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						上海徠同生物科技有限公司
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            免疫共沉淀Co-IP實驗介紹2021/11/26
            
					
            
				免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation,Co-IP）：蛋白質(zhì)是細(xì)胞活性和功能的執(zhí)行者，且蛋白質(zhì)是依靠蛋白間相互作用執(zhí)行功能的，因而研究蛋白的相互作用對于研究細(xì)胞活性和功能、解釋生命過程和現(xiàn)象具有重要意義。實驗原理免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，CoIP）是研究蛋白-蛋白間相互作用的經(jīng)典方法，屬于免疫沉淀技術(shù)的一類，常被用于鑒定特定蛋白復(fù)合物的中未知蛋白組分。免疫共沉淀的設(shè)計理念是，假設(shè)一種已知蛋白是某個大的蛋白復(fù)合物的組成成員，那么利用這種蛋白的特異性
					
            
				
            
								
            
					
            細(xì)胞寄送注意事項2021/11/26
            
					
            
				細(xì)胞寄送注意事項細(xì)胞寄送方式可選擇冷凍儲存運輸和充液法常溫運輸(1)冷凍儲存運輸：干冰運輸凍存細(xì)胞，外地寄送根據(jù)溫度和寄送時間，一般約需要5-10kg干冰。(2)充液法常溫運輸：一般選擇生長良好的細(xì)胞，以生長1/3～1/2瓶底壁為宜，去掉舊培養(yǎng)液，補充新的培養(yǎng)液至瓶頸部，保留微量空氣，擰緊瓶蓋，并用封口膜密封，放在一運送盒內(nèi)，用棉花等做防震防壓處理。運輸總時長不超過4天，運輸過程中低氣溫在0度以上，到達(dá)目的地后倒出多余的培養(yǎng)液，只需保留維持生長所需的培養(yǎng)液置37℃培養(yǎng)，次日傳代。
					
            
				
            
								
            
					
            細(xì)胞收樣注意事項2021/11/26
            
					
            
				客戶提供細(xì)胞需滿足以下要求：(1)需要我公司進(jìn)行傳代培養(yǎng)的細(xì)胞，需告知細(xì)胞名稱、培養(yǎng)條件等信息，目前我公司對無細(xì)胞名稱的細(xì)胞將不提供凍存服務(wù)，無培養(yǎng)條件的細(xì)胞將無法提供及時的傳代培養(yǎng)等操作，敬請知曉；(2)客戶提供的可直接進(jìn)行實驗的細(xì)胞，需保證細(xì)胞量，具體細(xì)胞量可根據(jù)實驗咨詢技術(shù)人員，流式檢測樣品需提供熒光信息；(3)寄送凍存細(xì)胞需用液氮或者干冰保存運輸；(4)寄送培養(yǎng)細(xì)胞需擰緊培養(yǎng)瓶，封口膜封好，常溫運輸，嚴(yán)禁冰凍，長途運輸需裝滿培養(yǎng)基；(5)客戶提供的細(xì)胞需保證細(xì)胞的生長狀態(tài)，細(xì)胞狀態(tài)以我公
					
            
				
            
								
            
					
            實驗外包的優(yōu)勢有哪些2021/11/25
            
					
            
				1.省時實驗耗時是非常多的，換句話說周期很長，占用了大量的工作及生活時間。實驗外包可以節(jié)省大量時間，可以讓SCI論文在短時間內(nèi)獲得寫作素材，讓課題迅速完成。通過實驗外包可以用有限資源完成更多的項目，不必從簡單耗時得工作做起，讓您把更多的時間投入到專業(yè)的工作中，使工作更有效率。2.省錢實驗所需的儀器太貴，買不起，借不來，如seq，芯片等。實驗外包可以節(jié)省購買儀器的成本，不會造成實驗器材得浪費?？傮w而言，實驗外包服務(wù)的價格其實比不算貴，花錢買時間是為了讓自己的時間更值錢。3.專業(yè)一些需要專業(yè)操作，或
					
            
				
            
								
            
					
            常見實驗項目樣本收集、保存、運輸要求2021/11/25
            
					
            
				一、分子生物學(xué)平臺1.熒光定量PCR樣本收集運輸A.細(xì)胞：a.貼壁細(xì)胞以6孔板培養(yǎng)的細(xì)胞為例，吸掉培養(yǎng)基，用PBS洗一次，吸掉PBS，加1mlTrizol，將底部細(xì)胞吹打起來，轉(zhuǎn)入1.5mlEP管，裂解細(xì)胞。-80度凍存，干冰運輸。b.懸浮細(xì)胞將培養(yǎng)基及細(xì)胞轉(zhuǎn)入1.5mLEP管，5000轉(zhuǎn)3min離心，離心完吸掉上清，加1mLTrizol，吹打混勻，裂解細(xì)胞。-80度凍存，干冰運輸。c.貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞混合將底部細(xì)胞吹打起來，轉(zhuǎn)入1.5mLEP管，5000轉(zhuǎn)3min離心，離心完吸掉上清，加1m
					
            
				
            
								
            
					
            Western-blot樣品處理注意事項2021/11/25
            
					
            
				樣品處理及保存1、懸浮細(xì)胞樣品：把細(xì)胞及培養(yǎng)液一起收集到15ml或者50ml離心管中，1500rpm離心3min，棄去上清；加入10ml冷PBS輕輕吹打，1500rpm，4℃離心3min，棄去上清；反復(fù)2次；第二次棄去上清后，用1ml冷PBS重懸細(xì)胞，移入1.5ml微型離心管，2500rpm（500g），4℃離心5分鐘，盡量去除所有殘留上清，于-80度或者液氮凍存待用。在避免凍融的情況下，一般保存1年，建議盡快檢測。2、貼壁細(xì)胞樣品：2.1胰酶消化：用胰酶將細(xì)胞消化后，含血清的培養(yǎng)基中和胰酶，吹
					
            
				
            
								
            
					
            Western blot檢測樣本收集運送注意事項2021/11/25
            
					
            
				樣本運輸條件及保存條件組織樣本:1.組織樣本應(yīng)立即放置-20℃。2.運輸過程采用液氮，干冰，市內(nèi)運輸可選用冰袋。3.樣本量不低于100mg。4.請告知組織種屬和類型，如肝,脾等。細(xì)胞樣本1.有嚴(yán)格時間節(jié)點的實驗需客戶自行裂解樣本，提取蛋白，采用干冰運輸。2.客戶離心搜集好的細(xì)胞、懸浮細(xì)胞、貼壁細(xì)胞都需用冰袋維持4℃運輸，不可使用干冰和液氮。3.所提供細(xì)胞量不低于106。特殊樣本1.全血采用冰袋維持4℃運輸，嚴(yán)禁用干冰和液氮運輸，血清和血漿可采用液氮，干冰，冰袋運輸。2.植物組織應(yīng)采用干冰或液氮運
					
            
				
            
								
            
					
            常見問題解惑---慢病毒2021/11/25
            
					
            
				常見問題解惑---慢病毒一、慢病毒是什么？慢病毒是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種，具有逆轉(zhuǎn)錄病毒的基本結(jié)構(gòu)和特性：整合入宿主細(xì)胞基因組，長期表達(dá)，可用于轉(zhuǎn)基因動物制備；但也有不同于逆轉(zhuǎn)錄病毒的組份和特性：比逆轉(zhuǎn)錄病毒具有更高的滴度，不僅可以感染分裂期細(xì)胞，更重要的，還能感染非分裂期的細(xì)胞。吉凱提供的慢病毒為“zx”性病毒，即病毒感染目的細(xì)胞后不會再感染其他細(xì)胞，也不會利用宿主細(xì)胞產(chǎn)生新的病毒顆粒。慢病毒中的毒性基因已經(jīng)被剔除并被外源性目的基因所取代，屬于假型病毒。但該病毒仍然具有可能的潛在的生物學(xué)危險二、慢病
					
            
				
            
								
            
					
            細(xì)胞能量代謝服務(wù)Seahorse XF實驗中常見問題之三2021/11/24
            
					
            
				Qustions&解答AnswersSeahorseXF實驗常見問題及解答29Seahorse數(shù)據(jù)分析軟件Wave可以免費下載安裝嗎？是的，可在安捷倫找到Wave軟件下載，并且免費下載安裝。30SeahorseXF儀器模板選項中沒有想檢測試劑盒的模板怎么辦？可在桌面板wave軟件中將相應(yīng)實驗?zāi)０逑葘?dǎo)出到U盤中，再導(dǎo)入XF儀器模板庫即可。31Seahorse數(shù)據(jù)分析軟件導(dǎo)出選項中沒有對應(yīng)的reportgenerator？當(dāng)軟件導(dǎo)出選項中無相應(yīng)的reportgenerator時，請移步到Agilen
					
            
				
            
								
            
					
            細(xì)胞能量代謝服務(wù)Seahorse XF實驗中常見問題之二2021/11/24
            
					
            
				Qustions&解答AnswersSeahorseXF實驗常見問題及解答16可以在Seahorse檢測液中加入血清嗎？不建議加入血清（如：FBS），因為其會影響檢測液的緩沖能力，并可能與進(jìn)行檢測的藥物/化合物發(fā)生非特異性結(jié)合而影響檢測效果，同時容易產(chǎn)生氣泡。另外，使用加入血清的檢測液溶解藥物加載至探針板加藥孔中進(jìn)行注射時，會出現(xiàn)漏藥或加藥注射失敗。17加入底物的檢測液在多長時間內(nèi)可保持穩(wěn)定？或可以提前配好檢測液和藥物嗎？Seahorse檢測液在實驗當(dāng)天現(xiàn)用現(xiàn)配。藥物也要現(xiàn)配現(xiàn)用，溶解后的藥物要
					
            
				
            
								
            
					
            細(xì)胞能量代謝服務(wù)Seahorse XF實驗中常見問題之一2021/11/24
            
					
            
				Qustions&解答AnswersSeahorseXF實驗常見問題及解答01可以使用超出保質(zhì)期的探針板或重復(fù)使用探針板嗎？Agilent無法保證因使用超出保質(zhì)期的探針板或重復(fù)使用探針板而得到的實驗數(shù)據(jù)質(zhì)量(有效性)，為得到最佳的、最真實的數(shù)據(jù)，請使用有效期內(nèi)的探針板及其它消耗品。02探針板水化超出水化時間怎么辦？Agilent建議將探針板放入37℃無CO2培養(yǎng)箱中水化過夜以得到*結(jié)果。最短水化時間是37℃水化12小時。探針板最長水化時間是37℃水化72小時，但由于液體蒸發(fā)需要補充(或更換)校準(zhǔn)
					
            
				
            
								
            
					
            Seahorse XF實時ATP速率測定技術(shù)服務(wù)中常見問題2021/11/24
            
					
            
				實驗背景細(xì)胞三磷酸腺苷(ATP)的產(chǎn)生速率是一種描述細(xì)胞代謝的信息含量很高的測量，因為ATP是細(xì)胞內(nèi)普遍存在的主要能量貨幣。細(xì)胞的代謝調(diào)控使細(xì)胞根據(jù)ATP需求的變化調(diào)整ATP產(chǎn)生的變化來維持總的細(xì)胞內(nèi)的ATP水平。安捷倫SeahorseXF實時ATP速率測定被設(shè)計用來測量活細(xì)胞總的ATP產(chǎn)生速率。更重要的是，這個實驗?zāi)軌騾^(qū)分哺乳動物細(xì)胞內(nèi)兩條主要的產(chǎn)生ATP的代謝途徑線粒體氧化磷酸化（OXPHOS）和糖酵解ATP的產(chǎn)生。常見問題如果檢測液中含有不同的氧化底物（不同的P/O值），mitoATP產(chǎn)生
					
            
				
            
								
            
					
            Seahorse XF 細(xì)胞線粒體壓力測試技術(shù)服務(wù)2021/11/24
            
					
            
				SeahorseXF細(xì)胞線粒體壓力測試SeahorseXF細(xì)胞線粒體壓力測試全面了解線粒體功能1、實驗背景安捷倫SeahorseXF細(xì)胞線粒體壓力測試通過在SeahorseXFe和XF細(xì)胞外流量分析儀上直接測量細(xì)胞的氧消耗速率（OCR）來表征線粒體功能的關(guān)鍵參數(shù)。它是基于培養(yǎng)板的活細(xì)胞實驗，能夠?qū)崟r監(jiān)測OCR。實驗使用XF傳感器探針板內(nèi)置的加藥孔在實驗過中將呼吸作用的調(diào)節(jié)劑加入細(xì)胞孔中，從而得到反映線粒體功能的關(guān)鍵參數(shù)。實驗試劑盒里的調(diào)節(jié)劑為寡霉素（Oligomycin），羰基氰-4（三氟甲氧基
					
            
				
            
								
            
					
            細(xì)胞血管生成實驗原理2021/11/23
            
					
            
				細(xì)胞血管生成實驗細(xì)胞血管生成技術(shù)服務(wù)介紹血管生成是腫瘤發(fā)生過程中新血管的形成。它是指源于已存在的毛細(xì)血管和毛細(xì)血管后微靜脈的新的毛細(xì)血管性血管的生長。腫瘤血管生成是一個極其復(fù)雜的過程，一般包括包括血管內(nèi)皮基質(zhì)降解、內(nèi)皮細(xì)胞移行、內(nèi)皮細(xì)胞增殖、內(nèi)皮細(xì)胞管道化分支形成血管環(huán)和形成新的基底膜等步驟。細(xì)胞血管生成客戶需知1）、客戶需提供生長狀態(tài)良好的實驗細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)條件；2）、客戶需準(zhǔn)確告知實驗設(shè)計內(nèi)容，如樣本濃度等。
					
            
				
            
								
            
					
            Transwell測細(xì)胞遷移原理2021/11/23
            
					
            
				Transwell測細(xì)胞遷移Transwell測細(xì)胞遷移技術(shù)服務(wù)介紹將培養(yǎng)細(xì)胞上層小室放入培養(yǎng)板中，上下層培養(yǎng)液以聚碳酸酯膜相隔，將研究的細(xì)胞種在上室內(nèi)，下層培養(yǎng)液中的成分可以影響到上室內(nèi)的細(xì)胞，應(yīng)用不同孔徑和經(jīng)過不同處理的聚碳酸酯膜，就可以進(jìn)行共培養(yǎng)、細(xì)胞趨化、細(xì)胞遷移、細(xì)胞侵襲等多種方面的研究。該實驗細(xì)分為如下4類：細(xì)胞共培養(yǎng)：兩種細(xì)胞聯(lián)合培養(yǎng)，研究其中一種細(xì)胞分泌的因子對另一細(xì)胞性能的影響，此時選擇小于3.0um孔徑，細(xì)胞不會遷移通過，將細(xì)胞A種于上室，細(xì)胞B種于下室，可以研究細(xì)胞B分泌或
					
            
				
            
								
            
					
            細(xì)胞劃痕實驗原理介紹2021/11/23
            
					
            
				細(xì)胞劃痕實驗細(xì)胞劃痕實驗技術(shù)服務(wù)介紹細(xì)胞劃痕(修復(fù))法是一種簡捷的測定細(xì)胞遷移運動與修復(fù)能力的方法，類似體外傷口愈合模型。在體外培養(yǎng)皿或平板培養(yǎng)的單層貼壁細(xì)胞上，用微量槍頭或其他硬物在細(xì)胞生長的中央?yún)^(qū)域劃線，去除中央的細(xì)胞，然后繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞至設(shè)定時間(采用無血清或低血清(排除細(xì)胞增殖的影響)，取出培養(yǎng)板，觀察周邊細(xì)胞是否生長(修復(fù))至中央劃痕區(qū)，以此判斷細(xì)胞的生長遷移能力。通常設(shè)定正常對照組與實驗組，實驗組中添加某些處理因素或藥物、外源性基因等，通過不同分組之間的細(xì)胞對于劃痕區(qū)的修復(fù)能力，判斷比
					
            
				
            
								
            
					
            MTT檢測細(xì)胞增殖檢測2021/11/23
            
					
            
				MTT檢測細(xì)胞增殖檢測技術(shù)服務(wù)介紹MTT比色法，是一種檢測細(xì)胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜能溶解細(xì)胞中的甲瓚，用酶聯(lián)免疫檢測儀在特定波長處測定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。CCK-8檢測試劑盒是應(yīng)用WST-8取代MTT被還原，WST-8是一種類似于MTT的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的甲瓚。WST-8產(chǎn)生的甲瓚比XTT和MTS
					
            
				
            
								
            
					
            TUNEL細(xì)胞凋亡檢測實驗2021/11/23
            
					
            
				TUNEL細(xì)胞凋亡檢測TUNEL細(xì)胞凋亡檢測技術(shù)服務(wù)介紹TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(TUNELApoptosisAssay)是一種高靈敏度又快速簡便的細(xì)胞凋亡檢測方法。對于待檢測的細(xì)胞或組織樣品，經(jīng)過生物素標(biāo)記和后續(xù)的DAB顯色等步驟，即可在普通光學(xué)顯微鏡下觀察到凋亡細(xì)胞。TUNEL細(xì)胞凋亡檢測技術(shù)服務(wù)內(nèi)容服務(wù)內(nèi)容結(jié)果內(nèi)容石蠟切片檢測報告，照片冰凍切片細(xì)胞爬片實驗結(jié)果展示TUNEL細(xì)胞凋亡檢測客戶須知樣本要求：取材保持組織新鮮（組織塊以小于2cm×1.5cm×0.3cm為宜），立即放入固定液中（固定
					
            
				
            
								
            
					
            同位素標(biāo)記定量實驗2021/11/22
            
					
            
				同位素標(biāo)記定量iTRAQ（isobaricTagsforRelativeａndAbsoluteQuantitation）&TMT（TandemMassTags）分別由ABSciex公司和Thermo公司研發(fā)的多肽體外標(biāo)記定量技術(shù)，利用多種同位素試劑標(biāo)記蛋白多肽N末端或者賴氨酸側(cè)鏈基團(tuán)，不同分子量的試劑對不同來源的樣品進(jìn)行標(biāo)記從而實現(xiàn)不同樣品間蛋白質(zhì)組的比較。iTRAQ/TMT試劑由三部分組成：報告基團(tuán)、平衡基團(tuán)和反應(yīng)基團(tuán)。反應(yīng)基團(tuán)形成2-10種等質(zhì)量同位素標(biāo)簽。iTRAQ/TMT試劑標(biāo)記酶解后的
					
            
				
            
								
            
					
            瓊脂糖凝膠電泳原理2021/11/22
            
					
            
				瓊脂糖凝膠電泳脂糖凝膠電泳原理脂糖凝膠電泳的分析原理與其他支持物電泳最主要區(qū)別是：它兼有“分子篩”和“電泳”的雙重作用。瓊脂糖凝膠具有網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，物質(zhì)分子通過時會受到阻力，大分子物質(zhì)在涌動時受到的阻力大，因此在凝膠電泳中，帶電顆粒的分離不僅取決于凈電荷的性質(zhì)和數(shù)量，而且還取決于分子大小，這就大大提高了分辨能力?，F(xiàn)廣泛應(yīng)用于核酸的研究中。核酸會根據(jù)pH不同帶有不同電荷，在電場中受力大小不同，因此跑的速度不同，根據(jù)這個原理可將其分開。實驗步驟1.制膠：使用電泳緩沖液在制膠器上配制1.0%的瓊脂糖凝膠2
					
            
				
            
							
				
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