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						上海撫生實(shí)業(yè)有限公司
            初級(jí)會(huì)員 | 第8年
            
					
            
				
            
			
            
		
            
	
            
	
	
            
		
            
			
		
            
	
            

            

	
            
		
            
			
			
            
							
            
					
            酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）實(shí)驗(yàn)各封閉劑優(yōu)缺點(diǎn)2024/11/25
            
					
            
				酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay，ELISA）是免疫學(xué)和分子生物學(xué)中廣泛使用的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)，是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發(fā)生的高選擇性高特異性識(shí)別和結(jié)合原理，對(duì)待測(cè)抗體或者抗原進(jìn)行分析測(cè)定的方法。封閉（blocking）是繼包被之后用高濃度的無關(guān)蛋白質(zhì)溶液再包被的過程?？乖蚩贵w包被時(shí)所用的濃度較低，吸收后固相載體表面尚有未被占據(jù)的空隙，封閉就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些空隙，從而排斥在ELISA試劑盒其后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附。在免疫學(xué)實(shí)
					
            
				
            
								
            
					
            PCR實(shí)驗(yàn)DNA復(fù)制酶系作用順序2024/11/18
            
					
            
				DNA的半保留復(fù)制：DNA復(fù)制時(shí)，以親代DNA的兩條鏈分別作為模板，在DNA聚合酶的催化下，按堿基互補(bǔ)的原則合成兩條與模板鏈互補(bǔ)的新鏈，組成新的DNA分子，新形成的兩個(gè)子代DNA與親代DNA的堿基順序全一樣。由于子代DNA分子中一條鏈來自親代，而另一條鏈?zhǔn)切潞铣傻?，因此這種復(fù)制方式稱為半保留復(fù)制(semi-conservativereplication)。DNA的復(fù)制過程：DNA復(fù)制酶系作用順序：1.拓?fù)洚悩?gòu)酶使DNA超螺旋結(jié)構(gòu)解開，形成其基本的雙螺旋結(jié)構(gòu)。2.解鏈酶使DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)解開，堿基
					
            
				
            
								
            
					
            PCR血液標(biāo)本保存方法及注意事項(xiàng)2024/11/13
            
					
            
				最好是用淋巴細(xì)胞分離液把單個(gè)核細(xì)胞分離出來，然后-80℃保存。外周血單個(gè)核細(xì)胞（Peripheralbloodmononuclearcell,PBMC）的分離是免疫學(xué)研究中的一項(xiàng)基本技術(shù)。目前國(guó)內(nèi)外分離PBMC的常用方法是葡聚糖-泛影葡胺密度梯度離心法（ficoll-hypaquedensitygradientcentrifugation），用此方法分離PBMC純度可達(dá)95％，淋巴細(xì)胞約占90％，其中T淋巴細(xì)胞占80％，B淋巴細(xì)胞占4～10％。ficoll-hypaque混合溶液，又稱淋巴細(xì)胞分
					
            
				
            
								
            
					
            培養(yǎng)基的配置基本原則匯集2024/10/28
            
					
            
				培養(yǎng)基是指供給微生物、植物或動(dòng)物（或組織）生長(zhǎng)繁殖的，由不同營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)組合配制而成的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機(jī)鹽（包括微量元素）、維生素和水等幾大類物質(zhì)。培養(yǎng)基既是提供細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)和促使細(xì)胞增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)，也是細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖的生存環(huán)境。培養(yǎng)基的配置基本原則：1、選擇適宜的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)總體而言，所有微生物生長(zhǎng)繁殖均需要培養(yǎng)基含有碳源、氮源、無機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子、水及能源，但由于微生物營(yíng)養(yǎng)類型復(fù)雜，不同微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求是不一樣的，因此首先要根據(jù)不同微生物的營(yíng)養(yǎng)需求配制針對(duì)性強(qiáng)的培養(yǎng)基。自
					
            
				
            
								
            
					
            ?免疫PCR實(shí)驗(yàn)主要程序及步驟2024/10/21
            
					
            
				PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）是一種分子生物學(xué)技術(shù)，現(xiàn)在已經(jīng)被廣泛運(yùn)用于臨床和實(shí)驗(yàn)室，用于擴(kuò)增特定的DNA片段。它的基本原理就是在體外模擬細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制的條件，最終完成特定基因的體外復(fù)制。主要程序：（1）抗原+生物素化抗體→抗原-生物素化抗體復(fù)合物；（2）加親合素→抗原-生物素化抗體-親合素復(fù)合物；（3）加生物素化DNA→抗原-生物素化抗體-親合素-生物素化DNA；（4）PCR擴(kuò)增生物素化DNA部分。實(shí)驗(yàn)步驟：（1）制備生物素化DNA將噬粒BLuescriptskt,用生物素標(biāo)記的M13引物進(jìn)行PC
					
            
				
            
								
            
					
            實(shí)時(shí)熒光定量 PCR (RT-qPCR)原理及熒光技術(shù)方法2024/10/14
            
					
            
				實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-qPCR)是一種用于實(shí)時(shí)擴(kuò)增和檢測(cè)特定DNA或RNA序列的分子生物學(xué)技術(shù)。該方法利用熒光染料或探針，當(dāng)與擴(kuò)增的DNA或RNA分子結(jié)合時(shí)會(huì)發(fā)出信號(hào)，從而可以對(duì)目標(biāo)序列進(jìn)行量化。RT-qPCR通常用于基因表達(dá)分析、病毒載量定量和基因突變檢測(cè)等應(yīng)用。RT-qPCR原理的三個(gè)主要步驟：1、反轉(zhuǎn)錄：1）、使用逆轉(zhuǎn)錄酶和特定引物將RNA樣品反轉(zhuǎn)錄成cDNA。2）、該步驟將RNA模板轉(zhuǎn)化為更穩(wěn)定且可擴(kuò)增的DNA形式。3）、反轉(zhuǎn)錄過程中使用特定引物。2、PCR擴(kuò)增：1）、使用特定引物對(duì)
					
            
				
            
								
            
					
            影響培養(yǎng)基滅菌效果因素有什么？2024/10/08
            
					
            
				滅菌的方法很多，在實(shí)驗(yàn)室可以使用干熱滅菌、對(duì)于環(huán)境可以使用化學(xué)試劑滅菌，但化學(xué)試劑的滅菌方法有很大的限制。在工業(yè)生產(chǎn)中，對(duì)于培養(yǎng)基、管道、設(shè)備的滅菌，通常采用蒸汽加熱到一定的溫度，并保溫一段時(shí)間的滅菌方法，稱之為濕熱滅菌。濕熱滅菌的顯著優(yōu)點(diǎn)是：使用方便，無污染，而且其冷凝水可以直接冷凝在培養(yǎng)基中，也可以通過管道排出。培養(yǎng)基滅菌的效果，影響因素很多，除了培養(yǎng)基內(nèi)雜菌的種類和數(shù)量，滅菌溫度的高低，時(shí)間長(zhǎng)短外，還取決于：1.營(yíng)養(yǎng)成分的保持濕熱滅菌時(shí)，微生物被殺死的同時(shí)，培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分也遭到了一定的破
					
            
				
            
								
            
					
            微生物培養(yǎng)基相關(guān)資料匯總2024/09/29
            
					
            
				培養(yǎng)基是液體、半固體或固體形式的，含天然或合成成分，用于保證微生物繁殖或保持其活力的物質(zhì)。培養(yǎng)基的制備和使用是微生物實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作的重要環(huán)節(jié)，培養(yǎng)基自身質(zhì)量的優(yōu)劣、保存是否得當(dāng)、配制使用是否正確等都直接影響到檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。一、培養(yǎng)基的購(gòu)置與驗(yàn)收1.購(gòu)置從培養(yǎng)基自身的質(zhì)量來看，不同生產(chǎn)廠家的產(chǎn)品，甚至同一廠家不同批號(hào)的產(chǎn)品都會(huì)存在差異。依據(jù)ISO/IEC17025《檢測(cè)和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力的通用要求》，對(duì)培養(yǎng)基的供應(yīng)企業(yè)進(jìn)行評(píng)價(jià)后選擇合格的供應(yīng)商，這是培養(yǎng)基購(gòu)買過程中重要的步驟。應(yīng)選擇產(chǎn)品市場(chǎng)信譽(yù)
					
            
				
            
								
            
					
            驗(yàn)證生化試劑盒適用方式分述2024/09/23
            
					
            
				通常生化試劑盒可分為液體單試劑和液體雙試劑，前者特別適用于半自動(dòng)生化分析儀和小型自動(dòng)生化分析儀，使用方便，缺點(diǎn)是穩(wěn)定性較差。與單試劑相比，雙試劑提高了抗干擾能力，具有穩(wěn)定性能較好，可消除樣品自身空白等特點(diǎn)。此外還有多項(xiàng)同測(cè)組合試劑、濃縮試劑等。對(duì)新的試劑盒，我們首先要查看其資質(zhì)是否齊全，是否為合法有效試劑，是否有相關(guān)的臨床試驗(yàn)驗(yàn)證等。其次，在本實(shí)驗(yàn)室，可做以下工作來進(jìn)行驗(yàn)證是否適合使用。一、試劑空白吸光度用蒸餾水做空白，用zhi定的空白液加入試劑作為樣品測(cè)試，在測(cè)試主波長(zhǎng)下，記錄測(cè)試啟動(dòng)時(shí)的吸光
					
            
				
            
								
            
					
            ELISA專用酶標(biāo)儀故障解決排除大全2024/09/19
            
					
            
				酶標(biāo)儀即酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀，是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）的專用儀器又稱微孔板檢測(cè)器，酶標(biāo)儀檢測(cè)技術(shù)是一種高通量微孔板檢測(cè)技術(shù)，其核心是一個(gè)比色計(jì)，利用比色法來進(jìn)行分析。因其高靈敏度、高效率及操作簡(jiǎn)便，被廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、生物制藥、體外診斷、食品安全、環(huán)境科學(xué)等多個(gè)領(lǐng)域。任何儀器在使用時(shí)往往都會(huì)出現(xiàn)一些小故障，酶標(biāo)儀儀器也一樣，下面將與大家分享酶標(biāo)儀的一些常見故障及處理方法：1、打印機(jī)不工作⑴、酶標(biāo)儀后部DIL開關(guān)設(shè)置不正確。DIL標(biāo)準(zhǔn)設(shè)置:左下下下下下下上下上上下下上下上上右(人站在儀器后部，
					
            
				
            
								
            
					
            實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制主要方法2024/09/09
            
					
            
				實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制是一系列確保檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性和可靠性的措施和程序。實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制主要包括以下幾方法：標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)監(jiān)控、人員比對(duì)、方法比對(duì)、儀器設(shè)備比對(duì)、留樣復(fù)測(cè)、空白測(cè)試、重復(fù)測(cè)試、回收率試驗(yàn)、校準(zhǔn)曲線的核查以及使用質(zhì)量控制圖等。一、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)監(jiān)控1.1、質(zhì)控過程通常的做法是實(shí)驗(yàn)室直接用合適的有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)樣品作為監(jiān)控樣品，定期或不定期將監(jiān)控樣品以比對(duì)樣或密碼樣的形式，與樣品檢測(cè)以相同的流程和方法同時(shí)進(jìn)行，檢測(cè)室完成后上報(bào)檢測(cè)結(jié)果給相關(guān)質(zhì)量控制人員，也可由檢測(cè)人員自行安排在樣品檢測(cè)時(shí)同時(shí)插人標(biāo)準(zhǔn)物
					
            
				
            
								
            
					
            ELISA酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)目的抗原方法分享2024/09/02
            
					
            
				ELISA酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)是一種廣泛應(yīng)用在測(cè)定液體樣本中的蛋白、抗體、或激素的免疫分析技術(shù)。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)程序，通常是把蛋白、抗體、或激素等（即抗原）直接或是以捕捉抗體（captureAb）固定在固相載體上，再加入一級(jí)檢測(cè)抗體（primarydetectionAb），形成一個(gè)抗原抗體的復(fù)合物。如果該抗體已經(jīng)用酶（enzyme）標(biāo)記了，即可用來直接測(cè)定抗原的量，若無，則可利用另一個(gè)酶標(biāo)記的二級(jí)抗體來測(cè)定抗原的量。測(cè)定抗原量的方法是加入該酶的底質(zhì)（substrate），作用后產(chǎn)生出現(xiàn)的顏色深
					
            
				
            
								
            
					
            干粉培養(yǎng)基原倍液的配制2024/08/29
            
					
            
				1、配制過濾除菌的細(xì)胞培養(yǎng)基(1)閱讀培養(yǎng)基使用說明，確定需要添加何種添加劑（如NaHCO3、L-谷氨酰胺、丙酮酸鈉、HEPES等）。(2)根據(jù)所需將培養(yǎng)基全部倒入一容器中，用少量注射用水（20℃～30℃）將袋內(nèi)殘留培養(yǎng)基洗下，并入容器。加注射用水至總體積的95％，輕微攪拌溶解。(3)加入規(guī)定量的碳酸氫鈉及所要添加的物質(zhì)。(4)輕微攪拌溶解，加注射用水至規(guī)定體積。(5)用1mol/L氫氧化鈉溶液或1mol/L鹽酸溶液調(diào)pH至所需值。(6)用0.22μm濾膜正壓過濾除菌。(7)溶液應(yīng)在2℃－8℃下
					
            
				
            
								
            
					
            ELISA（酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)）測(cè)定結(jié)果計(jì)算方法2024/08/19
            
					
            
				ELISA（酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)）是一種常用的生物化學(xué)分析技術(shù)，用于檢測(cè)特定蛋白質(zhì)或其他生物分子的存在和濃度，ELISA數(shù)據(jù)分析和結(jié)果解讀是實(shí)驗(yàn)過程中至關(guān)重要的一步。ELISA試劑盒在國(guó)內(nèi)有許多種叫法：例如：ELISA檢測(cè)試劑盒、ELISAKit、酶聯(lián)免疫試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒、酶聯(lián)免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等，比較常見的叫法是ELISA檢測(cè)試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒等。ELISA試劑盒自從60-70年代問世以來，得到世界科研工作者的認(rèn)可及推崇，在歐美及中國(guó)獲得很大的推廣，尤其是國(guó)內(nèi)生化
					
            
				
            
								
            
					
            酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）樣本制備處理分述2024/08/12
            
					
            
				酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay，ELISA）是免疫學(xué)和分子生物學(xué)中廣泛使用的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)，能夠應(yīng)用ELISA實(shí)驗(yàn)的樣本種類很多，有血清，血漿，細(xì)胞上清，細(xì)胞裂解液，尿液，關(guān)節(jié)滑液，腦脊液，肺泡灌洗液，各種組織的組織勻漿；采集和處理的方式都不相同。一、血清1、將全血收集到未經(jīng)處理的測(cè)試管中，或者到不含抗凝劑的管中，如BD血清用真空采血管。2、在室溫下連續(xù)孵育20分鐘。3、4℃3,000rpm離心10分鐘。4、立即分裝上清液（血漿）并在-80℃下保存
					
            
				
            
								
            
					
            標(biāo)準(zhǔn)溶液配制和標(biāo)定技術(shù)事項(xiàng)匯總2024/08/05
            
					
            
				標(biāo)準(zhǔn)溶液是指已知準(zhǔn)確濃度的試劑溶液，在容量分析中用作滴定劑，以滴定被測(cè)物質(zhì);或在儀器分析中，用作標(biāo)準(zhǔn)校準(zhǔn)系列來測(cè)定待測(cè)物的含量。標(biāo)準(zhǔn)溶液的取得有兩種方法，一種是用基準(zhǔn)物質(zhì)直接配制，一種是用基準(zhǔn)物質(zhì)或已知準(zhǔn)確濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行標(biāo)定來取得。用于配制或標(biāo)定標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度的-高純度化學(xué)試劑稱為基準(zhǔn)試劑或基準(zhǔn)物質(zhì)，用基準(zhǔn)試劑或基準(zhǔn)物質(zhì)配制成已知準(zhǔn)確濃度的溶液稱為標(biāo)準(zhǔn)溶液。標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度準(zhǔn)確與否直接關(guān)系檢測(cè)結(jié)果的精密度、準(zhǔn)確度。因此配制和標(biāo)定中你必須知道這些事：1、用于配制或標(biāo)定的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度的基準(zhǔn)物質(zhì)必須符
					
            
				
            
								
            
					
            影響ELISA檢測(cè)質(zhì)量因素分析2024/07/30
            
					
            
				ELISA測(cè)定的陽性判斷值,通常是將大量陰性和陽性人群的測(cè)定數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析后確定的,其確定依據(jù)為判斷結(jié)果的假陽性和假陰性率最di。在陽性判斷值周圍一定范圍內(nèi)之外的測(cè)定結(jié)果可歸為可疑,亦即ELISA測(cè)定的“灰區(qū)”?！盎覅^(qū)”的大小可用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法確定。測(cè)定結(jié)果處于“灰區(qū)”的樣本,可通過確認(rèn)試驗(yàn)或追蹤檢測(cè)來確定到底是陽性還是陰性ELISA“灰區(qū)”是把定量分析的正常值范圍引入定性分析而建立的概念?；覅^(qū)的設(shè)置有二種:(1)CO×(1±C),C為該試劑的批內(nèi)C(一般在15%～20%間);(2)CO±2S,S
					
            
				
            
								
            
					
            ELISA測(cè)定結(jié)果通常計(jì)算方法簡(jiǎn)述2024/07/22
            
					
            
				ELISA試劑盒在國(guó)內(nèi)有許多種叫法：例如：ELISA檢測(cè)試劑盒、ELISAKit、酶聯(lián)免疫試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒、酶聯(lián)免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等，比較常見的叫法是ELISA檢測(cè)試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒等。ELISA試劑盒自從60-70年代問世以來，得到世界科研工作者的認(rèn)可及推崇，在歐美及中國(guó)獲得很大的推廣，尤其是國(guó)內(nèi)生化領(lǐng)域的長(zhǎng)足發(fā)展。ELISA生物試驗(yàn)是一種敏感性高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果判斷較客觀等因素，已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)
					
            
				
            
								
            
					
            PCR反應(yīng)準(zhǔn)備工作及操作步驟2024/07/15
            
					
            
				PCR（PolymeraseChainReaction，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）是現(xiàn)代生物學(xué)中一項(xiàng)重要的技術(shù)，能進(jìn)行體外擴(kuò)增DNA序列，為基因組研究和分子診斷提供了有力的工具。PCR原理是指在DNA聚合酶催化下，以母鏈DNA為模板以特定引物為延伸起點(diǎn)，利用脫氧核苷三磷酸(dNTP)，通過變性、退火、延伸等步驟，體外復(fù)制出與母鏈模板DNA互補(bǔ)的子鏈DNA的過程。PCR反應(yīng)開始前的準(zhǔn)備工作：PCR反應(yīng)開始前，你需要準(zhǔn)備好DNA模板（基因組DNA或者反轉(zhuǎn)錄制備的cDNA）,特異性的引物（手動(dòng)設(shè)計(jì)或利用軟件設(shè)計(jì)
					
            
				
            
								
            
					
            影響ELISA檢測(cè)試劑盒測(cè)定結(jié)果操作因素匯集2024/07/08
            
					
            
				ELISA全稱叫酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，ELISA原理：測(cè)定時(shí)，受檢標(biāo)本與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)，用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與溶液中的其他物質(zhì)分開，再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)結(jié)合在固相載體上，加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中要檢測(cè)的目標(biāo)物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。影響ELISA檢測(cè)試劑盒測(cè)定結(jié)果操作因素如下：1、嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作。2、檢測(cè)前應(yīng)將試劑放置室溫平衡半小時(shí)，洗滌液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配，同時(shí)觀察濃縮洗滌
					
            
				
            
							
				
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