系的一個重要機制，為進一步研究腫瘤中染色體易位提供了重要依據(jù)。ELISA試劑盒研究人員開啟內(nèi)部和相互染色體易位后，雄激素受體（AR）發(fā)生內(nèi)源性結(jié)合，這時由于AR和遺傳毒性應(yīng)激的誘導(dǎo)，催化了兩種類型的酶的活性，從而促使易位位點發(fā)生位點特異性DNA雙鏈斷裂（DSBs），這兩種酶分別是活化誘導(dǎo)胞嘧啶核苷脫氨酶，和LINE-1重復(fù)編碼ORF2酶切反應(yīng)。這些研究數(shù)據(jù)表明由配基核受體和遺傳毒性應(yīng)激啟動的兩條平行途徑的交接點，是非隨機腫瘤染色體易位，這也許在許多腫瘤和
2015
09-21

抗原抗體的結(jié)構(gòu)與反應(yīng)
1.抗體的結(jié)構(gòu)抗體是能與抗原特異性結(jié)合的免疫球蛋白（immunoglobulin,Ig）。Ig分五類，即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。與免疫測定有關(guān)的Ig主要為IgG和IgM。Ig由兩個輕鏈（L）和兩個重鏈（H）的單體組成。Ig的輕鏈?zhǔn)窍嗤?，有κ（kappa）和λ（Lambda）兩種型別。五類Ig的重鏈結(jié)構(gòu)不同，這決定了它們的抗原性也不同。IgG和IgM的重鏈分別稱為γ（gamma）鏈和μ（mu）鏈。重鏈和輕鏈的N端的氨基酸排列順序因各種抗體而異，稱為可變區(qū)，分別用VH和VL表示。兩
2015
09-18

質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌時免熱激及孵育的方法
介紹一種質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌時免熱激及孵育的方法。背景：目前外源質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌的步驟，需要先將質(zhì)粒和感受態(tài)細胞在冰上撫育半小時，然后42度熱激90秒，加液體培養(yǎng)基緩搖1個小時左右再離心涂板。其中熱激步驟溫度和時間要求嚴(yán)格，熱激后大量菌細胞死亡，還要經(jīng)過液體培養(yǎng)基撫育才能涂板。方法改進：我們可以在做質(zhì)粒和感受態(tài)細胞在冰上撫育的同時，將要涂的平板放在37度培養(yǎng)箱里，當(dāng)撫育結(jié)束后，立即涂到已經(jīng)加熱到37度的平板上，利用培養(yǎng)板的熱度代替熱激，平板可以直接放回培養(yǎng)箱倒置培養(yǎng)。由于溫度相對溫和，細胞死亡的少，
2015
09-16

如何預(yù)防及有效控制高血壓
高血壓是我國居民健康的主要威脅，目前全國高血壓患者已達2億人。雖然高血壓被確定為心血管疾病的重要危險因素已近50年，但如何預(yù)防及有效控制依然是世界性難題，其主要障礙是95%以上的高血壓為病因不明的原發(fā)性高血壓，因此難以進行有效的早期預(yù)防和治療。近日，研究證實，除遺傳、不良生活方式外，病毒感染或許也是原發(fā)性高血壓的原因之一。這項由首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京朝陽醫(yī)院心臟中心楊新春教授、蔡軍副教授課題組完成的研究顯示，巨細胞病毒感染可能是高血壓的觸發(fā)因素，從而在上提出了高血壓病毒感染學(xué)說。研究人員通過臨床病
2015
09-14

血清/血漿樣本研究的挑戰(zhàn)
大量研究表明，血液循環(huán)中的microRNA表達變化指征著疾病的發(fā)生和發(fā)展階段。同時，血液樣品在臨床易于獲取，且穩(wěn)定不易降解，因此對于microRNA標(biāo)記物篩選具有廣闊研究前景。血清/血漿樣本用于microRNA研究的挑戰(zhàn)?血清血漿中不包含細胞，且microRNA含量低?microRNA高度同源，例如hsa-let-7家族各成員?紅細胞破裂發(fā)生溶血后，會釋放抑制RT和PCR反應(yīng)的物質(zhì)?常規(guī)內(nèi)參（如U6等）在血清血漿中含量不穩(wěn)定，不適合作為內(nèi)參對照基因準(zhǔn)確檢測血清/血漿樣本microRNA的利器mi
2015
09-11

原代細胞傳代技術(shù)
1.選用原代細胞生長狀態(tài)好（90-95%），生長數(shù)量大于5×105進行傳代。2.吸除原代細胞培養(yǎng)液。用含雙抗的1×PBS（pH7.4）清洗細胞培養(yǎng)瓶2次。3.1ml細胞消化液加入細胞培養(yǎng)瓶，輕輕搖動，使細胞消化液覆細胞培養(yǎng)瓶底。4.細胞培養(yǎng)瓶置于5%CO2、95%空氣、37oC培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)數(shù)分鐘后，在顯微鏡下觀察原代細胞的消化狀態(tài)。請記住：如貼壁細胞逐漸趨于圓形、部分懸浮后，用手指輕輕拍打細胞培養(yǎng)側(cè)部或底部至大部分貼壁細胞懸浮，加入細胞終止液，終止細胞消化。每種原代細胞的消化時間是有差異的。5
2015
09-09

夾心法ELISA用于檢測IL-8
Il-8是一種分子量為8～10kD的多肽，對嗜中性粒細胞，T淋巴細胞、嗜鹼性粒細胞具有趨化作用，并可激活嗜中性粒細胞，是一種重要的炎癥介質(zhì)。在嚴(yán)重感染病人的血清中、炎癥局部滲出液中都可檢測到高水平的IL-8。此外，近年來的研究表明，IL-8可能與各種組織缺血后再灌注損傷的發(fā)生有關(guān)。研究人員采用兩株自制的單克隆抗體建立了夾心法ELISA用于檢測IL-8，敏感性可156Pg/ml。相關(guān)專題ELISA免疫實驗技術(shù)Il-8是一種分子量為8～10kD的多肽，對嗜中性粒細胞，T淋巴細胞、嗜鹼性粒細胞具有趨化
2015
09-07

細胞計數(shù)的原理
一、原理培養(yǎng)的細胞在一般條件下要求有一定的密度才能生長良好，所以要進行細胞計數(shù)。計數(shù)結(jié)果以每毫升細胞數(shù)表示。細胞計數(shù)的原理和方法與血細胞計數(shù)相同。在細胞群體中總有一些因各種原因而死亡的細胞，總細胞中活細胞所占的百分比叫做細胞活力，由組織中分離細胞一般也要檢查活力，以了解分離的過程對細胞是否有損傷作用。復(fù)蘇后的細胞也要檢查活力，了解凍存和復(fù)蘇的效果。用臺盼蘭染細胞，死細胞著色，活細胞不著色，從而可以區(qū)分死細胞與活細胞。利用細胞內(nèi)某些酶與特定的試劑發(fā)生顯色反應(yīng)，也可測定細胞相對數(shù)和相對活力。二、儀器
2015
09-02

F因子的特性
細菌的接合zui早在大腸桿菌中發(fā)現(xiàn)，以后在其他菌中也觀察到，主要見于革蘭氏陰性菌。在電鏡下可觀察到細菌間借伸長的性菌毛進行接合。細菌能在接合中作為基因傳遞供體取決于致育因子（Fertilityfactor）又稱F因子。細胞這是zui早發(fā)現(xiàn)的一種質(zhì)粒。F因子編碼在細菌表面產(chǎn)生性菌毛。F因子的特性為可以促進供體菌向受體菌傳遞染色體DNA或質(zhì)粒。F因子決定編碼的性菌毛可在供體與受體菌間形成交通通連接結(jié)構(gòu)，從而可使兩個雜交細菌間形成胞漿內(nèi)連接橋。F因子可以游離存大于胞漿內(nèi)，也可與細菌染色體整合。如果F因
2015
08-31

熒光抗體染色法
一、原理與意義免疫熒光組織（細胞）化學(xué)染色方法——補體法，是一種熒光抗體染色法。本法之熒光抗體不受免疫血清的動物種屬的限制，因而一種熒光抗體可作更廣泛的應(yīng)用，敏感性亦較間接法高，效價低的免疫血清亦可應(yīng)用，節(jié)省免疫血清，尤其是對檢查形態(tài)小的如立克氏體、病毒顆粒等或濃度較低的抗原物質(zhì)時甚為理想。二、操作指南1、材料（1）免疫血清60℃滅活20min，用Kolmers鹽水作2倍稀釋成1：2，1：4，1：8……。補體用1：10稀釋的新鮮豚鼠血清，抗補體熒光抗體等，按下述的補體法染色。免疫血清補體結(jié)合的效
2015
08-28

免疫熒光的二抗選擇要點
二抗選擇要點（1）種屬來源。主要根據(jù)一抗種屬來源來決定購買二抗來源，如一抗是小鼠來源，那二抗就買抗小鼠的即可（羊、兔等均可）。ELISA試劑盒（2）標(biāo)記物的選擇。有HRP、Biotin、熒光素等標(biāo)記物。一般SP三步法二抗選擇Biotin標(biāo)記的二抗，以與后面的SP結(jié)合反應(yīng)；而免疫熒光染色就需要購買不同熒光素標(biāo)記的二抗，如羅丹明、FITC、Cy3等常用熒光素。這主要與后面有無三抗和三抗種類有關(guān)。（3）選擇IgM還是IgG。一般一抗是IgM，那么二抗就選擇IgM；反之，一抗是IgG，則二抗選擇IgG。
2015
08-26

細胞染色的方法
方法1.準(zhǔn)備感興趣的目標(biāo)細胞。2.表面染色后的細胞表面抗原。表面標(biāo)記的選擇取決于實驗問題。在不同類型的細胞的表型標(biāo)記，建3.議請查看相應(yīng)的bestphenotyping標(biāo)記圖：小鼠或人。4.zui后一次洗滌后，加入固定液100μ雖然渦流管和潛伏在黑暗中在室溫下20分鐘修復(fù)細胞。5.添加1毫升每管通透性緩沖液，離心5分鐘，吸出上清液。6.重復(fù)步驟4。7.懸浮細胞的通透性的緩沖區(qū)100μL和潛伏在黑暗中在室溫下5分鐘。8.用20μl通透性緩沖抗細胞因子的單克隆抗體熒光標(biāo)記的*濃度和添加適當(dāng)?shù)墓??；靹?
2015
08-24

免疫組化石蠟切片
1、石蠟切片置于67℃烘箱中，烘片2小時，脫蠟至水，用pH7.4的PBS沖洗三次，每次3分鐘（3×3’）。2、取一定量pH=6.0檸檬酸鹽緩沖液，加入微波盒中，微波加熱至沸騰，將脫蠟水化后的組織切片置于耐高溫塑料切片架上，放入已沸騰的緩沖液中，中檔微波處理10分鐘，取出微波盒流水自然泠卻，從緩沖液中取出玻片，先用蒸餾水沖洗兩次，之后用PBS沖洗2×3’。（注：不是所有的抗體都需要微波修復(fù)的，視具體情況而定）3、每張切片加1滴3%H2O2，室溫下孵育10分鐘，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性。PBS沖
2015
08-21

石蠟切片載玻片的處理
1、載玻片的處理：抗原修復(fù)過程中,由于高溫、高壓、輻射等諸多因素的影響，極易造成脫片。這里選用ZLI-9001APES、ZLI-9003HistogripTM或ZLI-9005Poly-L-Lysine等幾種試劑，對已清洗的載玻片進行處理。具體方法如下：（1）APES：現(xiàn)用現(xiàn)配。將洗凈的玻片放入以1:50比例丙酮稀釋的APES中，停留20~30秒鐘，取出稍停片刻，再入純丙酮溶液或蒸餾水中涮去未結(jié)合的APES，置通風(fēng)櫥中晾干即可。用此載玻片撈片時應(yīng)注意組織要一步到位，并盡量減少氣泡的存在，以免影響
2015
08-19

芽孢桿菌的作用
芽孢桿菌（Bacillus），細菌的一科，能形成芽孢（內(nèi)生孢子）的桿菌或球菌。包括芽孢桿菌屬、芽孢乳桿菌屬、梭菌屬、脫硫腸狀菌屬和芽孢八疊球菌屬等。它們對外界有害因子抵抗力強，分布廣，存在于土壤、水、空氣以及動物腸道等處。細胞1.保濕性強：形成強度極為優(yōu)良的天然材料聚麩胺酸，為土壤的保護膜，防止肥份及水份流失。2.有機質(zhì)分解力強：增殖的同時，會釋出高活性的分解酵素，將難分解的大分子物質(zhì)分解成可利用的小分子物質(zhì)。細胞3.產(chǎn)生豐富的代謝生成物：合成多種有機酸、酶、生理活性等物質(zhì)，及其它多種容易被利用
2015
08-17

引起肺外感染的分枝桿菌
肺外感染部分患者結(jié)核分枝桿菌可進入血液循環(huán)引起肺內(nèi)、外播散，如腦、腎結(jié)核，痰菌被嚥入消化道也可引起腸結(jié)核、結(jié)核性腹膜炎等。國外有報道332例血標(biāo)本僅2例培養(yǎng)出結(jié)核分枝桿菌，但將此標(biāo)本注入豚鼠皮下12%感染結(jié)核。說明結(jié)核分枝桿菌在血中播散的大多不是一般細菌型，而是一種不易生長的L型。近年有不少肺外結(jié)核的新報道，結(jié)核分枝桿菌的檢出率L型多于細菌型：如兒童結(jié)核性腦膜炎10例腦脊液培養(yǎng)，9例培養(yǎng)出L型，細菌型僅1例。老年性前列腺肥大排尿困難，術(shù)后病理切片抗酸菌L型占61.2%，無1例為典型抗酸桿菌。慢性
2015
08-14

熒光抗體染色方法
一、標(biāo)本制作可制作涂片、印片、細胞單層培養(yǎng)物、組織切片，經(jīng)適當(dāng)固定或不固定，作免疫熒光染色用。二、熒光抗體染色方法（一）直接法1．染色切片經(jīng)固定后，滴加經(jīng)稀釋至染色效價如1：8或1：16的熒光抗體（如兔抗人γ-球蛋白熒光抗體或兔抗人IgG或IgA熒光抗體等），在室溫或37℃染色30min，切片置入能保持潮濕的染色盒內(nèi)，防止干燥。2．洗片傾去存留的熒光抗體，將切片浸入pH7.4或pH7.2PBS中洗兩次，攪拌，每次5min，再用蒸餾水洗1min，除去鹽結(jié)晶。3．用50%緩沖（0.5mol/L碳酸鹽
2015
08-12

制備膠體金的白磷還原法
膠體金可用多種方法制備，其中應(yīng)用較為廣泛的是化學(xué)還原法。這一方法的基本原理是在氯化金水溶液中加入一定量的還原劑，使金離子還原為金原子，可用于制備膠體金的還原劑有50余種，但在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域內(nèi)zui為常用的還原劑是白磷、檸檬酸三鈉以及鞣酸等。ELISA試劑盒白磷還原法的建立已有近百年的歷史，由于此法操作較為簡便，制備出來的膠體金顆粒大小較一致，因而應(yīng)用較為廣泛，現(xiàn)以Faulk和Taylor（1971）的報道為基礎(chǔ)介紹這一方法。（1）取1%氯化金1.5mli、0.1mol/LK2CO31.2ml,加入

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