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2015
06-17

酶標(biāo)抗體的保存和稀釋液
結(jié)合物的保存酶標(biāo)抗體中的酶和抗體均為生物活性物質(zhì)，保存不當(dāng)，極易失活。高濃度的結(jié)合物較為穩(wěn)定，冰凍干燥后可在普通冰箱中保存一年左右，但凍干過程中引起活力的減低，而且使用時(shí)需經(jīng)復(fù)溶，頗為不便。結(jié)合物溶液中加入等體積的甘油可在低溫冰箱或普通冰箱的冰格中較長(zhǎng)時(shí)間保存。早期的ELISA試劑盒中的結(jié)合物一般均按以上兩種形式供應(yīng)，配以稀釋液（見3.2.5）臨用時(shí)按標(biāo)明的稀釋度稀釋成工作液。現(xiàn)在較先進(jìn)的ELISA試劑盒均已用合適的緩沖液配成工作液，使用時(shí)不需再行稀釋，在4-8℃保存期可達(dá)6個(gè)月。由于蛋白質(zhì)濃度
2015
06-16

ELISA競(jìng)爭(zhēng)法
在競(jìng)爭(zhēng)法ELISA中，陰性孔呈色深于陽(yáng)性孔。陰性呈色的強(qiáng)度取決于反應(yīng)中酶結(jié)合物的濃度和加入競(jìng)爭(zhēng)抑制物的量，一般調(diào)節(jié)陰性對(duì)照的吸光度在1.0-1.5之間，此時(shí)反應(yīng)zui為敏感。競(jìng)爭(zhēng)法ELISA不易用自視判斷結(jié)果，因肉眼很難辨別弱陽(yáng)性反應(yīng)與陰性對(duì)照的顯色差異，一般均用比色計(jì)測(cè)定，讀出S、P和N的吸光值。計(jì)算方法主要也有兩種，即陽(yáng)性判定值法和抑制率法。a.ELISA陽(yáng)性判定值法與間接法和夾心法中的陽(yáng)性判定值法基本相同，但在計(jì)算公式中引入陽(yáng)性對(duì)照A值，現(xiàn)舉某種檢測(cè)抗HBc的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對(duì)照
2015
06-15

抗體芯片的特點(diǎn)
抗體芯片特點(diǎn)*整個(gè)分析過程可以在一天內(nèi)完成*適用于包括組織、細(xì)胞系、體液在內(nèi)的多種生物樣品*用熒光分析的方法比較兩個(gè)樣品之間378個(gè)蛋白質(zhì)的相對(duì)豐度*試劑盒提供完整的樣品抽提制備、標(biāo)記、孵育所需的Buffer，特別設(shè)計(jì)的樣品制備的過程能保持樣品的完整性和溶解性，保證制備樣品具有代表性和一致性。*芯片上的抗體分別經(jīng)過特異性抗原、細(xì)胞系和組織的檢測(cè)，靈敏度高達(dá)pg/ml*芯片上的抗體包含針對(duì)信號(hào)傳導(dǎo)、癌癥、細(xì)胞周期調(diào)控、細(xì)胞結(jié)構(gòu)、凋亡和神經(jīng)生物學(xué)等廣泛的生物功能的相關(guān)蛋白，跨度大、適用范圍廣。*開放
2015
06-12

線粒體前體蛋白信號(hào)序列的特點(diǎn)
線粒體前體蛋白信號(hào)序列的特點(diǎn)是：①多位于肽鏈的N端，由大約20個(gè)氨基酸構(gòu)成；②沒有帶負(fù)電荷的氨基酸，形成一個(gè)兩性α螺旋，帶正電荷的氨基酸殘基和不帶電荷的疏水氨基酸殘基分別位于螺旋的兩側(cè)，現(xiàn)在認(rèn)為這個(gè)螺旋與轉(zhuǎn)位因子的識(shí)別有關(guān)；③對(duì)所牽引的蛋白質(zhì)沒有特異性要求，非線粒體蛋白連接上此類信號(hào)序列，也會(huì)被轉(zhuǎn)運(yùn)到線粒體。此外有些信號(hào)序列位于蛋白質(zhì)內(nèi)部，完成轉(zhuǎn)運(yùn)后不被切除，還有些信號(hào)序列位于前體蛋白C端，如線粒體的DNA解旋酶Hmil。線粒體具有四個(gè)功能區(qū)隔，即外膜、內(nèi)膜、膜間隙、基質(zhì)。進(jìn)入不同部位的蛋白具有
2015
06-11

ELISA成功誘使干細(xì)胞變成了精子和卵子
加州斯坦福大學(xué)的ELISA科學(xué)家將化學(xué)藥物和維生素混合，成功誘使干細(xì)胞變成了精子和卵子。他們培育出的精子有頭部和短小的尾部，被認(rèn)為發(fā)育成熟，完夠使卵子受精。而卵子培育還處于研究初期，但仍然比其他科學(xué)家取得的成果要進(jìn)步得多。根據(jù)世界衛(wèi)生組織公布的數(shù)字，*不孕癥患者人數(shù)約為8000萬(wàn)—1.1億，還有很多育齡夫婦由于癌癥治療而無(wú)法生育。的實(shí)驗(yàn)成果會(huì)幫助他們成功生育出至少?gòu)纳飳W(xué)的角度是他們自己的子女。然而，這同時(shí)也引發(fā)了巨大的道德和倫理爭(zhēng)論，因?yàn)檫@可能會(huì)制作出*的人工嬰兒，眾多男女也會(huì)逐漸退出哺育后代
2015
06-10

CXCL14一種與免疫細(xì)胞趨化、腫瘤遷移密切相關(guān)的趨化因子
CXCL14是一種與免疫細(xì)胞趨化、腫瘤遷移密切相關(guān)的趨化因子。近日，中科院動(dòng)物研究所段恩奎研究員帶領(lǐng)的研究小組通過基因芯片篩選以及多種實(shí)驗(yàn)手段證明，在小鼠和人類妊娠中，CXCL14在早期母胎界面呈現(xiàn)高表達(dá)，并特異地定位于滋養(yǎng)層細(xì)胞。進(jìn)一步的功能研究發(fā)現(xiàn)CXCL14能夠有效地抑制滋養(yǎng)層細(xì)胞的侵潤(rùn)，這一作用是通過調(diào)節(jié)滋養(yǎng)層MMP-9和MMP-2的分泌量和活性來(lái)實(shí)現(xiàn)的。另外，因?yàn)镃XCL14的特異性受體目前尚未發(fā)現(xiàn)，文章作者通過用生物素標(biāo)記的CXCL14在母胎界面進(jìn)行特異結(jié)合實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)CXCL14特異
2015
06-09

β細(xì)胞對(duì)糖尿病療法新希望
胰腺中的胰島α細(xì)胞負(fù)責(zé)胰高血糖素，胰島β細(xì)胞負(fù)責(zé)胰島素。但日本奈良科學(xué)技術(shù)大學(xué)院大學(xué)和瑞士日內(nèi)瓦大學(xué)研究人員通過小鼠實(shí)驗(yàn)表明，這種分工并不是不可改變的。此前，研究人員從未發(fā)現(xiàn)胰島α細(xì)胞能夠成為胰島β細(xì)胞的來(lái)源。他們指出，如果人體內(nèi)胰島α細(xì)胞能夠代替數(shù)目減少或者功能減弱的胰島β細(xì)胞，將會(huì)為糖尿病治療帶來(lái)希望。這一研究成果刊登在一期英國(guó)《自然》雜志網(wǎng)絡(luò)版上。研究人員給小鼠使用了一種名為白喉的毒素，將小鼠體內(nèi)的胰島β細(xì)胞全部破壞，結(jié)果小鼠出現(xiàn)糖尿病癥狀。為了維持小鼠的生命，研究人員給它們注射胰島素。兩
2015
06-05

干細(xì)胞培養(yǎng)出與聽覺有關(guān)細(xì)胞
德國(guó)法蘭克福大學(xué)醫(yī)院１日發(fā)表公報(bào)說，該校與美國(guó)斯坦福大學(xué)研究人員歷時(shí)１０年，以老鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，利用干細(xì)胞培養(yǎng)出與人類耳蝸內(nèi)毛細(xì)胞相似的細(xì)胞，從而向利用再生醫(yī)療方式治療失聰邁出了重要一步。德美研究人員以老鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，利用干細(xì)胞培育出與人類耳蝸內(nèi)毛細(xì)胞非常相似的細(xì)胞，而且顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，這種細(xì)胞也能傳導(dǎo)聲音振動(dòng)。研究人員下一步將利用人類細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。他們表示，如果這一方法獲得成功，將有望以更自然的方式恢復(fù)失聰患者的聽覺，從而代替使用助聽器和移植耳蝸等傳統(tǒng)治療方法，這對(duì)失聰患者將是一大福音。鴨白介素
2015
06-04

大腸桿菌轉(zhuǎn)化時(shí)免熱激及孵育的方法
中山大學(xué)的徐曉鵬博士向大家介紹了一種質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌時(shí)免熱激及孵育的方法。背景：目前外源質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌的步驟，需要先將質(zhì)粒和感受態(tài)細(xì)胞在冰上撫育半小時(shí)，然后42度熱激90秒，加液體培養(yǎng)基緩搖1個(gè)小時(shí)左右再離心涂板。其中熱激步驟溫度和時(shí)間要求嚴(yán)格，熱激后大量菌細(xì)胞死亡，還要經(jīng)過液體培養(yǎng)基撫育才能涂板。這個(gè)方法我們一直在用，質(zhì)粒可以成功轉(zhuǎn)進(jìn)菌體中，只要感受態(tài)細(xì)胞沒有問題，其轉(zhuǎn)化率和使用熱激法差不多，而且若是新鮮制備的感受態(tài)細(xì)胞，轉(zhuǎn)化率甚至更高。可以省下42度水浴裝置的儀器，還節(jié)省了至少1個(gè)小時(shí)的時(shí)
2015
06-03

透析袋的使用方法
ELISA透析的動(dòng)力是擴(kuò)散壓，擴(kuò)散壓是由橫跨膜兩邊的濃度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度，正比于欲透析的小分子溶質(zhì)在膜內(nèi)外兩邊的濃度梯度，還正比于膜的面積和溫度，通常是4℃透析，升高溫度可加快透析速度。透析膜可用動(dòng)物膜和玻璃紙等，但用的zui多的還是用纖維素制成的透析膜，目前常用的是美國(guó)UnionCarbide（聯(lián)合碳化物公司）和美國(guó)光譜醫(yī)學(xué)公司的各種尺寸的透析管，截留分子量MwCO（即留在透析袋內(nèi)的生物大分子的zui小分子量，縮寫為MwCO）通常為1萬(wàn)左右。商品透析袋制成管狀，其扁平寬度為
2015
06-02

培養(yǎng)基的鑒別和配方
EMB培養(yǎng)基：常用于鑒別E.coli蛋白胨10g乳糖5g蔗糖5g磷酸氫二鉀2g伊紅Y0.4g美藍(lán)0.065g蒸餾水1000gpH7.22216E培養(yǎng)基配方分離海洋微生物的培養(yǎng)基配方蛋白胨5g酵母膏1g磷酸高鐵0.01g瓊脂15~20g陳海水1000ml煮沸氫氧化鈉的溶液調(diào)PH值7.6~7.8HumanAndrogenBindingProtein,ABPELISAKit人雄激素結(jié)合蛋白(ABP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48THumananapasticlymphomakinase,ALKEL
2015
06-01

沙雷菌肺炎的體征
沙雷菌肺炎的體征：1.癥狀與一般急性細(xì)菌性肺炎相似，ELISA主要表現(xiàn)為發(fā)熱、寒戰(zhàn)、咳嗽、咯血痰或假性血痰或黃痰、呼吸困難、胸痛。但對(duì)于醫(yī)院獲得性感染及原有肺部感染疾病的繼發(fā)性沙雷菌肺炎者，則癥狀不典型，可因原發(fā)病癥狀掩蓋了肺炎癥狀，同時(shí)發(fā)熱、咳嗽、咳黃痰可是原發(fā)病癥狀。但這時(shí)病人往往有病情加劇，可出現(xiàn)呼吸衰竭，心衰或突發(fā)性的高熱、咳黃膿痰增多。2.體征雙肺可聞及干濕性啰音，當(dāng)肺葉或肺段出現(xiàn)實(shí)變時(shí)，可有相應(yīng)肺段、肺葉的語(yǔ)顫增強(qiáng)，叩濁、可聞及支氣管呼吸音。危重病人可能有呼吸急促、發(fā)紺及休克等。EL
2015
05-29

酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA ）
檢測(cè)方法elisa試劑盒酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）利用免疫學(xué)抗原抗體特異性結(jié)合和酶的催化作用，通過化學(xué)方法將植物辣根過氧化物酶（HRP）與克倫特羅（CL）結(jié)合，形成酶偶聯(lián)克倫特羅。將固相載體上已包被的抗體（羊抗兔IgG抗體）與特異性的抗克倫特羅抗體結(jié)合，然后加入待測(cè)克倫特羅和酶偶聯(lián)克倫特羅，它們競(jìng)爭(zhēng)性與克倫特羅抗體結(jié)合，洗滌后加底物，根據(jù)有色物的變化計(jì)量待測(cè)克倫特羅量。若待測(cè)克倫特羅多，則被結(jié)合的酶偶聯(lián)克倫特羅少，有色物量就少。用目測(cè)法或比色法測(cè)定樣品中的克倫特羅含量，比色的*波長(zhǎng)為450nm
2015
05-28

Elisa試劑盒中比色法的內(nèi)容
其次，單波長(zhǎng)或雙波長(zhǎng)比色選擇的問題。ELISA試劑盒所謂的單波長(zhǎng)比色即是通常的以對(duì)顯色具有zui大吸收的波長(zhǎng)如450nm或492nm進(jìn)行比色測(cè)定；而雙波長(zhǎng)雙色則酶標(biāo)儀在敏感波長(zhǎng)如450nm和非敏感波長(zhǎng)630nm下各測(cè)定一次，敏感波上下的吸光度測(cè)定值為樣本測(cè)定酶反應(yīng)特異顯色的吸光度與板孔上指紋、刮痕、灰塵等臟物所致的吸光度之和；非敏感波長(zhǎng)下測(cè)定即改變波長(zhǎng)至一定值，使得樣本測(cè)定酶反應(yīng)特異顯色的吸光度值為零，此時(shí)測(cè)得的吸光度即為臟物的吸光度值。zui后酶標(biāo)儀給出的數(shù)值為敏感波長(zhǎng)下的吸光度值與非常感波長(zhǎng)
2015
05-27

ELISA干細(xì)胞和再生醫(yī)學(xué)
來(lái)自Salk研究所的科學(xué)家們發(fā)現(xiàn)了一類新型的多能干細(xì)胞（能夠發(fā)育成為所有的組織類型），它們的特性與在發(fā)育胚胎中的位置密切相關(guān)。與科學(xué)研究中傳統(tǒng)采用的干細(xì)胞相比，這些細(xì)胞呈現(xiàn)出時(shí)間相關(guān)的發(fā)育階段。他們的研究論文發(fā)表在5月6日的《自然》（Nature）雜志上。論文的資深作者是Salk生物研究所資深教授JuanCarlosIzpisuaBelmonte。Belmonte教授主要從事干細(xì)胞和再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究，利用多種模式生物和人多能干細(xì)胞等工具探索心臟和血管等系統(tǒng)的發(fā)育與再生，以及通過體細(xì)胞重編程、去
2015
05-25

試劑空白和樣品空白的區(qū)別
測(cè)試試劑的空白值對(duì)于一項(xiàng)測(cè)試非常重要，當(dāng)進(jìn)行低濃度測(cè)定時(shí)應(yīng)該從測(cè)試結(jié)果中扣除測(cè)試試劑的空白值。例如，如果從0.06mg/L的低濃度測(cè)試結(jié)果中減掉0.02mg/L的試劑空白值，就會(huì)使zui終測(cè)定結(jié)果改變至少30%。而從1.23mg/L的高濃度測(cè)試結(jié)果中減掉0.02mg/L的試劑空白值，zui終測(cè)定結(jié)果只發(fā)生了2%的變化。測(cè)定試劑的空白值時(shí)，需要使用高質(zhì)量的去離子水代替待測(cè)樣品，加入測(cè)試試劑，按照操作步驟，進(jìn)行常規(guī)測(cè)試。然后，從樣品的測(cè)定結(jié)果中減去測(cè)試試劑的空白值。不同批次的測(cè)試試劑其空白值會(huì)有所變
2015
05-22

免疫組化“雜音”染色種類繁多
“雜音”染色種類繁多，產(chǎn)生的原因也多種多樣，為了便于說明，筆者將其歸納為下面幾種。1、灶片狀著色切片中著色區(qū)東一塊西一塊，呈灶片狀分布，出現(xiàn)這種問題的原因有：（1）裱片時(shí)水未排盡，在局部形成氣泡使組織突起，染色時(shí)試劑滲入后不易洗盡，顯色過深所致。解決辦法是，漂片盒里的氣泡應(yīng)去盡，晾片熱臺(tái)不能平放，應(yīng)有45度左右的斜度，利于水流走和蒸發(fā)。（2）壞死組織灶，組織壞死后細(xì)胞破壞、酶的釋放、蛋白游離、分解，復(fù)雜的肽鏈殘段（如Fc段）可能與一抗或/和二抗結(jié)合導(dǎo)致zui終著色。解決辦法是在選擇染色切片時(shí)應(yīng)避
2015
05-21

細(xì)胞簡(jiǎn)易不污染的配液方法
細(xì)胞具體配液方法：*步，配制1L培養(yǎng)液。培養(yǎng)基中含有酚紅指示劑，偏堿時(shí)液體為深紅或紫色，偏酸時(shí)則呈黃色。取配1L培養(yǎng)液的粉劑培養(yǎng)基，加入750ml三蒸水或去離子水，搖勻(一般培養(yǎng)液呈橘紅色)；再加入碳酸氫鈉1～1．1g，至*溶解(呈深紅色)；zui后再加三蒸水或去離子水至1L止。第二步，插吸管于配好的培養(yǎng)液內(nèi)，通入二氧化碳?xì)怏w。隨著二氧化碳?xì)獾娜谌?，液體逐漸變成黃色。用一次性0．22m孔徑的濾膜于正壓情況下將該液體過濾除菌。在此過程中，由于部分二氧化碳?xì)怏w溢出，液體漸成橘黃色。此時(shí)迅速將其分裝到
2015
05-20

ELISA試劑提升疫苗免疫效果改善免疫機(jī)能
動(dòng)物體是由復(fù)雜的組織器官構(gòu)成，每個(gè)系統(tǒng)相互依賴和彼此支援，各個(gè)器官若受到病原體或其他各種應(yīng)激因素侵?jǐn)_或損傷，這些器官的生理功能就難以正常發(fā)揮，而ELISA試劑免疫系統(tǒng)就是這些器官的保護(hù)神，猶如強(qiáng)大的*一樣，發(fā)揮著防衛(wèi)和修復(fù)功能的特殊作用。因此，呵護(hù)免疫器官，啟動(dòng)免疫系統(tǒng)，激活免疫功能，是動(dòng)物機(jī)體健康的根本。免疫是機(jī)體識(shí)別和排除抗原性異物，維持自身穩(wěn)定和平衡的一種生理功能。ELISA試劑免疫系統(tǒng)是一個(gè)分布于全身的能的網(wǎng)路體系，包括免疫器官（中樞免疫器官、周邊免疫器官）、免疫細(xì)胞（如T細(xì)胞、B細(xì)胞、
2015
05-19

ELISA檢測(cè)試劑盒基礎(chǔ)的類型
ELISA檢測(cè)試劑盒可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體。在這種測(cè)定方法中有三個(gè)必要的試劑：（1）固相的抗菌素原或抗體，即"免疫吸附劑"（immunosorbent）；（2）酶標(biāo)記的抗原或抗體，稱為"結(jié)合物"（conjugate）；（3）酶反應(yīng)的底物。ELISA檢測(cè)試劑盒根據(jù)試劑的來(lái)源和標(biāo)本的情況以及檢測(cè)的具體條件，可設(shè)計(jì)出各種不同類型的檢測(cè)方法。假使在被測(cè)分子的不同位點(diǎn)上含有多個(gè)相同的決定簇，例如HBsAg的a決定簇，也可用針對(duì)此決定的同一單抗分別包被固相和制備酶結(jié)合物。但在HBsAg的檢測(cè)中應(yīng)注

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